日本共立水质测试包PACKTEST WAK-COD

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日本共立水质测试包,共立理化学研究所是日本比较大的水质试剂盒生产厂家,封装试剂是最简单的水质检测工具。将试剂封装在聚乙烯管中,用简单的操作即可测定比分析用试验纸更低的浓度(与本公司产品相比),共有59种水质项目供客户选择:工程管理,排水管理,环境调查,自来水,水管,饮用水检查等.

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WAKO 019-19741 小胶质细胞/巨噬细胞特异性抗体Anti Iba1, Rabbit

特色

小胶质细胞/巨噬细胞特异性抗体Anti Iba1, Rabbit

作用原理及概述:
钙离子作为信号转导通道中的信使,在所有细胞包括中枢神经细胞的生命活动中起重要作用。钙离子与不同的钙结合蛋白结合后进行级联反应。Iba1是能与巨噬细胞和小胶质细胞发生特异性结合的钙结合蛋白,当这些细胞激活后,Iba1的表达量上调,因此Iba1通常作为鉴定小胶质细胞的标记物使用。近来研究发现,小胶质细胞除了提供营养、保护神经的作用外,还被证明可产生NO、TNF- α、IL-1 β等物质,因此将小胶质细胞定义为中枢神经系统中的巨噬细胞样吞噬细胞,具有重要的免疫细胞作用。当病原菌,病毒入侵中枢神经系统时会起免疫监视的作用。近来研究发现,该细胞可能与神经退行性疾病的发生和发展有关。本产品是可与小胶质细胞发生特异性反应的兔多抗,配合对星形胶质细胞有特异性的GFAP单抗,可进行双染色。
抗原: 合成肽(Iba1 的C 末端序列)
外观: TBS 溶液(1mg/ml)
提纯: 抗原亲和提纯
特异性: 对小胶质细胞、巨噬细胞特异反应。不会与神经元、星形胶质细胞发生交叉反应。
能与人、小鼠、大鼠Iba1反应。
用法: ① Iba1抗体,兔源(Immunocytochemistry 用)适合Immunocytochemistry。
只需1 ~ 2 μg/ml即可进行实验。
② Iba1抗体,兔源(Western blotting 用)适合Western blotting。
只需0.5 ~ 1μg/ml即可进行实验。
l 兔源细胞的双染色及同视野的相差显微镜图

绿色:Iba1抗体,兔源(Immunocytochemistry 用)(小胶质细胞)
红色:抗GFAP 抗体(星形胶质细胞)

Western blotting

Lane1:Iba1 20ng
Lane2:Rat Microglia(10μg)
Lane3:Rat Neuron(10μg)
Lane4:Rat Adult Brain(10μg)
一抗: Iba1抗体,兔源(Western blotting 用)(0.5μg/ml)
二抗: HRP 标记抗兔IgG
检测方法: 化学发光法 WAKO小胶质细胞/巨噬细胞特异性抗体Anti Iba1, Rabbit 019-19741
货号 品名 用途 规格 备注
019-19741 抗 Iba1,小兔(Immunocytochemistry用) 免疫化学 50μg 来电咨询
016-20001 抗 Iba1,小兔(Western blotting用) 免疫化学 50μg 来电咨询
WAKO小胶质细胞/巨噬细胞特异性抗体Anti Iba1, Rabbit 019-19741

WAKO小胶质细胞/巨噬细胞特异性抗体Anti Iba1, Rabbit 019-19741

Kapa Biosystems官网 kapa试剂KK2602 KK2601中国代理商

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KAPA文库定量试剂盒

 

KAPA 文库定量试剂盒

 

NGS文库制备完成后,在混合文库、上机测序之前,准确定量NGS文库,对于在最大程度上经济地使用测序仪的测序能力,非常重要。KAPA文库定量试剂盒为Illumina®及Ion TorrentTM平台的测序文库提供了可靠的,基于qPCR技术的定量方案。KAPA文库定量试剂盒包含了用于qPCR绝对定量的NGS文库扩增所需的所有试剂。包括KAPA SYBR® FAST qPCR Master Mix (为不同qPCR仪配置预混合液及预稀释的DNA标准品组。

 

 

 

产品特色

KAPA 文库定量试剂盒 

    • 能可靠、灵敏地定量所有可被测序的文库分子
    • 能准确、可重复地定量不同浓度、不同片段长度分布、不同GC含量的文库文字
    • 对于多重测序,确保文库准确、等摩尔地混合
    • 工作流程灵活:即可支持手动,也可用于高通量的自动化平台

 

 

 

完整的文库定量方案

 

    • 无论是单种NGS文库,还是序列标签标注的多个文库池(library pool),qPCR绝对定量所需的所有试剂已经包含在试剂盒中
    • 标准曲线经过特殊设计,可适用于所有上游文库制备流程,包括PCR-free的文库制备流程
    • 仅定量可被测序的文库分子;对比qPCR方法,其他方法容易低估或者高估文库浓度
    • 可从KAPA网站或罗氏生命科学微信公众号获得数据分析模板与帮助

 

 

KAPA 文库定量试剂盒

 

KAPA文库定量试剂盒的工作原理。

qPCR的引物,根据平台特异性的文库街头(adaper)序列而设计,同时扩增6个预稀释的、组成浓度梯度的DNA标准品,以及稀释至合适浓度的待定量的NGS文库。将每个已知浓度DNA标准品的平均Cq值作图,生成标准曲线。标准曲线用于将稀释的待测NGS文库的平均Cq值转换为浓度,从而计算出待测文库的工作浓度。

 

 

 

 

 

 

 

KAPA 文库定量试剂盒
KAPA 文库定量试剂盒

 

 

 

qPCR能准确定量所有可测序分子。

(A)文库制备流程中,DNA插入片段和连接接头(adapter)会产生很多连接情况,除了两段皆连接上接头的可以被测序的文库文字,有一些连接情况(虚线框内)不支持后续的成簇扩增,不能被测序。qPCR能仅检测接头连接正确的分子,这对于PCR-free工作流程是特别关键的。分光光度法、荧光法及电泳法会检测所有的双链分子,无论接头的连接情况。(B)过度的文库扩增会导致引物消耗,随后的变性及退火过程会产生不完全退火的部分双链、部分单链的DNA异构体。采用dsDNA结合染料的电泳和荧光检测仅能检测完整的双链DNA片段,导致对过度扩增文库定量的低估。

 

 

 

 

基因工程改造的KAPA SYBR® FAST DNA聚合酶是高效文库定量的关键

 

    • KAPA SYBR FAST经基因工程改造从而对于不同长度、不同GC含量、不同浓度的DNA分子,能有相似的扩增效率
    • 对比之下,只包含野生型DNA聚合酶的文库定量试剂盒仅能定量“容易(easy)”的文库分子

 

 

 

 

KAPA 文库定量试剂盒
KAPA 文库定量试剂盒

 

 

 

qPCR能准确定量所有可测序分子。

(A)文库制备流程中,DNA插入片段和连接接头(adapter)会产生很多连接情况,除了两段皆连接上接头的可以被测序的文库文字,有一些连接情况(虚线框内)不支持后续的成簇扩增,不能被测序。qPCR能仅检测接头连接正确的分子,这对于PCR-free工作流程是特别关键的。分光光度法、荧光法及电泳法会检测所有的双链分子,无论接头的连接情况。(B)过度的文库扩增会导致引物消耗,随后的变性及退火过程会产生不完全退火的部分双链、部分单链的DNA异构体。采用dsDNA结合染料的电泳和荧光检测仅能检测完整的双链DNA片段,导致对过度扩增文库定量的低估。

 

 

 

 

产品质量可靠,一致性高

 

    • KAPA SYBR FAST的性能使单套DNA标准品适用于所有类型的NGS文库
    • 预稀释的标准品生产拥有极高的批次间一致性

 

 

 

 

KAPA 文库定量试剂盒
KAPA 文库定量试剂盒

 

 

 

在不同NGS文库类型及多批次产品间的高度一致性。

(A)用不同批次(批次1和2)及同一批次不同组(第1和第2组)的KAPA Illumina®平台文库构建试剂盒,定量9个人类WGS文库(41% GC)和两个微生物WGS文库(红球菌属物种,70% GC和葡萄球菌属物种,35% GC)。(B)自2009年9月以来发布的56个连续批次的KAPA DNA标准品的扩增效率。

 

 

 

 

多重(Multiplex) 测序: 不同质量的样本,也可得到可重复的成簇密度

 

    • KAPA文库定量,能够实现可预测的成簇密度,从而最大化利用测序仪的测序能力和测序通量
    • 不论文库混合前的浓度,经过准确、灵敏地定量,能实现标签序列标记的文库,等摩尔混合,再上机测序
    • 文库混合池(library pool) 中的不同文库的测序reads均一分布,优化测序成本
    • 所有文库类型均可获得可靠结果,包括从低质量FFPE DNA样本制备的文库

 

 

KAPA 文库定量试剂盒

 

准确、可重复的文库定量能使成簇密度达到高度一致。

在Broad研究所(Cambridge, MA, USA),在Illumina® GA测序工作流程中应用KAPA文库定量试剂盒显著降低了簇密度的差异性,并消除了滴定的需求。此处展示了连续文库每个tile中簇的平均数目。

 

 

 

 

 

 

 

KAPA 文库定量试剂盒
KAPA 文库定量试剂盒

 

 

 

准确和灵敏的定量能使多重测序库中Reads均匀分布。

使用用于Illumina平台的KAPA文库定量试剂盒,通过qPCR来定量从高质量人类基因组DNA(深色条)或FFPE DNA(浅色条)制备的24个有标签序列的文库,并组合成为三个等摩尔浓度的测序池。在HiSeq 2500测序仪相同flow cell的不同泳道中对每个测序池进行测序。(A)24个不同文库(标号1~24)代表了约44倍范围的预混合浓度(5.2nM至229.8nM),而测序read分布(B)仅在9.6%至13.9%之间变化。在泳道1、2、3中用于测序的预混合文库浓度的变异系数(CV)分别为94.9%、49.4%和127.9%。KAPA文库定量试剂盒能够进行准确的等摩尔混合,在标准化后CV降低至2.5%、4.8%和11.2%。

 

 

 

MC-CN-00364 有效期至2021-12-31

仅供研究,不用于临床诊断。

 

 

 

相关产品

 

 

 

    • KAPA 文库定量试剂盒 KAPA 人类基因组定量& QC 试剂盒
      KAPA hgDNA Quantification and QC Kit
    • KAPA 文库定量试剂盒 KAPA 文库扩增试剂盒
      KAPA Library Amplification Kits
    • KAPA 文库定量试剂盒 KAPA Hyper Prep Kits
    • KAPA 文库定量试剂盒 KAPA Stranded RNA-seq文库构建试剂盒+mRNA富集试剂盒

 

 

 

相关应用

 

 

 

    • Quantification of libraries prior to pooling for multiplexed sequencing
    • Quantification of libraries prior to and after hybridization capture
    • Quantification of individual libraries or library pools prior to cluster amplification or emPCR
    • Quality control, optimization and troubleshooting of library construction processes or workflows

 

 

 

文件下载

 

 

 

产品手册

SEQ100005_Kapa_LibQuant_SS_单页

 

 

 

规格明细 / 储存条件

 

 

 

Kits can be stored for up to 12 months at -20˚C.

Complete kits include KAPA SYBR FAST qPCR Master Mix (2X), Primer Premix (10X) and a set of 6 DNA Standards. Reagents for qPCR (KAPA SYBR FAST qPCR Master Mix and Primer Premix) and DNA Standards (1–6) are also sold separately. Where noted, Master Mixes contain instrument-specific reference dyes, while the Universal kit includes ROX High and ROX Low (both 50X) separately.

Components–Illumina® Platform

KAPA 文库定量试剂盒

Components–Illumina® Platform

KAPA 文库定量试剂盒

规格明细

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

规格 描述
Compatible Platform Illumina HiSeq, NextSeq, MiSeq, and GAIIx Ion Torrent Proton and PGM 454 GS FLX+ and GS Junior SOLiD 5500 series
Library Type Any
Starting Material Any NGS library ready for cluster amplification or emPCR
Standard curve
concentration range
20–0.0002 pM for Illumina libraries 83–0.00083 pM for Ion Torrent and 454 libraries 10–0.0001 pg/µL for SOLiD libraries
Sequencing
Applications
Whole Genome Sequencing Whole Exome Sequencing Targeted Sequencing (custom panels) RNA-Seq ChIP-Seq Amplicon Sequencing Methyl-Seq

 

 

 

 

 

订货信息

 

 

KAPA 文库定量试剂盒,Illumina 平台(通用)

 

 

 

    • KK货号:KK4824
    • 产品货号:07960140001
    • 适用的qPCR仪器:通用

 

 

 

KAPA 文库定量试剂盒,Illumina 平台(ABI Prism®)

 

 

 

    • KK货号:KK4835
    • 产品货号:07960204001
    • 适用的qPCR仪器:ABI Prism®

 

 

 

KAPA 文库定量试剂盒,Illumina 平台(Bio-Rad iCycler™)

 

 

 

    • KK货号:KK4844
    • 产品货号:07960255001
    • 适用的qPCR仪器:Bio-Rad iCycler™

 

 

 

KAPA 文库定量试剂盒,Illumina 平台(Roche LightCycler® 480)

 

 

 

    • KK货号:KK4854
    • 产品货号:07960298001
    • 适用的qPCR仪器:Roche LightCycler® 480

 

 

 

KAPA 文库定量试剂盒,Illumina 平台(ROX Low)

 

 

 

    • KK货号:KK4873
    • 产品货号:07960336001
    • 适用的qPCR仪器:ROX Low

 

 

 

KAPA 文库定量试剂盒,Ion Torrent PGM 平台(通用)

 

 

 

    • KK货号:KK4827
    • 产品货号:07960158001
    • 适用的qPCR仪器:通用

 

 

 

KAPA 文库定量试剂盒,Ion Torrent PGM 平台(ABI Prism®)

 

 

 

    • KK货号:KK4838
    • 产品货号:07960212001
    • 适用的qPCR仪器:ABI Prism®

 

 

 

KAPA 文库定量试剂盒,Ion Torrent PGM 平台(Bio-Rad iCycler™)

 

 

 

    • KK货号:KK4847
    • 产品货号:07960263001
    • 适用的qPCR仪器:Bio-Rad iCycler™

 

 

 

KAPA 文库定量试剂盒,Ion Torrent PGM 平台(Roche LightCycler® 480)

 

 

 

    • KK货号:KK4857
    • 产品货号:07960301001
    • 适用的qPCR仪器:Roche LightCycler® 480

 

 

 

KAPA 文库定量试剂盒,Ion Torrent PGM 平台(ROX Low)

 

 

 

    • KK货号:KK4874
    • 产品货号:07960344001
    • 适用的qPCR仪器:ROX Lows

 

 

 

 

*所有试剂盒均包含5ml KAPA SYBR ®FAST qPCR Master Mix (2X), 1ml Primer Premix, 和 6 X 80 uL DNA 定量标准品. 按产品标识注明,试剂盒内包含的引物、DNA定量标准品和qPCR试剂是针对不同DNA测序平台和qPCR仪器进行配制的。引物预混液和DNA定量标准品也可单独购买。

 

 

 

 

 

 

AP-MN-P-500GAxyPrep 质粒小量制备试剂盒500 prep

  • AP-MN-P-500GAxyPrep 质粒小量制备试剂盒500 prep
  • AXYGEN产品特价活动产品列表!欢迎选购!
    上海金畔生物科技有限公司,AXYGEN试剂盒代理!

    货号 产品描述 Prep 销售包装 特价 特殊价格支持
    AP-GX-250G AxyPrep DNA凝胶回收试剂盒 250 prep 609  买4送1
    AP-GX-50G AxyPrep DNA凝胶回收试剂盒 50 prep 135  买4送1
    AP-MN-P-250G AxyPrep 质粒小量制备试剂盒 250 prep 579  买4送1
    AP-MN-P-50G AxyPrep 质粒小量制备试剂盒 50 prep 129  买4送1
    AP-PCR-250G AxyPrep PCR 清洁试剂盒 250 prep 608  买4送1
    AP-PCR-50G AxyPrep PCR 清洁试剂盒 50 prep 135  买4送1
    AP-96-BF-VNA-12G AxyPrep-96 体液病毒DNA/RNA纯化试剂盒 12×96 prep 34875   
    AP-96-BF-VNA-1G AxyPrep-96 体液病毒DNA/RNA纯化试剂盒 1×96 prep 3761   
    AP-96-BF-VNA-4G AxyPrep-96 体液病毒DNA/RNA纯化试剂盒 4×96 prep 13677   
    AP-96-BL-GDNA-12G AxyPrep-96 血基因组DNA试剂盒 12×96 prep 4073   
    AP-96-BL-GDNA-1G AxyPrep-96 血基因组DNA试剂盒 1×96 prep 480   
    AP-96-BL-GDNA-4G AxyPrep-96 血基因组DNA试剂盒 4×96 prep 1598   
    AP-96-GX-1G AxyPrep-96 DNA凝胶回收试剂盒 1×96 prep 403   
    AP-96-GX-24G AxyPrep-96 DNA凝胶回收试剂盒 24×96 prep 5807   
    AP-96-GX-4G AxyPrep-96 DNA凝胶回收试剂盒 4×96 prep 1290   
    AP-96-P-1G AxyPrep-96 质粒DNA试剂盒 1×96 prep 440   
    AP-96-P-24G AxyPrep-96 质粒DNA试剂盒 24×96 prep 5075   
    AP-96-P-4G AxyPrep-96 质粒DNA试剂盒 4×96 prep 950   
    AP-96-PCR-1G AxyPrep-96 PCR 清洁试剂盒 1×96 prep 243   
    AP-96-PCR-24G AxyPrep-96 PCR 清洁试剂盒 24×96 prep 4080   
    AP-96-PCR-4G AxyPrep-96 PCR 清洁试剂盒 4×96 prep 756   
    AP-E96-P-1G AxyPrep Easy-96质粒DNA小量试剂盒 1×96 prep 258   
    AP-E96-P-24G AxyPrep Easy-96质粒DNA小量试剂盒 24×96 prep 3920   
    AP-E96-P-4G AxyPrep Easy-96质粒DNA小量试剂盒 4×96 prep 720   
    AP-EMN-BL-GDNA-250 AxyPrep 血基因组DNA小量试剂盒(酶法) 250 prep 1598   
    AP-EMN-BL-GDNA-4 AxyPrep 血基因组DNA小量试剂盒(酶法) 4 prep 85   
    AP-EMN-BL-GDNA-50 AxyPrep 血基因组DNA小量试剂盒(酶法) 50 prep 338   
    AP-GX-250-DE-A DE-A 缓冲溶液 165mL/bottle 274   
    AP-GX-250-DE-B DE-B 缓冲溶液 165mL/bottle 136   
    AP-GX-250-W2 W2 缓冲溶液 72mL/bottle 172   
    AP-GX-4G AxyPrep DNA凝胶回收试剂盒 4 prep 85   
    AP-GX-500G AxyPrep DNA凝胶回收试剂盒 500 prep 1094   
    AP-MD-BL-GDNA-10G AxyPrep 血基因组DNA中量制备试剂盒 10 prep 248   
    AP-MD-BL-GDNA-25G  AxyPrep 血基因组DNA中量制备试剂盒 25 prep 518   
    AP-MD-BL-GDNA-2G AxyPrep 血基因组DNA中量制备试剂盒 2 prep 216   
    AP-MD-EP-10G AxyPrep 无内毒素质粒中量试剂盒 10 prep 500   
    AP-MD-EP-25G AxyPrep 无内毒素质粒中量试剂盒 25 prep 1220   
    AP-MD-EP-2G AxyPrep 无内毒素质粒中量试剂盒 2 prep 156   
    AP-MD-MS-RNA-10G AxyPrep 总RNA中量制备试剂盒 10 prep 413   
    AP-MD-MS-RNA-25G AxyPrep 总RNA中量制备试剂盒 25 prep 900   
    AP-MD-MS-RNA-2G AxyPrep 总RNA中量制备试剂盒 2 prep 152   
    AP-MD-P-10G AxyPrep 质粒中量制备试剂盒 10 prep 246   
    AP-MD-P-25G AxyPrep 质粒中量制备试剂盒 25 prep 550   
    AP-MD-P-2G AxyPrep 质粒中量制备试剂盒 2 prep 211   
    AP-MN-BF-VNA-250G AxyPrep 体液病毒DNA/RNA小量制备试剂盒 250 prep 2100   
    AP-MN-BF-VNA-250T AxyPrep 体液病毒DNA/RNA小量制备试剂盒 (TaKaRa OEM) 250 prep 2100   
    AP-MN-BF-VNA-4G AxyPrep 体液病毒DNA/RNA小量制备试剂盒 4 prep 91   
    AP-MN-BF-VNA-50G AxyPrep 体液病毒DNA/RNA小量制备试剂盒 50 prep 468   
    AP-MN-BF-VNA-VN VN 缓冲溶液 20mL/bottle 75   
    AP-MN-BL-GDNA-250G AxyPrep 血基因组DNA小量制备试剂盒 250 prep 1598   
    AP-MN-BL-GDNA-4G AxyPrep 血基因组DNA小量制备试剂盒 4 prep 91   
    AP-MN-BL-GDNA-50G AxyPrep 血基因组DNA小量制备试剂盒 50 prep 338   
    AP-MN-BL-GDNA-AP1 B-AP1 缓冲溶液 150mL/bottle 532   
    AP-MN-BL-GDNA-AP2 AP2 缓冲溶液 30mL/bottle 72   
    AP-MN-BL-GDNA-TE TE 缓冲溶液 60mL/bottle 70   
    AP-MN-BL-RNA-250G AxyPrep 血RNA小量制备试剂盒 250 prep 3150   
    AP-MN-BL-RNA-4G AxyPrep 血RNA小量制备试剂盒 4 prep 112   
    AP-MN-BL-RNA-50G AxyPrep 血RNA小量制备试剂盒 50 prep 750   
    AP-MN-BT-GDNA-250G AxyPrep 细菌基因组DNA小量制备试剂盒 250 prep 1418   
    AP-MN-BT-GDNA-250T AxyPrep 细菌基因组DNA小量制备试剂盒 (TaKaRa OEM) 250 prep 1418   
    AP-MN-BT-GDNA-4G AxyPrep 细菌基因组DNA小量制备试剂盒 4 prep 162   
    AP-MN-BT-GDNA-50G AxyPrep 细菌基因组DNA小量制备试剂盒 50 prep 315   
    AP-MN-EP-150G AxyPrep 无内毒素质粒小量试剂盒 150 prep 1177   
    AP-MN-EP-4G AxyPrep 无内毒素质粒小量试剂盒 4 prep 114   
    AP-MN-EP-50G AxyPrep 无内毒素质粒小量试剂盒 50 prep 436   
    AP-MN-FEP-150G AxyPrep 无内毒素质粒小量试剂盒(快速法) 150 prep 1220   
    AP-MN-FEP-4G AxyPrep 无内毒素质粒小量试剂盒(快速法) 4 prep 76   
    AP-MN-FEP-50G AxyPrep 无内毒素质粒小量试剂盒(快速法) 50 prep 500   
    AP-MN-MiRNA-250G AxyPrep miRNA小量制备试剂盒 250 prep 3150   
    AP-MN-MiRNA-4G AxyPrep miRNA小量制备试剂盒 4 prep 71   
    AP-MN-MiRNA-50G AxyPrep miRNA小量制备试剂盒 50 prep 750   
    AP-MN-MS-GDNA-250G AxyPrep 基因组DNA小量制备试剂盒 250 prep 1416   
    AP-MN-MS-GDNA-4G AxyPrep 基因组DNA小量制备试剂盒 4 prep 108   
    AP-MN-MS-GDNA-50G AxyPrep 基因组DNA小量制备试剂盒 50 prep 312   
    AP-MN-MS-RNA-250G AxyPrep 总RNA小量制备试剂盒 250 prep 3150   
    AP-MN-MS-RNA-4G AxyPrep 总RNA小量制备试剂盒 4 prep 97   
    AP-MN-MS-RNA-50G AxyPrep 总RNA小量制备试剂盒 50 prep 750   
    AP-MN-P-250G-RA RNase 150µL/bottle 29   
    AP-MN-P-4G AxyPrep 质粒小量制备试剂盒 4 prep 102   
    AP-MN-P-500G AxyPrep 质粒小量制备试剂盒 500 prep 1042   
    AP-MN-P-500-S1 S1 缓冲溶液 150mL/bottle 110   
    AP-MN-P-500-S2 S2 缓冲溶液 150mL/bottle 115   
    AP-MN-P-500-S3 S3 缓冲溶液 210mL/bottle 151   
    AP-MN-P-500-W2 W2 缓冲溶液 120mL/bottle 227   
    AP-MX-BL-GDNA-10G AxyPrep 血基因组DNA大量制备试剂盒 10 prep 240   
    AP-MX-BL-GDNA-25G AxyPrep 血基因组DNA大量制备试剂盒 25 prep 570   
    AP-MX-BL-GDNA-2G AxyPrep 血基因组DNA大量制备试剂盒 2 prep 269   
    AP-MX-EP-10G AxyPrep 无内毒素质粒大量试剂盒 10 prep 784   
    AP-MX-EP-25G AxyPrep 无内毒素质粒大量试剂盒 25 prep 1780   
    AP-MX-EP-2G AxyPrep 无内毒素质粒大量试剂盒 2 prep 204   
    AP-MX-MS-RNA-10G AxyPrep 总RNA大量制备试剂盒 10 prep 908   
    AP-MX-MS-RNA-25G AxyPrep 总RNA大量制备试剂盒 25 prep 1980   
    AP-MX-MS-RNA-2G AxyPrep 总RNA大量制备试剂盒 2 prep 245   
    AP-MX-P-10G AxyPrep 质粒大量制备试剂盒 10 prep 629   
    AP-MX-P-25G AxyPrep 质粒大量制备试剂盒 25 prep 1372   
    AP-MX-P-2G AxyPrep 质粒大量制备试剂盒 2 prep 241   
    AP-PCR-4G AxyPrep PCR 清洁试剂盒 4 prep 58   
    AP-PCR-500G AxyPrep PCR 清洁试剂盒 500 prep 1094   
    AP-TAQ-5 Axygen Taq 酶试剂盒 (含dNTPs, 预混Mg++) 500U 209   
    AP-TAQ-M-5 Axygen Taq 酶试剂盒 (含dNTPs, Mg++分开) 500U 209   
    AP-VM-G AxyVac 负压装置(第一代) 810   
    AP-VM-II AxyVac 负压装置(第二代) 720 

HITL移液器代理商

上海金畔生物科技有限公司代理品牌列表

HITL移液器
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日本同仁化学LDH检测试剂盒—Cytotoxicity LDH Assay Kit-WST货号:CK12

LDH检测试剂盒—Cytotoxicity LDH Assay Kit-WST货号:CK12
乳酸脱氢酶(LDH)检测试剂盒
Cytotoxicity LDH Assay Kit-WST
商品信息
储存条件:0-5度保存,避光
运输条件:室温

特点:

● 不与细胞内LDH反应,可直接检测(一步法)或取上清液检测(低损伤法)。

● 更适合Car-T、ADCC、CDC等效靶杀伤实验。

● Working Solution配制后,可稳定保存6个月以上。

● 试剂盒稳定性高,数据重复性好。

● 搭配CCK-8检测,细胞毒性双指标认证。

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产品文献
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选择数量:

选择规格:
100 tests
500 tests
2000 tests
价格:
¥800.00现货(会员请登录查看专享价!)
性价比高
与CCK-8双重验证细胞毒性
CAR-T&ADCC实验可用
细胞活性/毒性双重检测试剂盒(点击查看)
活动进行中
试剂盒内含
产品概述
原理
产品特点
操作示意图
工作液稳定性
CCK-8与LDH
实验例
常见问题Q&A
参考文献

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凑单关联产品TOP5

NO.1.    Cell Counting Kit-8     细胞增殖毒性检测   

NO.2.    Annexin V, FITC Apoptosis Detection Kit    细胞凋亡检测

NO.3.    Caspase-3 Assay Kit -Colorimetric    细胞凋亡检测  

NO.4.    Biotin Labeling Kit – NH2    生物素抗体标记-氨基

NO.5.    Cell Counting Kit-Luminescence    细胞增殖/毒性检测 

试剂盒内含

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产品概述

Cytotoxicity LDH Assay Kit-WST®是通过测定细胞释放到培养基中的乳酸脱氢酶 (LDH) 活性进而测定细胞损害的试剂盒。LDH是存在于细胞质的一种酶,当细胞膜受到损伤时,LDH会释放到培养基中。由于释放出的LDH稳定,检 测培养基中LDH量可以作为测定死细胞和受损细胞数量的指标。本试剂盒可以测定受损细胞所释放出的LDH,其原 理是LDH催化乳酸生成丙酮酸和NADH,NADH通过电子载体可将水溶性四唑盐WST® (无色) 还原成甲臜产物 (橙色), WST®甲臜产物的吸光度与LDH量呈正比,利用此原理可以测定死细胞和受损细胞的数量。

本试剂盒中试剂不会和活细胞反应,而且对细胞无损害,可以直接添加到含有细胞的培养基中检测 (一步法)。也可以分离细胞后,加到培养基中检测 (低损伤法,分离的细胞可以做其他实验)。本试剂盒采用稳定性高的WST®,配制后的溶液可以长时间保存,不需要现配现用,适用于高通量筛选。

原理

Cytotoxicity LDH Assay Kit-WST®是通过测定细胞释放到培养基中的乳酸脱氢酶(LDH)活性进而测定细胞损害的试剂盒。LDH(乳酸脱氢酶)是存在于细胞质的一种酶,当细胞膜受到损伤时,LDH 会释放到培养基中。由于释放出的LDH 稳定,检测培养基中LDH 的量可以作为测定死细胞和受损细胞数量的指标。

本试剂盒可以测定受损细胞所释放出的LDH,其原理是LDH 催化乳酸生成丙酮酸和NADH,NADH 通过电子载体可将水溶性四唑盐WST®(无色)还原成甲臜产物(橙色),WST®甲臜产物的吸光度与LDH 的量呈正比,利用此原理可以测定死细胞和受损细胞的数量。

本试剂盒中试剂不会和活细胞反应,而且对细胞无损害,可以直接添加到含有细胞的培养基中检测(一步法)。也可以分离细胞后,加到培养基中检测(低损伤法,分离的细胞可以做其他实验)。本试剂盒采用稳定性高的WST®,配置后的溶液可以长时间保存6个月,不需要现配现用,适用于高通量筛选。

1606899421120188.jpg

产品特点

-双重选择:有2种检测方法(一步法、低损伤法)

-操作简单:不需要分离死细胞和活细胞,就可检测死细胞的LDH *一步法

-仪器常用:采用常规酶标仪检测

-稳定方便:Working Solution可冷藏保存6个月,不需要现配现用

-双重验证:配合使用CCK-8可获得死细胞和活细胞的结果

image.png

操作示意图

本试剂盒不与细胞内的LDH反应,因此可选择两种检测方法。

1、一步法,直接添加的培养基中检测(左)

2、低损伤法,取上清液检测(右)

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工作液稳定性

配制后的工作液,可冷藏保存6个月,无需现配现用

CCK-8与LDH

Cell Counting Kit-8 与Cytotoxicity LDH Assay Kit-WST®同时检测细胞毒性

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检测药物: Mitomycin C

细胞: HeLa

培养基: MEM, 10% FBS

孵育条件: 37℃, 5% CO2, 48小时

检测波长: Cell Counting Kit-8 (450 nm), Cytotoxicity LDH Assay Kit-WST® (490 nm)

使用Mitomycin C 检测检测HeLa细胞毒性。通过使用Cell Counting Kit-8和Cytotoxicity LDH Assay Kit-WST [货号: CK12]两种方法检测。Cell Counting Kit-8以细胞活性为指标,Cytotoxicity LDH Assay Kit-WST以游离的LDH为指标,实验证实两种指标检测存在差异性。二者联用,能更全面的表征细胞毒性。

本文为LDH法检测细胞毒性的相关研究介绍。 [相关介绍链接]

实验例

RAJI细胞CDC实验

实验证实:吸光度O.D.值与抗体浓度成正相关,因此确认CD20抗体与细胞结合而激活细胞损伤

1606900330169395.jpg

抗癌药阿霉素(DOX)的细胞毒性机制

近年来,与抗氧化剂能力相关的指标(NADP + / NADPH,GSSG / GSH等)与细胞毒性评估一起被测量的案例越来越多。

在本文中,我们将以DOX为例,其中抗氧化能力的下降与细胞毒性的增加有关。

1622109165632337.jpg

1622109465337424.jpg

常见问题Q&A

Q1:可以使用490 nm以外的滤光片吗?
A1:可以使用450 nm滤光片,吸光度会高于490 nm。
Q2:细胞毒性检测时,Cytotoxicity LDH Assay Kit-WST和Cell Counting Kit-8法结果一致吗?
A2:二者测定的原理和指标不同,建议同时检测。可更好说明问题。

Cell Counting Kit-8:检测细胞活性

Q3:LD50差异性过大,如何处理?
A3:细胞状态不同,对药物的耐受性也会有很大变化,最终影响LD50的数值。请尽可能使用相同条件下处理、相同代数的细胞。在准备药物稀释液时,可降低稀释梯度倍数,从而得到更准确的LD50。
Q4:这个试剂盒能检测LDH的酶活吗?
A4:本产品通过LDH活性检测细胞毒性,不能检测如:LDH1, LDH2, LDH3的活性。
Q5:LDH本身的稳定性如何?
A5:文献报道,培养基中LDH活性的1天内降低<5%(文献1),也可冷藏1周左右(文献2)。具体可因实验条件不同存在差异。

文献1:

A. Wagner, A. Marc, JM. Engasser, A. Einsele, “The use of lactate dehydrogenase (LDH) release kinetics for the evaluation of death and growth of mammalian cells in perfusion reactors.”, Biotechnol Bioeng. 1992; 39, (3), :320..

文献2:

M. Allen, P. Millett, E. Dawes, N. Rushton., “Lactate dehydrogenase activity as a rapid and sensitive test for the quantification of cell numbers in vitro.”, Clin Mater. 1994; 16, (4), 189.

Q6:Cytotoxicity LDH Assay Kit-WST带LDH标准品吗?
A6:因为是检测细胞毒性使用,不带标准品。
Q7:试剂盒中的Stop solution添加后需立即检测吗?
A7:Stop solution添加后可避光保存3小时。
Q8:显色背景过高,有什么原因?
A8:考虑以下原因。

培养基中血清中的乳酸脱氢酶升高了背景。请用此培养基配制小于5%的血清或血清培养基。

如果培养基中含有待测物质具有强还原性,会与WST®显色。因此可预实验时单独检测判断。

(一般情况下,培养基如DMEM、RPMI、F-12,通常不含还原性物质

参考文献

1.Antitumor Effect by Hydroxyapatite Nanospheres: Activation of Mitochondria-Dependent Apoptosis and Ne…

ACS Nano,2018,12(8)7838-7854

2.Magnetic Nano-Clusters Armed with Responsive PD-1 Antibody

3.Synergistically Improved Adoptive T C….ACS Nano,2019, 13(2)1469-1478

4.Layer by layer cell coating technique using extracellular matrix facilitates rapid fabrication and fu….Biomaterials,2018,160,82-91

5.Oxidative stress–dependent phosphorylation activates ZNRF1 to induce neuronal/axonal degeneration

J.Cell Biol.,2015,211(4)881-896

6.Protein carbamylation exacerbates vascular calcification.Kidney International ,2018,94(1),72-90

7.In vitro cellular behaviors and toxicity assays of small-sized fluorescent silicon nanoparticles.Nanoscale,2017, 9(22),7602-7611

8.Pathological Endogenous a-Synuclein Accumulation in Oligodendrocyte Precursor Cells Potentially Induc…

Stem Cell Reports,2018,10(2),356-365

9.Biocompatible carbon nanotube fiber for implantable supercapacitors.Carbon,2017,122,162-167

10.Lower Expression of MicroRNA-155 Contributes to Dysfunction of Natural Killer Cells in Patients with ….Frontiers in Immunology,2017,8,1173

11.Melatonin Mediates Protective Effects against Kainic Acid-Induced Neuronal Death through Safeguarding….Frontiers in Immunology,2017,10,49

日本同仁化学Cell Counting Kit-8细胞增殖毒性检测试剂盒CCK-8(CCK8)货号:CK04

Cell Counting Kit-8细胞增殖毒性检测试剂盒CCK-8(CCK8)货号:CK04
细胞增殖-毒性检测试剂盒CCK-8(CCK8)
Cell Counting Kit-8
商品信息
储存条件:0-5度保存
运输条件:室温

特点:

● CCK-8为本司DOJINDO最早研发

● 高分文献超10000+篇

● 试剂盒稳定性高。

● 试剂可以与酚红同时使用。

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产品文献
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CCK-8宣传册
操作说明集
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100 tests
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3000 tests
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CCK-8为本司DOJINDO最早研发
高分文献超10000+篇
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更高灵敏度检测方法CCK-L(点击查看)
相关检测方法
性能简介
产品特点
原理
产品概述
操作步骤
CCK-8使用例
CCK-8与LDH
WST®-8甲臜染料
试剂稳定性比较
试剂毒性评价
3D培养检测
常见问题Q&A
参考文献

相关检测方法

产品用途 点击查看产品详情 产品优势
细胞凋亡检测 Annexin V, FITC Apoptosis Detection Kit(手机端点击) 灵敏度高象限区分好

性价比高

Annexin V, 633 Apoptosis Detection Kit(手机端点击)
Caspase-3 Assay Kit -Colorimetric-(手机端点击)
细胞毒性检测(检测死细胞数量) Cytotoxicity LDH Assay Kit-WST(手机端点击) 与CCK-8双重验证细胞毒性CAR-T&ADCC实验可用
活死细胞双染 Calcein-AM/PI细胞双染试剂盒(手机端点击) 荧光结果与CCK-8双重验证高分文献支持

操作简便

细胞内亚铁离子检测 FerroOrange(手机端点击) 更多铁死亡检测方法点击查看

性能简介

Cell Counting Kit-8是用于化学药物等对细胞增殖或毒性实验时进行细胞计数的试剂盒。试剂盒中使用高灵敏度的新型水溶性四唑盐WST-8甲臜染料作为显色底物,与传统的细胞计数试剂盒相比,灵敏度大幅度的提高。WST-8被细胞内的脱氢酶还原产生水溶性的甲臜染料。通过直接测量甲臜染料(450 nm)的吸光度,即可测出活细胞的数量。细胞数量与甲臜染料成正比关系。同时试剂盒为配置好的1瓶溶液,易于使用。

产品特点

1)对比[3H]法,无需放射性同位素。

2)使用水溶性四唑盐与水溶性甲臜染料,因此无需DMSO换液操作步骤。(如MTT分析等需要)

3)与其他水溶性四唑盐法(XTT,MTS)相比,灵敏度更高的同时毒性更低。

4)试剂盒为1瓶装,无需提前配置,无需准备其他试剂。

5)试剂盒稳定性高。

6)试剂可以与酚红同时使用。

原理

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Cell Counting Kit-8 (CCK-8) 包含了Dojindo开发的水溶性四唑盐—WST®-8和电子载体(1-Methoxy PMS)。由于WST®-8具有高水溶性,它存在于细胞外而不渗透活细胞膜,通过1-Methoxy PMS接受乳酸脱氢酶的辅酶NADH的电子而被还原,生成水溶性WST®-8甲臜染料(最大吸收波长450nm:详见下方吸收光谱)。

光谱.jpg

产品概述

Cell Counting Kit-8 (CCK-8) 利用了Dojindo开发的水溶性四唑盐—WST®-8 (2- (2-甲氧基-4-硝苯基) -3- (4-硝苯 基) -5- (2,4-二磺基苯) -2H-四唑单钠盐),它在电子载体1-Methoxy PMS存在的情况下能够被还原成水溶性的橙黄色甲臜。 CCK-8溶液可以直接加入到细胞样品中,无需配制。CCK-8法是用于测定细胞增殖或毒性实验中活细胞数目的 一种高灵敏度,无放射性的比色检测法。WST®-8被细胞内脱氢酶氧化还原后生成的橙黄色甲臜能够溶解在培养基中 ,生成的甲臜物的数量与活细胞数量成正比。

操作步骤

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本试剂盒测定方法简单,只需一瓶试剂即可操作,无需二次配制工作液,从而提高实验者的效率。

CCK-8使用例

细胞增殖实验(左)与细胞毒性实验(右)

1622023892816423.png

CCK-8与LDH

Cell Counting Kit-8 与Cytotoxicity LDH Assay Kit-WST同时检测细胞毒性

CCK-8与LDH2.jpg
检测药物: Mitomycin C

细胞: HeLa

培养基: MEM, 10% FBS

孵育条件: 37℃, 5% CO2, 48小时

检测波长: Cell Counting Kit-8 (450 nm), Cytotoxicity LDH Assay Kit-WST® (490 nm)

使用Mitomycin C 检测检测HeLa细胞毒性。通过使用Cell Counting Kit-8和Cytotoxicity LDH Assay Kit-WST® [货号: CK12]两种方法检测。Cell Counting Kit-8以细胞活性为指标,Cytotoxicity LDH Assay Kit-WST以游离的LDH为指标,实验证实两种指标检测存在差异性。二者联用,能更全面的表征细胞毒性。

WST®-8甲臜染料

WST®-8甲臜染料吸光度与续细胞数量的关系

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培养基: MEM, 10%FBS(HeLa ) , RPM1640(HL60)

孵育条件:37℃, 5%CO2, 2hr (HeLa、HL60)

检测试剂:Cell Counting Kit-8

(●) 450 nm, XTT (◆) 450 nm, MTS

(▲) 490 nm, MTT(■) 570 nm

将HeLa细胞和HL60细胞以不同的细胞数接种到96孔板中,按孵育条件处理后加入以上每种试剂测定吸光度。根据细胞数量增加吸光度。CCK-8灵敏度、线性范围优于以上其他方法。

试剂稳定性比较

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Cell Counting Kit-8可冷藏保存1年以上,避免试剂浪费!

试剂毒性评价

试剂本身对细胞毒性的比较

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HeLa细胞在96孔板中孵育(5000个/孔)。在CO2培养箱中开始显色反应,每隔3、6、24小时在显微镜下观察细胞形态。Cell Counting Kit-8在24小时后细胞形态没有改变。在使用药物进行细胞毒性试验时,应选择测量试剂本身对细胞毒性影响更小的试剂。

3D培养检测

3D培养检测细胞毒性指南,

详见OECD Guidelines for the Testing of Chemicals, Section 4 Test No. 492

常见问题Q&A

Q1:96孔板操作实例外,24孔板,12孔板如何检测?
A1:与培养基1:10的比例加入。
Q2:如何测定空白孔?
A2:空白读值的来源有两部分,还原性物质与细胞本身活性。请确认以下细节。·还原性物质:可在正式实验之前,在培养基中加入CCK-8和待测药物。如果变色,证明药物有还原性。正式实验检测时,请在加入CCK-8前更换培养基。

·细胞活性变化:CCK-8检测细胞活性,因此细胞活性变化,即使细胞数量不变,空白也会变化。因此需要确认细胞活性是否存在变化。

Q3:如何终止反应?
A3:有一下几种方法(96孔板):1、 在显色反应后,将培养板放置4℃冰箱内。

2、 每孔加10 μl 0.1 M HCL溶液。

3、 每孔加10 μl 1%(w/v)的SDS(十二烷基硫酸钠)溶液。

注意:反应停止后,应在24小时之内测定。

4、使用本公司Stop Solution for CCK-8(货号:CK13).

Q4:我可以使用450 nm以外的滤光片吗?
A4:可使用430-490nm的滤光片,450nm滤光片最优。WST-8甲臜染料吸收光谱:

1608731303292992.png

Q5:CCK-8运输与保存条件?
A5:试剂在4℃下可稳定保存24个月。如需长期存放可保存-20℃,但不要反复冻融。如更换其他容器,请先进行稳定性实验,确认试剂稳定性。
Q6:一个孔中应接种多少个细胞?
A6:当使用标准96孔板时,贴壁细胞的最小接种量至少为1,000 个/孔 (100 μl 培养基)。检测白细胞时的灵敏度相对较低,因此推荐接种量不低于2,500 个/孔 (100 μl 培养基)。如果要使用24孔板或6孔板实验,请先计算每孔相应的接种量,并按照每孔培养基总体积的10%加入CCK-8溶液。
Q7:能否用384孔板进行试验?
A7:可以。向各孔中加入培养基体积10%的CCK-8溶液,如果加入的CCK-8体积太少,可以先将CCK-8溶液稀释1倍,然后加入培养基体积20%的量
Q8:能否用24孔板进行试验?
A8:可以。向各孔中加入培养基体积10%的CCK-8溶液。
Q9:酚红会影响检测吗?
A9:不会。培养基中酚红的吸光度可以在计算时,通过扣除空白孔中本底的吸光度而消去,因此不会对检测造成影响。
Q10:CCK-8与胸苷结合检测之间是否有相关性?
A10:有。然而,请注意由于CCK-8使用的检测原理与胸苷检测的不同,因此结果可能不同。
Q11:CCK-8能否检测细菌细胞?
A11:可以检测E.coli,但不能检测酵母细胞。向100 μl E.coli培养液中加入10 μl CCK-8溶液,并培养1-4个小时或过夜。但是更推荐使用我公司货号M439的:细菌活性检测试剂盒。
Q12:如何减少由于CCK-8试剂在枪头上或孔壁上的残留所带来的误差?
A12:可以在加样前用培养基稀释CCK-8试剂并混匀后加样。
Q13:CCK-8是什么颜色?
A13:应该是粉红色。若颜色不一样,有可能会影响测定。
Q14:CCK-8能否对活细胞进行染色?
A14:不能。因为CCK-8的主要成分是一种水溶性的四唑盐 (WST®-8),并通过电子载体1-Methoxy PMS将活细胞中的电子交换到培养基中的WST®-8上。由于生成的甲臜也是高度水溶性的,因此CCK-8不能对细胞进行染色。
Q15:CCK-8检测溶液对细胞是否有毒?
A15:CCK-8溶液自身因为高浓度的1-Methoxy PMS的存在而具有一点毒性。但是,加到培养基中的CCK-8是没有毒性的,因为被稀释了10倍。因此,长时间的培养,如过夜或者培养数天是可以的。同一个细胞培养液在CCK-8检测后还可以用于其他细胞增殖检测,如结晶紫检测,中性红检测或者DNA荧光检测等。由于每种细胞对于CCK-8的耐受力都不同,因此在需要进行长时间培养时,先检测一下细胞在加入CCK-8培养后的活力。
Q16:在做加药实验时,药物对测定是否有影响?如何解决?
A16:有时会有影响。如果药物具有还原性,会和CCK-8发生显色反应,增加吸光度。解决办法:首先要确认药物是否有吸收,在含有药物的培养基中加入CCK-8,测定450 nm的吸光度,如果它的吸光度比不含药物的培养基 (加CCK-8)的吸光度高,则证明药物有影响,可在加CCK-8之前更换培养基,去掉药物的影响。
Q17:每次测定的数值不一样,是什么原因?如何解决?
A17:可能会有以下几个原因: 1. 当在培养箱内培养时,培养板最外一圈的孔最容易干燥挥发,由于体积不准确而增加误差。 一般情况下,最外一圈的孔只加培养基,不作为测定孔用。 2. 有可能会因为CCK8沾在壁上而产生误差,建议在加入CCK-8后,轻轻敲击培养板以帮助混匀。 3. 每孔的细胞数量过多或过少。请预先在1,000-100,000个/孔范围内摸索条件。
Q18:如何设定空白对照?
A18:在不含细胞的培养基中加入CCK-8,培养一定的时间,测定450 nm的吸光度即为空白对照。在做加药实验(细胞毒性实验)时,还应考虑药物的吸收,可在不含细胞,加入药物的培养基中加入CCK-8,培养一定的时间,测定450 nm的吸光度作为空白对照。
Q19:哪些物质会影响CCK-8的测定?
A19:当有还原性物质存在时会影响CCK-8的测定,例如含有维生素C的Glucose等 (一般培养基中的量不多,酚红或血清不影响测定)。在有酚红存在的情况下,会增加空白吸收,但不影响测定,扣除空白吸收即可。
Q20:在实验中吸光度值太高,如果不能减少细胞数量,如何解决?
A20:可以缩短加入CCK-8后的培养时间。例如:可以把加入CCK-8试剂后的培养时间由2小时缩短为1小时。
Q21:设定参比波长的目的是什么?必须设定吗?
A21:不一定要设定。CCK-8试剂在参比波长没有吸光度。设定参比波长的目的是为了取出由于样品混浊所带来的吸收。
Q22:说明书上仅写了96孔板的测定方法,如果使用24孔板货12孔板,应该加多少量的CCK-8试剂?
A22:一般情况下建议加入CCK-8试剂的量是培养基体积的1/10。
Q23:必须预培养细胞吗?
A23:不一定。如果要向保持细胞的最好状态,建议预培养细胞。如果不做细胞预培养,细胞内的脱氢酶可能会不稳定。也有人不做细胞预培养,但在做标准曲线和检测时需要统一检测条件。
Q24:如果加入的药物中含有金属,是否会有影响?
A24:金属对CCK-8显色有影响。当终浓度为1 Mm的氯化亚铅、氯化铁、硫酸铜会抑制5%、15%、90%的显色反应,使灵敏度降级。如果终浓度是10 Mm的话,将会100%抑制。
Q25:预培养后,更换培养基需要细胞计数吗?
A25:一般情况下用胰蛋白酶处理对数增长期的细胞,用血球计数盘计数,制备成一定浓度的细胞悬液即可。如果想要精密计数细胞的话,可以预培养后取培养基用血球计数盘进行计数。
Q26:CCK-8对于不同的细胞,灵敏度是否一样?
A26:不一样,悬浮细胞与贴壁细胞相比较难染色。对于贴壁细胞,一般加入CCK-8培养1-4小时吸光度已经很高,但对于悬浮细胞则可能吸光度较低,可以通过延长CCK-8的加入时间或增加细胞数量来解决。
Q27:悬浮细胞和贴壁细胞在数量上有何区别?
A27:悬浮细胞由于显色比较困难,一般需要增加细胞数量和延长培养时间。贴壁细胞显色比较容易,若细胞数量过大,有时吸光度会超过酶标仪的读数。
Q28:应该每次做标准曲线吗?
A28:建议每次做。虽然细胞是一样的,但是细胞的状态不一定一样,对于状态不一样的细胞,建议每次做标准曲线。如果试剂的批号不一样,灵敏度可能会有轻微的差异,对于不同的批号建议分别做标准曲线。
Q29:有时在药物作用情况下,细胞已经死亡,但是脱氢酶的活性还在,是否能计算细胞数量?
A29:不能。由于CCK-8是通过和细胞内的脱氢酶进行反应间接反映活细胞数量

参考文献

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日本同仁化学CCK-8试剂盒

规格500T,具体价格和货期请咨询0或者

Cell Counting Kit-8(CCK-8试剂盒)是由同仁化学研究所(Dojindo)开发的检测细胞增殖、细胞毒性的试剂盒,为MTT法的替代方法,试剂盒中采用自己开发的水溶性四唑盐-WST-8,在美国,欧洲等国家地区均持有专利,同仁化学研究所于2006年在中国获得了WST的注册商标。

 

CCK-8法与普通的MTT法相比,具有显著特点:

★灵敏度高,数据可靠,重现性好

★操作简便,省时省力

★水溶性,不需要换液,尤其适合于悬浮细胞

★无需放射性同位素和有机溶剂,对细胞毒性低

★为1瓶溶液,毋需预制,即开即用

★适合于高通量药物筛选

CCK-8用途:药物筛选、细胞增殖测定、细胞毒性测定、肿瘤药敏试验

CCK-8试剂盒在国内知名科研院所、重点大学、三甲医院被广泛应用,国际认可度高,使用CCK-8发表的中外文献达600多篇,其中截止08年底SCI影响因子IF>10分的论文有37篇,最高IF38.5分

[Heterozygosity with respect to Zfp148 causes complete loss of fetal germ cells during mouse embryogenesis,Nature Genetics 33, (01 Feb 2003)]

CCK-8试剂与MTT等方法灵敏度比较

CCK-8试剂毒性:CCK-8和其他检测方法对比可以得出——CCK-8对细胞几乎无毒性,不伤害细胞,细胞可重复利用

CCK-8           P公司产品         R公司产品

(操作说明请参考中英文说明书或来电/在线咨询)

CCK-8 试剂盒利用了同仁化学研究所(Dojindo)开发的四唑盐——WST-8 (2-(2-甲氧基-4-硝苯基)-3-(4-硝苯基)-5-(2,4-二磺基苯)-2H-四唑单钠盐),它在电子载体1-Methoxy PMS存在的情况下能够被还原成水溶性的甲臜染料。CCK-8溶液可以直接加入到细胞样品中;不需要预配各种成分。CCK-8法是用于测定细胞增殖或细胞毒性试验中活细胞数目的一种高灵敏度,无放射性的比色检测法。CCK-8被细胞内脱氢酶生物还原后生成的橙色甲臜染料能够溶解在组织培养基中,生成的甲臜量与活细胞数量成正比。WST-8法检测细胞增殖、细胞毒性实验的灵敏度比其它四唑盐如MTT, XTT, MTS或WST-1高。由于CCK-8溶液相当稳定,并且对细胞没有毒性,因此可以长时间孵育。

CCK-8 检测步骤

1. 向各孔中加入100 μl细胞悬液。a)
2. 在37℃下预孵育培养板。b)
3. 向各孔中加入各浓度的待测溶液c)10 μl。
4. 37℃下孵育。
5. 向各孔中加入10 μl的CCK-8溶液d)。
6. 37℃下孵育1-4小时。e)
7. 测定450 nm处的OD值。

a) 使用适当的培养基制备50,000-100,000个/ml的细胞悬液。
b) 建议使用CO2培养箱过夜预培养。
c) 使用培养基或PBS来制备溶液。
d) 如果待测溶液有还原性,测定不含细胞,但含有CCK-8的待测溶液在450 nm处的空白吸光度。如果该吸光度很小,则可以直接加入CCK-8 ,如果吸光度相对较大,则需要除去培养基,并用培养基洗涤细胞两次,然后加入新的100 μl培养基和10 μl CCK-8进行检测。
e) 白细胞可能需要培养较长时间。

活力计算

细胞活力*(%)=[A(加药)-A(空白)]/[A(0加药)-A(空白)] ×100
A(加药):具有细胞、CCK-8溶液和药物溶液的孔的吸光度
A(空白):具有培养基和CCK-8溶液而没有细胞的孔的吸光度
A(0加药):具有细胞、CCK-8溶液而没有药物溶液的孔的吸光度
*细胞活力:细胞增殖活力或细胞毒性活力

中文说明书下载

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