人淋巴细胞的来源是外周血，分离的原则是收率较高，纯度较好，失活较低，根据不同试验有相对纯度，无论采用哪种方法，应尽较大可能保持细胞应有活性。分离的技术可根据细胞的物理性状和表面标志设计，根据不同实验目的可采用密度梯度离心法、吸附分离法和其它特殊分离法。

Böyum在密度梯度离心法的基础上提出了一种更方便，更快速的——通过使用Ficoll®甲泛影钠溶液离心快速分离方法。稀释的血液在Ficoll®甲泛影钠溶液中分层，低速短时离心。红细胞和沉降到管底的粒细胞，和单个核细胞（淋巴细胞）和血小板可以从两个分层之间收集。许多研究者不断努力，修订了Böyum方法，MP生物医学公司生产的LSM，方法的独特之处是运用,泛影钠成功的代替了甲泛影钠。

 方法：
除去血液中的纤维蛋白或肝素处理血液以1：1的比例用生理盐水或平衡盐溶液稀释，在分离溶液中分层，低速离心30分钟。通过离心，迁移能力不同最终形成不同的细胞层。大部分的红细胞和粒细胞通过梯度迁移形成颗粒状。由于其密度不同，淋巴细胞和其他单个核细胞（单核细胞和血小板）分布在在血浆和LSM两层中间。淋巴细胞可以通过回抽分层回收，在进一步去除血小板，LSM和血浆。

试剂：
LSM® is a sterile filtered solution which contains 6.2g Ficoll and 9.4 g sodium diatrizoate per 100 ml. The density is 1.0770-1.0800 g/ml at 20℃。

LSM® 是一种灭菌过滤溶液，每100毫升包含6.2克聚蔗糖和9.4克钠胺。密度是1.0770-1.0800克/毫升20℃。

使用说明：
以下的操作步骤是最初由Böyum.设计的程序的众多改良版本中的一种。此程序的改良是通过运用除去血液中的纤维蛋白或抗凝血剂处理人体血液；这种改良对于其他物种来源血液或者其他组织非常有必要。
1. 轻轻颠倒瓶子使LSM充分混合
2. 无菌转移3 mlLSM到15 ml离心管中。

3. 混合2 ml除纤维蛋白血液或肝素处理血液 和2 ml 生理盐水
4. 仔细的将稀释血液加入3 mlLSM（室温）于15ml离心管中，在血液和LSM中形成一个明显的分层。不要将稀释血液混合入LSM中。
5. 室温下400g离心15-30分钟，离心可以沉淀红细胞和多核白细胞同时可以在LSM上形成一层单核淋巴细胞，如上图所示。
6. 吸出淋巴细胞上方2-3mm的血浆。
7. 吸取淋巴细胞层以及它下面一半的LSM和转移到另外的一个离心管。加入等体积的平衡盐缓冲液至淋巴细胞离心管中，室温离心10分钟，离心速度设定在既不损伤细胞又能沉淀细胞即刻，例如160 – 260 x g（去除LSM和降低血小板的百分比）。
8. 用平衡盐缓冲液清洗细胞，用适当的培养基重悬细胞.

上海金畔生物科技有限公司除了代理MP.Biomedicals（美国安倍医疗）的产品以外，还代理众多国际知名品牌，如LifeSpan、R&D、Abnova、AppliChem、Source Bioscience（Geneservice）等，欢迎直接给我们来电咨询产品。如果你对上述产品及相关技术信息感兴趣，请致电021-50837765 到上海金畔生物科技有限公司垂询相关的最优产品和解决方案，或索取相关手册和资料。我们会为您做的更多！

生物素与亲和素的结合只需要生物素的脲基环部分。因此可将其戊酸侧链通过酰胺键与核酸分子相连，构成生物素标记的核酸探针、标记探针与固定在滤膜（硝酸纤维素滤膜或尼龙膜）上或固定在组织细胞或染色体原位的核酸分子的同源序列互补杂交。探针和待测核酸在杂交前若为双链，应先变性成单链，然后用偶联有酶或荧光物质的亲和素的探针与待测核酸的片段互补杂交，使杂交部位显色（加入相应的酶底物）或产生荧光。

随机引物DNA生物素标记试剂盒(Detector™ Random Primer DNA Biotinylation Kit)通过DNA复制的延伸反应，以6碱基的随机序列作为引物，用缺乏5′-3′外切活性的Klenow大片段（有5′-3′聚合活性和3′-5′外切校正活性）作为DNA延伸聚合酶，催化掺入生物素标记的biotin-N4-dCTP分子的dNTP进行延伸反应，最终使生物素标记的dCTP分子嵌入进DNA分子探针中。

Detector™随机引物探针标记试剂盒内的组分均被优化设计，能高效扩增，并且检测灵敏。适合该检测方案的模板大小为300bp-1000bp大小（对于大于1000bp的模板，建议首先使用限制性内切酶酶切成300-1000bp大小；对于低于300bp的模板进行探针标记，建议使用KPL的PCR DNA生物素标记试剂盒）。产生的探针片段可以到100-1000个碱基，平均大小在300bp。该探针标记试剂盒制备探针最快只需1小时，制备的DNA探针在-20°C下可保存1年。

Detector™随机引物探针标记试剂盒内包括预标记的标准样（用于检测在标记反应中DNA的合成量），经过系列稀释的标准样和新标记的探针，固定在膜上，并使用酶标的链霉亲和素蛋白，通过底物或化学发光检测，以最终确定标记探针的量。为获得最高的敏感性和最低的背景，探针的应用浓度需要经过试验优化。

Detector™随机引物探针标记试剂盒制备的标记探针可应用于Southern杂交、Northern杂交, 克隆或成斑杂交、点杂交及原位杂交等。

作为美国最早实现亲和素纯化二抗商业化的生物公司，同时也是世界上较大的二抗和底物显色系统的生产商。KPL一直提供高质量的用于分子生物学、免疫学、细胞生物学和体外诊断试剂及用于蛋白和核酸检测的试剂盒。针对核酸DNA探针标记，KPL有三种标记试剂盒供您选择，分别为随机引物DNA探针标记、PCR DNA探针标记以及反转录RNA探针标记。另外还有多种杂交显色底物及相关产品。如果您对KPL的产品感兴趣，请致电021-50837765到上海金畔生物科技有限公司免费索取相关产品资料，或者问询您所感兴趣的产品类型。