如何选择正确的二抗？

二级抗体用于几种免疫分析中，以检测一级抗体的存在。这些抗体与酶、生物分子或荧光染料结合，以检测一抗。与一级抗体不同，二级抗体是针对一级抗体的种类和同种型产生的，通过在多个位置与一级抗体结合来检测一级抗体。

为了成功选择您的第二抗体，您应该考虑以下因素:

确保匹配良好–宿主物种是产生第二抗体的动物，应始终与第一抗体的宿主不同。例如，如果您使用在兔子中产生的一抗，您将需要在不同于兔子的物种（如山羊、驴或小鼠）中产生的抗兔二抗（图1）。

完整抗体还是片段？–实际上，真正的问题应该是“您的主要抗体是单克隆抗体还是多克隆抗体？”这两个问题的答案通常取决于应用程序。单克隆一抗包含单一同种型的免疫球蛋白。因此，使用特异性识别同种型的二抗至关重要。此外，单克隆动物通常饲养在小鼠、兔和大鼠中。因此，如果主要单克隆抗体是小鼠IgG1，您将需要抗小鼠IgG或特异性较低的F（ab）片段抗小鼠IgG。抗体片段适合用于免疫组织化学和免疫荧光，因为它们的体积较小，能够穿透组织。然而，较小的大小可能会限制与片段结合的染料或酶的选择，导致二抗可能不如全抗体敏感。

多克隆一抗包含几种同种型免疫球蛋白g的混合物。因此，为了最大限度地检测目标，最好使用能识别所有同种型的二抗。多克隆抗体通常以全抗体形式（重链+轻链）饲养在兔、山羊、绵羊和驴中，因此第二宿主物种必须用来自不同物种的IgG池进行免疫，从而使纯化的第二抗体能够识别所有形式。例如，如果初级多克隆抗体是山羊IgG，您将需要抗山羊IgG（H+L）。然而，全抗体可能导致高背景和较低的特异性，因为所有免疫球蛋白共享轻链，这增加了交叉反应性（图2）。

根据您的应用选择共轭物-这取决于第二抗体如何检测信号。例如，免疫组织化学、ELISA和蛋白质印迹应用使用基于生物素标记的比色和化学发光检测来放大信号和提高灵敏度，以及与辣根过氧化物酶（HRP）或碱性磷酸酶（AP）作用的酶反应。然而，对于免疫标记、荧光显微镜和流式细胞仪实验，使用荧光染料如Alexa Fluor检测信号，这些荧光染料直接与抗体结合以放大信号和灵敏度。

亲和纯化抗体与交叉吸附抗体–该步骤用于提高抗体的特异性，并可在亲和纯化和交叉吸附中进行区分。大多数二抗通过亲和层析纯化，产生高亲和力抗体。这种抗体通常在IHC使用，因为它们产生最小的非特异性结合，也用于蛋白质印迹检测低丰度蛋白。交叉吸附的第二抗体通常经过额外的纯化步骤，以过滤掉与非靶免疫球蛋白种类结合的成员。这一步骤增加了它们的特异性并减少了非特异性背景。这些抗体是为免疫组织化学等特殊应用而设计的。

总之，二级抗体的选择取决于手头的应用和目标丰度所需的灵敏度和纯化水平以及非特异性结合的风险。

BMA是BMA Biomedicals的缩写，是一家位于瑞士北部巴塞尔地区的小型生物技术公司。

由一群免疫学家、生物化学家和生物学家于1989年创建，其主要活动领域是抗体的开发、生产和营销。2005年，BMA被Chemoforma Inc .收购，chemo forma Inc .是一家长期活跃于免疫支持饲料添加剂生产领域的商业合作伙伴。2013年，Chemoforma Inc .收购了总部位于加州的半岛实验室国际公司，该公司专门从事抗肽抗体和放射免疫分析。

BMA的主要专长在于抗体在免疫组织化学和酶免疫分析（ELISAs）中的应用。生产已适应无胎牛血清的培养基。这不仅是对可持续发展和动物福利的重要贡献，而且产品不含污染性牛抗体。它们通常仅供体外研究使用，但支持将适当的产品给诊断领域的公司。

BMA经营自己的设施，拥有先进的分析和生产基础设施。我们的技术诀窍在于单克隆和多克隆抗体的生产和衍生，以及它们在免疫学技术中的应用。BMA还许可外部组织的产品。这些产品可能处于早期开发阶段，最终将由公司进行生产更新。

BMA的产品范围以客户为导向，包括许多专注于有限或专业应用的产品。有些是由BMA自己生产的，有些是有大量出版记录的常规产品。

BMA的产品重点包括以下领域

• 炎症和传染病
• 止血
• 肿瘤相关疾病
• 兽医试剂，特别是抗猪组织的抗体

免疫组织化学故障排除

弱染色或无染色

过度染色

高背景