爱思进Axygen滤芯盒装透明吸头|移液吸头TF-20

特色


爱思进Axygen滤芯盒装透明吸头|移液吸头

  • 产品型号:TF-20
  • 产品时间:2021-07-30
  • 简要描述:爱思进Axygen滤芯盒装透明吸头|移液吸头供应上海金畔生物科技有限公司供应:移液器吸嘴,ELISA试剂盒,动物血清,全系荧光定量PCR耗材,产品包括:PCR单管、八联管、96孔板、384孔板。
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  • 产品简介

爱思进Axygen滤芯盒装透明吸头|移液吸头 美国*滤芯吸头/袋装盒装吸嘴进口 美国*带滤芯吸头200ul盒装 上海金畔供应 。

滤芯吸头:

适配范围:适配绝大多数品牌的单道、多道和电动移液器。

洁净度:洁净度高于PCR级的生物纯级。

灭菌处理:优质级吸嘴,无热源、无DNA酶和RNA酶,用户自己可以进行高压灭菌。

PCR:PCR级别吸嘴辐照消毒无菌,无热源、无DNA酶和RNA酶、无DNA和PCR抑制剂。

滤芯吸头  加长吸头

TF-20 20ul带滤芯吸头 1000支/10包/箱 1000支/10包/箱
TF-50 50ul带滤芯吸头1000支/10包/箱 1000支/10包/箱
TF-100 100ul带滤芯无色吸头1000个/10包/箱 1000支/10包/箱
TF-200 200ul带滤芯无色吸头1000个/10包/箱 1000支/10包/箱
TF-300 0.5~10ul带滤芯透明短吸头1000个/10包/箱 1000支/10包/箱
TF-350 300ul带滤芯吸头 1000支/10包/箱 1000支/10包/箱
TF-400 10ul带滤芯无色长吸头1000个/10包/箱 1000支/10包/箱
TF-1000 1000ul带滤芯吸头1000个/5盒/箱 1000支/5包/箱
TF-20-R-S 20ul盒装灭菌无色带滤芯吸头 96支/50盒/箱 10盒/5包/箱
TF-50-R-S 50ul带滤芯盒装灭菌长吸头 96支/50盒/箱 10盒/5包/箱
TF-100-R-S 100ul带滤芯盒装灭菌无色吸头96个/10盒/5彩 10盒/5包/箱
TF-200-R-S 200ul带滤芯灭菌盒装无色吸头96个/10盒/5彩 10盒/5包/箱
TF-300-R-S 10ul带滤芯盒装灭菌短吸头96个/10盒/5彩/ 10盒/5包/箱
TF-350-R-S 300ul带滤芯盒装灭菌吸头 96支/50盒/箱 10盒/5包/箱
TF-400-R-S 10ul带滤芯盒装灭菌长吸头96个/10盒/5彩/箱 10盒/5包/箱
TF-1000-R-S 1000ul带滤芯盒装灭菌吸头100个/10盒/5彩/ 10盒/5包/箱
TF-20-L-R-S 20ul带滤芯灭菌盒装低吸附吸头96个/10*5盒 10盒/5包/箱
TF-100-L-R-S 1-100ul带滤芯灭菌盒装吸头(低吸附)96个/盒 10盒/5包/箱
TF-200-L-R-S 200ul带滤芯灭菌盒装低吸附吸头96个/10*5盒 10盒/5包/箱
TF-300-L-R-S 0.5-10ul带滤芯盒装灭菌低吸附吸头96个/盒 10盒/5包/箱
TF-1000-L-R-S 1000ulMAXYMum Recovery盒装灭菌 100支/盒 10盒/5包/箱
FX-50-L-R 盒装低吸附机械臂吸头96支/10盒/5包/箱 10盒/5包/箱

爱思进Axygen滤芯盒装透明吸头|移液吸头

特点:带滤芯移液器吸嘴,防止因空气和样品上方的气溶胶引起空气对样品的污染和样品间的交叉污染,特别设计的吸嘴顶部,内侧呈柔软弹性锥体,使用时对移液器起到缓冲保护作用,且无须用力即可与移液器端头严密吻合,使得吸嘴和移液器之间密封性更好。

爱思进Axygen滤芯盒装透明吸头|移液吸头TF-20

200ul盒装无菌带滤芯吸头 进口无菌带滤芯吸头

试剂盒

BS-4021 牛叶酸结合蛋白(FBP)ELISA试剂盒
BS-4024 牛组织型纤溶酶原激活剂(t-PA)ELISA试剂盒
BS-4025 牛补体片断3a(C3a)ELISA试剂盒
BS-4026 牛口蹄疫病毒非结构蛋白3ABC(FMDV-NSP3ABC)抗体ELISA试剂盒
BS-4027 牛补体蛋白7(C7)ELISA试剂盒
BS-4028 牛补体蛋白9(C9)ELISA试剂盒
BS-4029 牛总免疫球蛋白(TIG)ELISA试剂盒
BS-4030 牛脂多糖(LPS)ELISA试剂盒
BS-4031 牛补体片断5a(C5a)ELISA试剂盒
BS-4032 牛组织因子(TF)ELISA试剂盒
BS-4033 牛抗酒石酸酸性磷酸酶5b(TRAP5b) ELISA试剂盒
BS-4034 牛T-细胞免疫调节因子1(TCIRG1)ELISA试剂盒
BS-4035 牛胰岛素(INS) ELISA试剂盒
BS-4036 牛胆囊收缩素(CCk)ELISA试剂盒
BS-4039 牛γ干扰素(IFN-γ)ELISA试剂盒
BS-4040 牛β乳球蛋白(β-Lg)ELISA试剂盒

适应客户:医院检验科PCR实验室,中心实验室,肝病中心;第三方检测机构,科研院所,大专院校,制药厂,试剂生产厂家,疾控中心,检验检疫。 

 

温馨提示:不可用于临床治疗。

Axygen10ul无菌滤芯盒装吸头(透明)TF-300

特色


Axygen10ul无菌滤芯盒装吸头(透明)

  • 产品型号:TF-300
  • 产品时间:2021-08-12
  • 简要描述:Axygen10ul无菌滤芯盒装吸头(透明)上海金畔生物科技有限公司供应:移液器吸嘴,ELISA试剂盒,动物血清,全系荧光定量PCR耗材,产品包括:PCR单管、八联管、96孔板、384孔板。
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  • 产品简介

Axygen10ul无菌滤芯盒装吸头(透明) 美国*滤芯吸头/袋装盒装吸嘴进口 美国*带滤芯吸头200ul盒装 上海金畔供应 。

货号:TF-300

产品描述:0.5~10ul带滤芯透明短吸头1000个/10包/箱

特点:带滤芯移液器吸嘴,防止因空气和样品上方的气溶胶引起空气对样品的污染和样品间的交叉污染,特别设计的吸嘴顶部,内侧呈柔软弹性锥体,使用时对移液器起到缓冲保护作用,且无须用力即可与移液器端头严密吻合,使得吸嘴和移液器之间密封性更好。

带滤芯吸头

TF-20 20ul带滤芯吸头 1000支/10包/箱
TF-50 50ul带滤芯吸头1000支/10包/箱
TF-100 100ul带滤芯无色吸头1000个/10包/箱
TF-200 200ul带滤芯无色吸头1000个/10包/箱
TF-350 300ul带滤芯吸头 1000支/10包/箱
TF-400 10ul带滤芯无色长吸头1000个/10包/箱
TF-1000 1000ul带滤芯吸头1000个/5盒/箱
TF-20-R-S 20ul盒装灭菌无色带滤芯吸头 96支/50盒/箱
TF-50-R-S 50ul带滤芯盒装灭菌长吸头 96支/50盒/箱
TF-100-R-S 100ul带滤芯盒装灭菌无色吸头96个/10盒/5彩
TF-200-R-S 200ul带滤芯灭菌盒装无色吸头96个/10盒/5彩
TF-300-R-S 10ul带滤芯盒装灭菌短吸头96个/10盒/5彩/
TF-350-R-S 300ul带滤芯盒装灭菌吸头 96支/50盒/箱
TF-400-R-S 10ul带滤芯盒装灭菌长吸头96个/10盒/5彩/箱
TF-1000-R-S 1000ul带滤芯盒装灭菌吸头100个/10盒/5彩/
TF-20-L-R-S 20ul带滤芯灭菌盒装低吸附吸头96个/10*5盒
TF-100-L-R-S 1-100ul带滤芯灭菌盒装吸头(低吸附)96个/盒
TF-200-L-R-S 200ul带滤芯灭菌盒装低吸附吸头96个/10*5盒
TF-300-L-R-S 0.5-10ul带滤芯盒装灭菌低吸附吸头96个/盒

Axygen10ul无菌滤芯盒装吸头(透明)

滤芯吸头:

适配范围:适配绝大多数品牌的单道、多道和电动移液器。

洁净度:洁净度高于PCR级的生物纯级。

灭菌处理:优质级吸嘴,无热源、无DNA酶和RNA酶,用户自己可以进行高压灭菌。

PCR:PCR级别吸嘴辐照消毒无菌,无热源、无DNA酶和RNA酶、无DNA和PCR抑制剂。

200ul盒装无菌带滤芯吸头 进口无菌带滤芯吸头

ELISA试剂盒

BS-0431 人颗粒酶A(Gzms-A)ELISA试剂盒
BS-0433 人葡萄糖依赖性胰岛素释放多肽(GIP)ELISA试剂盒
BS-0434 人透明质酸(HA)ELISA试剂盒
BS-0435 人Ⅳ型胶原(Col Ⅳ)ELISA试剂盒
BS-0436 人Ⅲ型胶原(Col Ⅲ)ELISA试剂盒
BS-0437 人马尿酸(HPA)ELISA试剂盒
BS-0453 人谷胱甘肽过氧化酶(GSH-Px)ELISA试剂盒 
BS-0454 人谷胱甘肽(GSH)ELISA试剂盒 
BS-0455 人谷氨酸脱氢酶(GDH)ELISA试剂盒 
BS-0456 人抗平滑肌抗体(ASMA)ELISA试剂盒
BS-0459 人α谷胱甘肽S转移酶(α-GST)ELISA试剂盒
BS-0460 人α干扰素(IFN-α)ELISA试剂盒
BS-0461 人内毒素(ET)ELISA试剂盒
BS-0462 人内皮型一氧化氮合成酶3(eNOS-3)ELISA试剂盒

适应客户:医院检验科PCR实验室,中心实验室,肝病中心;第三方检测机构,科研院所,大专院校,制药厂,试剂生产厂家,疾控中心,检验检疫。 

 

温馨提示:不可用于临床治疗。

WAKO 292-81101 生物制药残留DNA提取试剂盒(碘化钠法)

特色

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生物制药残留DNA提取试剂盒(碘化钠法)生物制药残留DNA提取试剂盒(碘化钠法)

 

 

残留DNA提取试剂盒遵照中国药典记载的碘化钠法,适用于疫苗和治疗用生物制品所含宿主细胞残余DNA的提取。

残留DNA提取试剂盒可以提取样品中含有的极微量的DNA,回收率较高。DNA的提取操作时间为60-90 min。提取的DNA可以通过qPCR进行定量。

 

 

生物制药残留DNA提取试剂盒(碘化钠法)

生物制药残留DNA提取试剂盒(碘化钠法)

 

 

◆特点

 

● 遵照中国药典登载的碘化钠法*1

● 高回收率

● 单管操作(无需换管) ,耗时仅60-90 min

● 不需要苯酚和氯仿等有机溶剂

● 兼容多种DNA

 

*1 为使DNA检测方法与国际标准保持同步,中国药典(The Chinese Pharmacopoeia)宣布建立残留细胞

*1 DNA检测国家标准。碘化钠法将作为残留DNA提取方法,被新增至2020版的中国药典中。

 

 

◆原理

 

1. 使样品中的蛋白质和脂质溶于碘化钠和N-月桂基肌氨酸钠;

2. 异丙醇与糖原选择性地共沉淀DNA。

 

 

◆使用方法

 

方法1

生物制药残留DNA提取试剂盒(碘化钠法)

方法2

生物制药残留DNA提取试剂盒(碘化钠法)

 

 

◆应用实例

 

DNA spiking test(加标回收实验)

生物制药残留DNA提取试剂盒(碘化钠法)

生物制药残留DNA提取试剂盒(碘化钠法)

生物制药残留DNA提取试剂盒(碘化钠法)

 

DNA Extractor™ Kit可以高产量提取残留DNA,甚至少量残留DNA。

 

 

◆试剂盒构成

 

产品编号

内容物

内容量

299-81111

碘化钠溶液, CP

26 mL

296-81121

N-月桂酰肌氨酸钠溶液, CP

1.2 mL

293-81131

洗净液A, CP

42 mL

290-81141

洗净液B, CP

40 mL×2

297-81151

糖原溶液, CP

0.1 mL

 

备注:每种成分不单独出售

 

 

更多详情请点击此处查看宣传单页

点击链接查看DNA Extractor Kit——2020中国药典版碘化钠法操作步骤图文版

 

[1] 

Ikeda, Y., Iwakiri, S., & Yoshimori, T. (2009). Development and characterization of a novel host cell DNA assay using ultra-sensitive fluorescent nucleic acid stain “PicoGreen”. Journal of pharmaceutical and biomedical analysis, 49(4), 997-1002

 

[2] 

Cai, H., Gu, X., Scanlan, M. S., & Lively, C. R. (2011). Development of a quantitative PCR assay for   residual mouse DNA and comparison of four sample purification methods for DNA isolation. Journal of pharmaceutical and biomedical analysis, 55(1), 71-77.

 

[3] 

牛冬云, 连炜, 何静, 邬智刚, & 柯潇. (2013). 康柏西普制品中 CHO 细胞 DNA 残留量的检测. 中国生物制品学杂志, 26(7), 1023.

 

[4] 

周朝东, 黄哲, & 尉然. (2016). 荧光定量pcr法测定重组人干扰素α2b原液中宿主dna的残留%determination of residual host cell dna in recombinant human interferonα2 b substances by quantitative pcr. 中国生化药物杂志, 036(004), 193-195.

 

[5] 

周朝东, 苏喆, & 黄哲甦. (2017). 荧光定量pcr法测定重组人/门冬胰岛素原料中宿主dna的残留量%determination of residual host cell dna in recombinant human/aspart insulin substances by quantitative pcr. 药物分析杂志, 037(003), 477-481.

 

[6] 

任玉莹, 刘建凯, 尹珊珊, 徐颖之, 邓海清, & 殷建齐等. (2017). Sabin株脊髓灰质炎灭活疫苗宿主细胞dna残留量检测方法研究. 国际生物制品学杂志(40), 124.

 

 

产品编号 产品名称 产品规格 产品等级
292-81101 残留DNA提取试剂盒(碘化钠法)
DNA Extractor™ Kit for Residual DNA, CP Method (Sodium Iodide Method)
50 tests

WAKO 019-19741 小胶质细胞/巨噬细胞特异性抗体Anti Iba1, Rabbit

特色

小胶质细胞/巨噬细胞特异性抗体Anti Iba1, Rabbit

作用原理及概述:
钙离子作为信号转导通道中的信使,在所有细胞包括中枢神经细胞的生命活动中起重要作用。钙离子与不同的钙结合蛋白结合后进行级联反应。Iba1是能与巨噬细胞和小胶质细胞发生特异性结合的钙结合蛋白,当这些细胞激活后,Iba1的表达量上调,因此Iba1通常作为鉴定小胶质细胞的标记物使用。近来研究发现,小胶质细胞除了提供营养、保护神经的作用外,还被证明可产生NO、TNF- α、IL-1 β等物质,因此将小胶质细胞定义为中枢神经系统中的巨噬细胞样吞噬细胞,具有重要的免疫细胞作用。当病原菌,病毒入侵中枢神经系统时会起免疫监视的作用。近来研究发现,该细胞可能与神经退行性疾病的发生和发展有关。本产品是可与小胶质细胞发生特异性反应的兔多抗,配合对星形胶质细胞有特异性的GFAP单抗,可进行双染色。
抗原: 合成肽(Iba1 的C 末端序列)
外观: TBS 溶液(1mg/ml)
提纯: 抗原亲和提纯
特异性: 对小胶质细胞、巨噬细胞特异反应。不会与神经元、星形胶质细胞发生交叉反应。
能与人、小鼠、大鼠Iba1反应。
用法: ① Iba1抗体,兔源(Immunocytochemistry 用)适合Immunocytochemistry。
只需1 ~ 2 μg/ml即可进行实验。
② Iba1抗体,兔源(Western blotting 用)适合Western blotting。
只需0.5 ~ 1μg/ml即可进行实验。
l 兔源细胞的双染色及同视野的相差显微镜图

绿色:Iba1抗体,兔源(Immunocytochemistry 用)(小胶质细胞)
红色:抗GFAP 抗体(星形胶质细胞)

Western blotting

Lane1:Iba1 20ng
Lane2:Rat Microglia(10μg)
Lane3:Rat Neuron(10μg)
Lane4:Rat Adult Brain(10μg)
一抗: Iba1抗体,兔源(Western blotting 用)(0.5μg/ml)
二抗: HRP 标记抗兔IgG
检测方法: 化学发光法 WAKO小胶质细胞/巨噬细胞特异性抗体Anti Iba1, Rabbit 019-19741
货号 品名 用途 规格 备注
019-19741 抗 Iba1,小兔(Immunocytochemistry用) 免疫化学 50μg 来电咨询
016-20001 抗 Iba1,小兔(Western blotting用) 免疫化学 50μg 来电咨询
WAKO小胶质细胞/巨噬细胞特异性抗体Anti Iba1, Rabbit 019-19741

WAKO小胶质细胞/巨噬细胞特异性抗体Anti Iba1, Rabbit 019-19741

DNA Extractor® Kit for Residual DNA, CP Method(Sodium Iodide Method)  残留DNA提取试剂盒(碘化钠法) 品牌:Wako

特色


品牌:Wako
CAS No.:
储存条件:2-10℃
纯度:
产品编号

(生产商编号)

等级 规格 运输包装 零售价(RMB) 库存情况 参考值

292-81101

50 tests 咨询


* 干冰运输、大包装及大批量的产品需酌情添加运输费用


* 零售价、促销产品折扣、运输费用、库存情况、产品及包装规格可能因各种原因有所变动,恕不另行通知,确切详情请联系上海金畔生物科技有限公司客服。

产品描述相关资料下载相关产品浏览记录 中国药典2020版收录的碘化钠法。

BAMBANKER BAMBANKER冻存液 品牌:Lymphote

特色


品牌:Lymphotec
CAS No.:
储存条件:2-10℃
纯度:
产品编号

(生产商编号)

等级 规格 运输包装 零售价(RMB) 库存情况 参考值

306-14684

20 ml×5 1,470.00


* 干冰运输、大包装及大批量的产品需酌情添加运输费用


* 零售价、促销产品折扣、运输费用、库存情况、产品及包装规格可能因各种原因有所变动,恕不另行通知,确切详情请联系上海金畔生物科技有限公司客服。

产品描述相关资料下载相关产品浏览记录

无血清细胞冻存液。

使用方便,收集的细胞用该试剂1ml重悬后即可放入-80度保存,可在-80度长期保存,也可转移到液氮中保存。

与实验室常用的细胞冻存液相比,省却了逐步降温步骤,极大方便实验者的操作,而且不使用血清,另外细胞的复苏效率比较高。

含有DMSO。

MagCapture™ 外泌体提取试剂盒PS促销活动

特色


MagCapture™ 外泌体提取试剂盒PS促销活动

MagCapture™ 外泌体提取试剂盒PS促销活动



【活动编号:EXOSOME-ISO】

【本活动已结束】

  外泌体是活细胞分泌的30-150纳米的囊泡,里面包含了蛋白、DNA和RNA。近年来发现:外泌体不仅参与了细胞间通信,也影响肿瘤的生长和转移、肿瘤的微环境、免疫调节等。外泌体是在血液、唾液、尿液、脑脊液和母乳等多种体液中均有分布,以外泌体作为疾病诊断标志物开发的液体活检技术,正显示出巨大的临床应用前景。另外,外泌体天然赋予的精准靶-归巢特异性和跨越体内生物屏障的能力在药物递送方面也展示出很好的应用潜力,生物工程外泌体正在研发中。

  当前外泌体研究中较大的技术瓶颈是外泌体的分离。外泌体的分离方法有很多种,例如超速离心、PS亲和法、凝胶排阻层析、免疫沉淀、微流控芯片等。

  Wako(日本和光)研发的PS亲和法,MagCapture™ Exosome Isolation Kit PS实现了简捷地纯化高纯度完整状态的外泌体。这是迄今为止取代黄金标准超速离心法的新型外泌体纯化法。


MagCapture™ 外泌体提取试剂盒PS促销活动 


◆特点


● 可提取高纯度完整的外泌体

● 可从血清、血浆、尿液等样品中提取外泌体

● 重复性高,回收量稳定

● 操作简单,可处理多个样品(无需超速离心)

◆促销产品


产品编号

产品名称

产品规格

293-77601

MagCapture™ Exosome Isolation Kit PS
MagCapture™ 外泌体提取试剂盒PS

10次用



◆相关产品


产品编号

产品名称

产品规格

299-77603

MagCapture™ Exosome Isolation Kit PS
MagCapture 外泌体提取试剂盒PS

2次用

297-79201

PS Capture™ Exosome ELISA Kit (Anti Mouse IgG POD)
PS Capture™ 外泌体ELISA试剂盒(抗小鼠IgG POD)

96回用


欲了解相关产品信息请点击文字:

MagCapture™ 外泌体提取试剂盒PS

PS Capture™ 外泌体ELISA试剂盒(抗小鼠IgG POD)

什么是外泌体

特色


什么是外泌体

金泽大学医学系免疫学 教授

華山 力成

 

什么是外泌体

  近年来,细胞外囊泡(EV)相关的研究正加速发展。2011年每年有约200篇相关论文发布,但2016年一年间有1000篇以上的相关论文发布,论文内容涉及各种生理功能和病理症状等方面。EV大致可分为核内体来源的外泌体和细胞质膜来源的微囊泡,但即便是用提取纯度最高的超速离心法也难以将二者完全分离,所以简单地将10,000×g离心后上清中的EV称为小EV(主要是外泌体)1)。外泌体是由各种细胞分泌的小型膜囊泡(直径30~100nm),存在于大多数体液(如血液、尿液、髓液等)和细胞培养液中。外泌体是由脂质双层膜包被的膜囊泡,产生于称为多囊泡体的细胞外囊泡中,多囊泡体通过与细胞膜融合将外泌体释放到细胞外。外泌体含核内体来源的蛋白质(如ESCRTs)、细胞内运输相关蛋白(如RabGTPase等)及细胞膜来源蛋白(如CD63, CD81等)等各种内分泌细胞来源的蛋白和RNA,同时还含有分泌细胞膜来源和内体膜来源的脂质(如胆固醇和鞘磷脂等)2)。多年来,外泌体被认为参与无用的细胞内含物质的释放。但是近年来,外泌体在活体内作为运载脂质、蛋白质、RNA等细胞间信息传递的新型媒介而倍受瞩目。随着其功能在生理及病理功能的阐明,外泌体在临床应用的相关研究中,特别是诊断治疗、生物标记的开发也迅速发展起来。

  现在,外泌体研究几乎涉及所有的研究领域(免疫、神经系统、癌症、内分泌、循环系统等)。例如,免疫细胞来源的外泌体含有抗原肽/MHC复合体和可能控制着免疫细胞间抗原信息的交换、免疫细胞活化/非活化等各种免疫应答机制的各种抗原3)。外泌体在神经系统中与神经回路的控制相关4),同时各种神经退行性疾病的致病蛋白还可以通过外泌体释放到细胞外并传递到其他细胞,与病情发展密切相关5)。 癌细胞释放的外泌体含有许多与血管新生和免疫逃逸相关的分子,构建适合癌细胞生长的微环境,促进癌细胞的发展6)。另外,癌细胞来源的外泌体上粘着分子的表达形式决定着癌症向器官的转移途径7)。最近,有报告指出脂肪细胞释放的外泌体对肝脏的遗传基因表达有控制作用8)。许多病毒利用外泌体的产生路径感染细胞,受病毒感染的细菌和寄生虫通过外泌体控制其他受细胞感染的细菌、寄生虫的活动9、10)

  上述这些功能几乎都是通过细胞分泌到外泌体中的分子引起的。其中已发现外泌体内含有分泌细胞来源mRNA和miRNA,外泌体与细胞间遗传基因表达信息的水平传播相关性倍受瞩目11)。这些RNA被外泌体的脂质双层膜所保护,不会被核糖核酸酶所分解,可以在血液和体液中稳定存在。被靶细胞吞噬的外泌体通过与内体膜融合,将RNA释放到靶细胞的细胞质中。释放出来的mRNA翻译为蛋白质,但miRNA抑制目的基因的翻译,因此外泌体在靶细胞内控制基因的表达。外泌体的蛋白质有数万种,mRNA、miRNA的种类有数千种以上,它们的结构除了受细胞来源不同的影响,还受到细胞状态不同的影响。另外,外泌体中这些物质的结构与它们在分泌细胞内的结构不同,所以可能存在一种外泌体特异蛋白和mRNA/miRNA在外泌体内选择性积累的机制。这种特异性可将外泌体内的RNA作为生物标记,更进一步作为治疗开发方法的靶点。外泌体中的mRNA一旦被靶细胞吞噬,能够引起这个细胞内的功能性蛋白的表达,但外泌体中多数的miRNA是前体而非功能性miRNA,这些miRNA起着何种生理性意义,学者们正在研究。由于外泌体含有各种蛋白质、RNA和脂质,研究人员正将其进行细胞分类,建立数据库(ExoCarta)。此外,在世界各地分别进行着运用蛋白质组学、转录组学和系统生物学的大规模分析工作,而FunRich的EV plugin作为一种通用的分析手段已被公布出来。今后,在推进外泌体研究方面,各领域的研究人员信息共享至关重要。

 


◆运用外泌体进行治疗和诊断的功能开发


  随着外泌体的功能逐渐被发现,近年来,应用这些功能的治疗法也在被开发出来。例如,血液中的成纤维细胞所释放的外泌体,可以促进角质形成细胞的移动和增殖以及血管新生来促进伤口愈合。有报导指出,外泌体内miRNA参与促进血管新生、抗炎症性和促进胶原蛋白沉淀等一系列过程12)。从癌症患者树突状细胞释放的外泌体中,含有各种癌症细胞来源的蛋白质,可以强化杀伤性T细胞对癌症细胞的特异性反应。利用此功能的抗肿瘤免疫疗法,目前正处于初期临床研究阶段13)。另外,科学家也尝试利用外泌体的抑制发病机制功能。例如,类风湿关节炎患者的滑膜成纤维细胞所释放的外泌体,高浓度集聚诱导细胞死亡的TNF-α,可使类风湿关节炎恶化14)。通过上述介绍可以知道癌症细胞来源的外泌体含有与癌症进展相关的分子,神经细胞来源的外泌体含有与神经退行性疾病相关的分子,因此,通过抑制或去除这些外泌体,有希望抑制疾病发生。随着今后的研究发展,外泌体功能逐步清晰,并扩大临床应用,有望将外泌体应用在各种疾病治疗上。甚至可尝试利用外泌体将siRNA和抗癌药剂等运输到目标细胞中。各种细胞粘着分子在外泌体膜表面表达,由其决定外泌体被运输往哪一种细胞,期望开发利用该特征的新型DDS15)。外泌体在体液中十分稳定,同时外囊泡所含的蛋白质和RNA被外泌体的脂质双层膜所包被也不会分解。另外在从体液中提取外泌体后,体液可长期稳定保存,因此外泌体有望成为临床检测的新型疾病生物标记。外泌体与各种疾病的相关性被检测出,特别是血液中释放的癌细胞来源的外泌体,其与正常细胞来源外泌体在结构分子上的差异倍受瞩目,并作为癌症早期诊断技术,应用于与癌症进展相关的研究16)。甚至人们期望将尿液中的外泌体作为肾脏、前列腺疾病、膀胱疾病的新型诊断标记,髓液中的外泌体作为脑内肿瘤和神经退行性疾病的新型标记物。

 


◆外泌体研究的课题和展望


  已经有许多关于外泌体作用的报导,根据这些现象实验中,从体液和培养上清中高纯度提取的高纯度外泌体,在活体内是否真的能发生作用尚未能确定。确认外泌体生理作用的唯一方法就是明确外泌体的释放机制,通过促进或抑制释放机制,分析会引起何种生理作用,这是进一步研究的发展方向。甚至活体内的外泌体动态(哪个外泌体迁移至何处)也会成为今后需要努力研究的重要课题。

  目前,提取外泌体的方法主要有超速离心法、PEG沉淀法,但这些方法混有非常多的杂质,必须慎重分析得到的是否是外泌体。超速离心法存在操作繁杂、回收量不稳定,不能用于定量分析、必须使用昂贵的超速离心机、无法进行多样品分析等问题。因此外泌体研究相对困难,需要尽快开发操作简单、可提取高纯度外泌体的技术。因此,日本和光着眼于巨噬细胞的外泌体受体Tim4蛋白,制备Tim4细胞外域与磁珠结合的“Tim4磁珠”17)。Tim4通过磷酯酰丝氨酸(PS)法特异性结合Tim4蛋白和磁珠,再经过含有EDTA的洗脱缓冲液进行分离,提取高纯度的完整外泌体。实际上,用PS亲和法提取的人白血病细胞释放的外泌体,其纯度与超离心法和PEG沉淀法提取外泌体做比较, PS亲和法提取的外泌体,其蛋白特异性检测可高出10~100倍以上,几乎没有混入外泌体以外的蛋白,回收量高,操作重复性好。结果表明,PS亲和法可以检测到许多目前为止都无法检测的外泌体蛋白质和RNA。应用Tim4的外泌体强结合能力,可用ELISA或FACS高灵敏度定性检测、定量分析外泌体。以前无法用超速离心法提取的微囊泡,也通过运用PS亲和法实现高纯度提取。本指导书中对该技术进行详细说明,这项技术的有用性今后将受到世界各方评价,有望在外泌体和微囊泡生理功能的分析研究上起重大贡献。

  外泌体的检测和提取还遇到一个困难即:对各种外泌体的分类。研究人员尚未统一定义以何种方法提取的细胞外囊泡可以称之为外泌体,给实验数据的分析和重复性确认带来困难。近年,随着国际细胞外囊泡协会的成立、世界性研究者研讨会的举办,提案MISEV指南作为国际标准,计划或已经开始进行EV研究的科学家请务必阅读这些方针18、19)。另外,建立记录各论文实验条件的数据库也可作为规避混乱的方法之一20)。一方面,随着EV研究倍受世界瞩目,各国启动了大型研究项目。美国启动NIH战略性大型项目(Extracellular RNA Communication),国际权威性学会——Gordon和Keystone Symposia也从2016开始成立会议小组。受到欧洲药物研究开发公司“创新药物倡议组织(IMI)”的支持推进的CANCER-ID项目,也包含EV研究在内。2017年日本选定了EV研究为文部科学省研究开发战略的目标之一,期待会加速今后的研究发展。无论如何,今后EV研究的根本就是必须有强有力的研究方法和技术,而PS亲和法有望成为其中之一。


◆参考文献


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Consortium E-T, et al. (2017) EV-TRACK : transparent reporting and centralizing knowledge in extracellular vesicle research. Nat Methods, 14 (3) : 228-232.

PS亲和法外泌体提取试剂盒

  MagCapture Exosome Isolation Kit PS提取高纯度完整状态的外泌体。

  外泌体是各种细胞外泌的直径在30-100nm之间的膜囊泡。因外泌体内含mRNA、microRNA等核酸和蛋白质对相邻细胞具有交换信息的功能。作为细胞间信号传导的通讯工具和作为癌等各种疾病的生物标记话题比较热门1、2)。近些年关于外泌体研究很广泛,但是关于外泌体相关的实验技术,关于需要改进的课题存在很多。

  例如,外泌体提纯方法中,超速离心法和聚合物沉淀法(市售试剂盒)混入多种杂质,给后续实验产生了许多障碍。抗体亲和法和密度梯度离心法,虽然可以提取到高纯度的外泌体,但不能提取完整外泌体,无法分析外泌体具有的生理功能,也是两种提取方法的问题所在。而免疫印迹法(WB)和Elisa检测法作为被广泛应用的外泌体检测的一般方法,又存在检测时需使用大量外泌体和难以检测到低表达水平的标记蛋白。

  为了解决外泌体实验遇到的上述的各种问题, Wako 研发出MagCapture™外泌体提取试剂盒PS(MagCapture™  Exosome Isolation Kit PS)提取高纯度细胞外囊泡。

  外泌体膜含有分泌细胞源的蛋白和脂质,众所周知磷脂酰丝氨酸(PS)在活细胞通过翻转酶作用导向细胞膜内侧,暴露在外泌体膜外侧3)。另外,T-cell immunoglobulin domain and mucin domain-containing protein 4(Tim4 通过巨噬细胞进行细胞凋亡的吞噬受体)蛋白通过细胞外域IgV域与含有钙离子的PS结合4)


什么是外泌体

  基于上述知识,我们利用Tim4固化磁珠,在钙离子存在下捕捉培养上清和血清等样品中的外泌体,再添加螯合剂洗脱外泌体,这种外泌体纯化方法是和金泽大学医学系免疫学华山教授共同开发,并取得了成功。5)这是迄今为止取代黄金标准超速离心法的新型外泌体纯化方法。


◆参考文献

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Tkach, M. et al. Communication by Extracellular Vesicles : Where We Are and Where We Need to Go. Cell 164, 1226-1232 (2016).

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Nakai, W. et al. A novel affinity-based method for the isolation of highly purified extracellular vesicles. Sci. Rep. 6, 33935 (2016).

MagCapture™ 外泌体提取试剂盒 PS


什么是外泌体  MagCapture™ Exosome Isolation Kit PS采用磷脂酰丝氨酸(PS)亲和Tim4蛋白的PS亲和法,可方便获得高纯度的外泌体和其他来自细胞培养基和体液的EVs。提取的完整外泌体和其他EVs可用于不同实验:电镜分析,纳米粒子追踪分析,EVs的操作和分析等。

【特点】

● 可提取高纯度的完整外泌体

● 可从血清、血浆、尿液等样品中提取外泌体

● 重复性高,回收量稳定

● 操作简单,可处理多个样品(无需超速离心)

 

质谱级赖氨酰肽链内切酶 Lysyl Endopeptidase®

特色

  • 产品特性
  • 相关资料
  • Q&A
  • 参考文献

质谱级赖氨酰肽链内切酶质谱级赖氨酰肽链内切酶                              Lysyl Endopeptidase®

Lysyl Endopeptidase®


质谱级赖氨酰肽链内切酶                              Lysyl Endopeptidase®


  本产品是质谱分析前处理时常用的蛋白分解酶即赖氨酰肽链内切酶,该酶可以特异性切除赖氨酸基团C末端的多肽,可用于蛋白测序分析和 Lys-X 化合物的酶合成。若同时使用赖氨酰肽链内切酶和胰酶,可更好地切断赖氨酸基团的多肽,增加多肽的数量。产品已按照使用习惯做成小包装,是方便使用的冷冻干燥品。20 μg/支可用于100-200个样品的凝胶内消化。

来源:细菌

外观:冻干粉(包含2 mmol/L Tris-HCl 缓冲液,pH8)

活性:0.03~0.07 AU/vial

分子量:27,000(琼脂糖过滤),30,000(SDS-PAGE)

溶解性:溶于水或缓冲液

稳定性:溶解于 pH 值 5.0-12.0 的 Tris 缓冲液中,可在4℃稳定保存2年;在 pH 值 6.0-11.0、30℃时能稳定保存,但温度超过50℃时不稳定。

最适pH值:9.0~9.5

等电点:6.9~7.0 

底物特异性:

可水解底物——Tos-Lys-OMe、Bz-Lys-NH2、Bz-Lys-pNA、Lys-pNA

不可水解底物——Bz-Arg-NH2、Bz-Arg-pNA、Arg-pNA

抑制剂:DFP、PMSF、TLCK

特点

●  高特异性、高蛋白质消化率、适用于蛋白质谱分析

  提高裂解效率、增加肽段数量

  根据使用量特意制备小包装,方便使用

应用

  分别采用胰蛋白酶(Tp、赖氨酰肽链内切酶(Lys-C)和 Tp与Lys-C 联用进行胶内酶切的效果比较。

  牛血清蛋白 BSA 的条带(100 ng)通过 SDS-PAGE 获得,然后分别用 Tp、Lys-C 和 Lys-C+Tp 进行酶切,再用 MALDI-TOFMS 法进行分析。

  这些蛋白酶的实验效果见下表。

表 1:Tp、Lys-C 和 Lys-C+Tp 的结果对照

这些结果表明 Lys-C 酶解的错误裂解率最低。Tp 酶解时加入 Lys-C 后,错误裂解率有所降低,同时,可以鉴定出更多的多肽。

Tp 

Lys-C

Lys-C+Tp

裂解位点

精氨酸和赖氨酸的C端 

赖氨酸的C端 

精氨酸和赖氨酸的C端

错误裂解率

(错误裂解所占比例  )

多(8%)

很少(0%)

少(3%)

鉴定出的多肽数量 

17

19

22

质谱级赖氨酰肽链内切酶                              Lysyl Endopeptidase®


胰蛋白酶(Tp)(图 a)和赖氨酰肽链内切酶(Lys-C)+Tp( 图 b)酶切后的质谱结果对照图。

Lys-C+Tp 酶切后,可以在 m/z=2000 时得到吸收峰,而单独的 Tp 酶切在 m/z=2000 时没有吸收峰。该结果表明 Lys-C 可以提高测序覆盖度。

 

( 数据由大阪医疗中心和妇婴健康研究所Y. Wada 博士提供 )

赖氨酰肽链内切酶

  赖氨酰肽链内切酶,最初由 Masaki 等人从土壤细菌中分离得到。该酶可以特异性剪切赖氨酸残基C末端和S-氨乙基半胱氨酸残基的肽键,用于蛋白测序和 Lys-X 化合物的酶催化合成。该酶稳定性高,在4M尿素或 0.1% SDS 溶液中 30℃ 孵育6小时之后,仍然拥有完整的生物活性。

外观

  冻干粉(包含ca. 10% Tris-HCl buffer,pH 8)

活性

  见包装

分子量

  27,000(凝胶过滤);30,000 (SDS-PAGE)

溶解性

  易溶于水或缓冲液

最佳pH

  9.0-9.5(酰胺酶的最佳活性 pH)

等电点

  6.9-7.0

抑制剂

  DFP、PMSF、TLCK

来源

  细菌

稳定性

 溶于pH 值 5.0-12.0 的缓冲液中,可于4℃稳定保存。溶于pH 值 6.0-11.0 的缓冲液中,可于30℃稳

 定保存,但是50℃及以上不稳定。

单位定义

 一单位酰胺酶(AU)指在30℃ pH 9.5 时每分钟产生1 μmol 对硝基苯胺所需的酶量。

底物特异性

 水解底物:Tos-Lys-Ome、Bz-Lys-NH2、Bz-Lys-pNA、Lys-pNA

 非水解底物:Bz-Arg-NH2、Bz-Arg-pNa、Arg-pNA

实验方法

1试剂:

A.0.2 mol/L AMP 缓冲液,pH值 9.5

      溶解 4.2 g 的2-氨基-2-甲基-1,3-丙二醇于 150 mL 的水中,加入1 mol/L HCl 调 pH 值至 9.5,再加水使体积至 200 mL。

B.2.5 mmol/L 底物溶液

      溶解 22.6 mg 的N-苯甲酰基-DL-精氨酰-4-硝基苯胺盐酸盐于 20 mL 水中。

C.   2 mmol/L Tris-HCl 缓冲液,pH8

      溶解 0.24 mg的2-氨基-2-羟甲基-1,3-丙二醇于 900 mL 水中,加入 0.1 mol/L HCl 调pH值至8,再加水使体积至1 L。

D.   酶溶液

      溶解1vial 的赖氨酰肽链内切酶于1mL 的溶剂C中,可直接加入。

E. 终止溶液

      将 55 mL 水和 45 mL 乙酸混合均匀。


 

2. 步骤


试剂

检测样品

空白对照

A

2.6 mL

2.6 mL

B

0.3 mL

0.3 mL

30℃ 预培养5分钟

D

0.1 mL

C

0.1 mL

立即混合均匀,30℃ 预培养25分钟

E

1.0 mL

1.0 mL

 

3. 单位的定义

酰胺酶单位是指 30℃、pH 9.5 时,每分钟产生1μmol 对硝基苯胺的酶量。

 

AU/vial = [(a-b) / 25] × (1/9.62) × (4.0/0.1)

a.    检测样品中的吸光度

b.    空白对照中的吸光度

 

胶内酶切的实验操作流程

  用聚硅酮处理的微量离心管和吸管端防止捕获任何蛋白。使用质谱分析用凝胶染色试剂盒,例如银染剂 MS 试剂盒(产品编号:299-58901)和负凝胶染色 MS 试剂盒(产品编号:293-57701

1.    电泳分离蛋白质样品;

2.    从凝胶中切割蛋白质片断并放入微量离心管;

3.    使凝胶脱色(可使用质谱分析用凝胶染色试剂盒中的脱色溶液);

4.    加入300 μL 乙腈到试管里,搅拌器振荡 30 分钟;

5.    去除乙腈,用 Parafilm 膜覆盖微量离心管。

6.    在 Parafilm 膜上打出针孔,真空干燥 15 分钟;

7.    100 μL 10 mmol/L DTT 溶解于 100 mmol/L 碳酸氢铵56℃恒温小时。

8.    室温冷却后,用等量的 50 mM 碘乙酰胺溶解于 100 mmol/L 碳酸氢铵暗处恒温 45 分钟并涡旋;

9.    用 100 μL 100 mmol/L 碳酸氢铵洗涤凝胶片段 10 分钟;

10.  用 300 μL 乙腈干燥凝胶片段 15 分钟;

11.  用 100 μL 100 mmol/L 碳酸氢铵溶胀凝胶片段 15 分钟;

12.  用 300 μL 乙腈再次干燥凝胶片段 15 分钟;

13.  去除液相,真空干燥凝胶片段 15 分钟;

14.  用 100 μL 赖氨酸内切酶溶液*在冰水浴中溶胀凝胶片段 45 分钟;

  *赖氨酸内切酶稀释于 50 mmol/L Tris-HCl  pH 8.5

15.  去除 100 μL 赖氨酸内切酶溶液,将凝胶片段放在 37、10 μL 50 mmol/L Tris-HCl pH 8.5 中过夜;

16.  加入 50 μL 20mmol/L 碳酸氢铵 20 分钟内振荡凝胶片段次抽提多肽;

17.  加入 5% 甲酸/50% 乙腈 20 分钟内振荡凝胶片段次抽提多肽;

18.  如果需要用 Speed Vac. 浓缩多肽;

19.  用 ZipTip 脱盐和纯化多肽;

20.  如果需要用弱真空浓缩多肽至μL

21.  加入基质进行质谱分析。

 

注意:根据细菌的生理和形态特征分类,产品来源为水解无色杆菌,但是最近细菌分类学将这种细菌鉴定为产酶溶杆菌。

保存:暗处-20℃保存

 

规格:20 μg×5 vial



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产品编号 产品名称 包装 应用
202-15951

Trypsin, from Porcine Pancreas

Mass Spectrometry Grade

猪胰腺胰蛋白酶质谱级别

5×20 μg 蛋白质组学
056-05921 Endoproteinase Asp-N, Sequencing grade
胞内蛋白酶 Asp-N(测序级别)
2 μg 用于测序
050-05941 Endoproteinase Glu-C, Sequencing grade
胞内蛋白酶 Glu-C(测序级别)
50 μg
164-13982 V8 Protease [Endoproteinase Glu-C]
V8蛋白酶
2 mg 生物化学

质谱级赖氨酰肽链内切酶                              Lysyl Endopeptidase®

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质谱级赖氨酰肽链内切酶                              Lysyl Endopeptidase®

赖氨酰肽链内切酶,MS级

产品编号:125-05061

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[13]   Rajagopal C et al. “Secretion Stimulates Intramembrane Proteolysis of a Secretory Granule Membrane Enzyme.” Journal of Biological Chemistry 285, no. 45 (November 5, 2010): 34632–34642.


[14]    Sato H et al.“Novel Isonitrile Hydratase Involved in Isonitrile Metabolism.”Journal of Biological Chemistry 285, no. 45 (November 5, 2010): 34793–34802.


[15]    Manno S et al. “ATP-dependent Mechanism Protects Spectrin Against Glycation in Human Erythrocytes.” Journal of Biological Chemistry 285, no. 44 (October 29, 2010): 33923–33929.


[16]    Matsumoto T et al. “Proteomic Analysis Identifies Insulin-like Growth Factor-binding Protein-related Protein-1 as a Podocyte Product.” Renal Physiology 299, no. 4 (October 1, 2010): F776–784.


[17]    Sury M et al. “The SILAC Fly Allows for Accurate Protein Quantification in Vivo.” Molecular and Cellular Proteomics 9, no. 10 (October 1, 2010): 2173–2183.

产品编号 产品名称 产品规格 产品等级
125-05061 Lysyl Endopeptidase®, MS Grade 
赖氨酰肽链内切酶,MS级
20 μg×5 质谱级

Cytiva思拓凡HiTrap 5 x 5 ml Capto Phenyl ImpRes

HiTrap 5 x 5 ml Capto Phenyl ImpRes

HiTrap 5 x 5 ml Capto Phenyl ImpRes

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17548412
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HiTrap 5 x 5 ml Capto Phenyl ImpRes
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HiTrap Capto Phenyl ImpRes预装BioProcess Capto Phenyl ImpRes填料,适用疏水作用层析筛选和进行小规模蛋白质纯化。

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Cytiva思拓凡HiTrap Capto HIC 选择试剂盒

HiTrap Capto HIC 选择试剂盒

HiTrap Capto HIC Selection Kit

货号:
29321087
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HiTrap Capto HIC 选择试剂盒
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Capto HIC填料的基架为高交联,高流速琼脂糖,配基与传统的HIC填料相同,主要包括苯基(Phenyl),丁基(Butyl)和辛基(Octyl)。根据填料粒径的不同,可分为Capto(平均粒径75um)和Capto ImpRes(平均粒径40um)两个系列。

HiTrap Capto HIC 选择试剂盒

Capto HIC填料的特点:

增强的物理机械性能

HiTrap Capto HIC 选择试剂盒

图(1)Capto基架填料优越的物理机械性能。(A)可以使用更高的柱高和层析流速(B)更宽的工艺参数操作窗口,灰色的线为保留时间,单位分钟。

优越的化学耐受性

通过测定总有机碳(TOC)的泄露,显示Capto HIC填料可以在pH范围1-14,温度40℃条件下,耐受一个星期(图2),同时填料的疏水性能和配基密度都没有明显的变化。优越的化学耐受性可以保证层析填料使用后的彻底清洗,增加了层析填料的使用寿命。

HiTrap Capto HIC 选择试剂盒HiTrap Capto HIC 选择试剂盒

图(2)

相同的选择性和分辨率

Capto HIC与HIC Sepharose Fast Flow具有近乎相同的选择性和分辨率,而Capto HIC ImpRes与HIC Sepharose High Performance在选择性和分辨率上也几近相当(图3)。

HiTrap Capto HIC 选择试剂盒

图(3)Capto Phenyl ImpRes与Phenyl Sepharose high performanc(A),Capto Butyl ImpRes与Butyl Sepharose high performance(B)选择性与分辨率的对比。(1)核糖核酸酶A;(2)溶菌酶;(3)α-胰凝乳蛋白酶原

相当的动态结合载量

通过测定BSA在穿出10%条件下的动态结合载量(Qb,10),对比Capto HIC ImpRes和HIC Sepharose high performance,两者具有相当的动态结合载量(表1)。

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第一回 BDNF概论


第一回 BDNF概论

阐明BDNF-从基础到临床-


第一回 BDNF概论




新潟大学 脑研究所肿瘤病态学 武井延之


“阐明BDNF-从基础到临床-”系列连载开始之际

金沢工业大学 生物・化学部 应用生物学科 小岛正己   


1950年代,Rita Levi-Montalcini博士和Stanley Cohen博士及其研究人员开始了神经营养因子研究。继他们发现NGF(nerve growth factor)

后,Yves-Alain Barde 发现了BDNF(brain-derived neurotrophic factor)。BDNF和NGF具有高度同源性,并且还有相同的生物活性。由于

BDNF在中枢神经系统中高表达,所以关于它与记忆学习以及大脑疾病间关系的研究盛行。因此,为了更好地阐明BDNF,除了BDNF的检测技术

外,BDNF信号的分析技术也非常重要。

本系列连载会先介绍BDNF和神经营养因子的研究。关于BDNF与大脑和发育以及精神疾病间的关系,将由日本新进研究人员们对其现状和展望进行

分地阐述,敬请期待。


 

◆前言


对BDNF研究已从最初的研究“经典”,维持神经细胞的生存和分化诱导发展为神经传递和控制突触可塑性等新机制的研究。与此同时,由于其与疾病的关系,研究人员开始将BDNF用于治疗伴随细胞死亡的神经退行性疾病,并逐渐关注治疗神经功能障碍(神经回路形成异常)的精神疾病和发育障碍的研究。图1所示为BDNF研究随时代的发展与变化,本文将主要阐述BDNF的概论。

第一回 BDNF概论

图1:BDNF(神经营养因子)研究的历史和发展趋势

◆BDNF和受体关系


BDNF(Brain-Derived Neurotrophic Factor : 脑源性神经营养因子)是大脑中最重要的神经营养因子。神经营养因子(neurotrophic factor)是具有维持神经细胞生存、分化诱导(突触延伸和神经递质合成酶表达诱导等)、促进成熟和调节功能等作用的蛋白分子的总称,NGF(Nerve Growth Factor : 神经生长因子)的发现和鉴定的研究从Levi-Montalcini开始,但由于NGF只能在特定的神经细胞中发挥作用,所以研究人员认为应该还存在与其作用相同的分子。

1982年,Barde和Thoenen从猪脑中纯化了BDNF1。随后,1983年和1989年分别对NGF和BDNF克隆2)后发现,这两个分子的同源性超过50%。利用该同源域,克隆了第三个因子NT-3,之后,NT-4被鉴定为第四个因子。NT为neurotrophic的缩写,统称为neurotrophin family。

BDNF由preproBDNF加工成matureBDNF( 即BDNF)。BDNF由112个氨基酸残基组成,分子量为13.5 kDa,等电点为9.99,与NGF相同,具有3个S-S键。从NGF的晶体结构分析,推断BDNF具有三个扁平的β片层,并通过它们形成具有生理功能的同源二聚体。研究认为,家族之间的非保守域决定了与受体的特异性结合3)

从NGF结合实验的结果来看,受体有低亲和性和高亲和性2种,低亲和性受体鉴定为p75(p75NTR)。该分子与所有的neurotrophin低亲和性(Kd=10-9)结合。它属于TNF受体家族,参与细胞凋亡,并作为与neurotrophin前体作用的受体备受关注。1991年,高亲和性(Kd=10-11)受体鉴定为Trk(Tropomyosin Receptor Kinase,原肌球蛋白受体激酶),最初被鉴定为在癌症中发现的trk原癌基因的基因产物,但其配体未知。

Trk有A、B、C三种,TrkA(基因名 NTRK1)是NGF的特异性受体,TrkB(NTRK2)是BDNF和NT-4的特异性受体,TrkC(NTRK3)是NT-3的特异性受体。

TrkA、TrkB、TrkC均由约800个氨基酸组成,经过糖基化成为分子量140-145 kDa的功能性分子。它是一种在细胞内具有激酶结构域的受体酪氨酸激酶。当二聚体配体结合时,Trk自身也会二聚体化,并相互磷酸化细胞的酪氨酸残基。该磷酸化酪氨酸与各种分子相结合,并通过传递细胞内信号来发挥以BDNF为首的neurotrophin生理活性4)。细胞内的主要信号系统与受体型酪氨酸激酶相通,具有1)控制细胞凋亡和翻译的PI3K-Akt系统;2)主要通过转录调节发挥分化诱导作用的Ras-MAPK系统;3)驱动细胞内钙信号的PLCγ-Ca2+系统5)

 


◆BDNF的生理作用


BNDF研究初期主要围绕在外周神经系统中的作用,NGF是交感神经背根神经节的一部分。研究发现BDNF作用于结节神经节和部分背根神经节的感觉神经中彼此不重叠的神经细胞。针对外周神经系统的neurotrophin作用是绝对的,对于维持生存和突起延伸也是必不可少的,所以,外周神经衰竭会导致各敲除小鼠死亡。因此,神经细胞的维持生存和突起延伸作用被称为神经营养因子的“经典作用”。

随后,研究的中心转移至中枢神经系统,研究表明,NGF作用于基底神经节的乙酰胆碱活性神经细胞,BDNF作用于黑质多巴胺能神经细胞和脊髓运动神经细胞。这些作用都是经典作用,据报告还有诱导各神经递质的合成酶的表达,增加递质数量和维持生存等作用。NGF和TrkA的表达仅限于大脑内的部分细胞,但是BDNF,尤其是TrkB的表达在大脑中的大范围(几乎所有)的神经细胞中都有发现。因此,BDNF对中枢神经细胞的作用得到了更广泛的研究,此外,研究表明除了经典作用的维持生存和分化诱导以外,它还参与依赖于神经活动的神经可塑性。

神经可塑性是指通过释放递质和控制受体功能来改变传递效率以及突触重塑等,导致特定的神经回路发生强化或消除的可逆性变化。无需形态的变化,通过调节转录、翻译和分解来改变作用于突触中的分子数量(特定的分子数和分子类型)、翻译后的修饰(磷酸化等)以及位置的变化(易位)等。对于中枢神经细胞,BDNF可以诱发和增强神经递质的释放,以及增强受体的功能。此外,研究人员认为它还可以长期作用于形成和稳定神经回路。结果表明,它还参与了记忆学习等6,7)

 


◆BDNF的表达和释放


BDNF的表达与神经活动密切相关。使用谷氨酸刺激原代培养神经细胞会诱导 BDNF mRNA 的表达,而GABA 刺激会降低表达 8)。BDNF在生理条件下会在神经细胞中表达,通过兴奋性神经传递升高,抑制性神经传递降低。BDNF的表达可以诱导被认为是记忆细胞基础的长时程增强(LTP)。在个体水平中,也能在视觉皮层中观察到依赖于感觉(视觉)输入的BDNF mRNA 表达水平的变化。此外,学习训练过程引起大鼠和猴子大脑中BDNF表达上升,阐明了通过激活神经回路诱导的活动依赖性表达7)

不仅仅是表达调节,BDNF的释放也依赖于神经活动。在经典作用中,不仅BDNF,神经营养因子也是组成型分泌的。这是因为在维持生存中始终保持定量供给才是合理的。但是,为了引起参与神经传递的快速反应,需要调节性释放。实际上,BDNF是通过响应去极化刺激进行释放的。通过外周神经系统的NGF作用形态分析,研究人员认为BDNF的作用方式,是通过轴突投射到的靶细胞产生和分泌的,然后神经细胞向轴突方向延伸。但是,BDNF包含在突触前方的囊泡中,与递质相同会响应刺激进行释放。像这样的表达和释放机制可以支持其参与神经可塑性,由此表明,神经活动和BDNF是相互作用的。

 


◆BDNF和疾病


研究人员尝试使用神经营养因子的维持生存作用对神经退行性疾病进行治疗。虽然该作用在培养细胞和动物实验中非常有效,但是在治疗中还没有成功10)。首先是关于分子量的问题,由于BDNF是蛋白,所以无法通过血脑屏障。虽然也有小分子激动剂的开发,但其作用还有待证实。另一方面,由于BDNF直接参与神经功能,所以如本文所述,它在功能性脑疾病的精神疾病和发育障碍中的作用备受关注。虽然由于上述的理由无法直接用于治疗,但还是有望作为生物标记物发挥作用,并开发出模拟BDNF作用的试剂。

BDNF 还具有中枢拒食作用 11),并且出于某种原因,它在血小板中含量丰富,还能调节性释放。因此,有报告称它还参与肥胖、糖尿病(生活方式疾病)和心血管疾病等,阐明BDNF的非中枢性作用相关的研究还在进一步扩大12)

◆参考文献

 1. 

B arde, Y. A. et al. : EMBO. J., 1, 549 (1982).

 2. 

L eibrock, J. et al. : Nature14, 341149 (1989).

 3.

Lewin, G. R. and Barde, Y. A. : Annu. Rev. Neurosci., 19, 289 (1996).

 4.

武井延之:脳科学辞典(2020).https://bsd.neuroinf.jp/wiki/高親和性ニューロトロフィン受容体,DOI:10.14931/bsd.9306(2021年6月21日閲覧)

 5.

Huang, E. J. and Reichardt, L. F. : Annu. Rev. Biochem., 72, 609 (2003).

 6.

Thoenen, H. : Prog. Brain. Res., 128, 183 (2000).

 7.

武井延之、那波宏之:生化学,76,111(2004).

 8.

Lindholm, D. et al. : J. Neurobiol., 25, 1362 (1994).

 9.

Nawa, H. and Takei, N. : Trends Neurosci., 24 (12), 683 (2001).

10.

Thoenen, H. and Sendtner, M. : Nat. Neurosci., 1046 (2002).

11. 

Takei, N. et al. : Front Psychol., 5, 1093 (2014).

12. 

Marosi, K. and Mattson, M. P. : Trends. Endocrinol. Metab., 25, 89 (2014).

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96孔白色PCR板(罗氏480)V4801-M


96孔白色PCR板(罗氏480)

  • 产品型号:V4801-M
  • 产品时间:2019-12-19
  • 简要描述:96孔白色PCR板(罗氏480)金畔生物公司供应:分光光度计,检测仪荧光定量PCR耗材,移液器吸嘴,微量离心管,进口冻存管,细胞培养皿,培养板,培养瓶,吸头,仪器及手套,色谱耗材,针头过滤器。
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96孔白色PCR板(罗氏480)PCR耗材上海金畔生物供应:光度计,检测仪,免疫仪,移液器,钻石吸嘴,离心管,冻存管,培养皿全系荧光定量PCR耗材。

进口PCR   PCR板

货号:V4801-M

品名:Roche 480PCR 96孔板

颜色:乳白色

规格:10块/盒, 20 盒/箱

96孔白色PCR板(罗氏480)

PCR板:
英文名:PCR plate
在聚合酶链式反应(Polymerase Chain Reaction ,PCR)中,主要作为参与扩增反应的引物、Taq DNA聚合酶、dNTP、模板核酸、Mg、缓冲液等的承载物。
PCR板材质:
其本身材质在当今主要以聚丙烯(PP)为主,能更好适应PCR反应过程中反复高低温设定,并且能够实现高温高压灭菌操作。为配合排枪、PCR仪等实现高通量操作,较常使用的为96孔或384孔的PCR板。板型符合SBS标准,且为适应不同厂家的PCR仪,根据裙边设计又可分为无裙边、半裙边、升裙边和全裙边四种设计模式。

96孔荧光定量白色PCR板–Roche罗氏

96孔白色PCR板(罗氏480)V4801-M

产品介绍:
>超清洁生产环境下用优质生物聚丙烯生产
>管壁薄,壁厚均匀,传热效率快,样品加热均匀
>与Roche Lightcycler®480的传热槽配合良好,以更好地促进传热。
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适用仪器:
适用于罗氏Lightcycler®480荧光定量PCR仪

Roche PCR96孔板  进口PCR板 PCR板用途:

广泛应用于遗传、生化、免疫、医药等领域,不仅应用于基因分离、克隆和核酸序列分析等基础研究,还可用于疾病的诊断或任何有DNA,RNA的地方,属于实验室一次性易耗品。

ELISA处理96孔微孔板 96孔ELISA处理微孔板

522-3801396孔ELISA平底无盖组织培养板,透明,独立灭菌包装50块/箱

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23-9613P 96孔板酶标板,8联排可拆卸,平底,高结合力,独立包装,灭菌250个/箱

23-9617P 96孔板酶标板,12联排可拆卸,平底,高结合力,独立包装,灭菌250个/箱

CG-0716H2ml螺纹棕色带书写处样品瓶 特级料(出口包装)11.6*32mm,100/PK

CG-07452ml螺纹塑料连体内插管, 300ul pp 进样瓶11.6*32mm,100/PK

9MM广口螺纹口样品瓶盖和隔垫(预组装)

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CG-0720预组装螺纹开口蓝盖;红色PTFE/白色硅胶垫φ9mm,100/PK

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产品优势:金畔生物代理实验室耗材,PCR耗材品种全,可替代仪器原厂耗材,性价比高,质量稳定,对用户可以节省实验成本。

温馨提示:不可用于临床治疗。

Cytiva思拓凡HiScreen Butyl-S FF

HiScreen Butyl-S FF

HiScreen Butyl-S FF

货号:
28926985
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HiScreen Butyl-S FF
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1739.00
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HiScreen Butyl S-FF层析柱预装有丁基Butyl Sepharose 6 Fast Flow疏水作用层析(HIC)填料。该层析柱是方法优化和参数筛选的最佳选择。

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Cytiva思拓凡HiTrap 5×5 ml Capto Butyl

HiTrap 5x5 ml Capto Butyl

HiTrap 5×5 ml Capto Butyl

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HiTrap 5×5 ml Capto Butyl
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Capto Phenyl(High sub)和Capto Butyl是疏水作用层析(HIC)填料,用于蛋白质纯化的捕获和中间阶段。

Cytiva思拓凡HiScreen Octyl FF

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HiScreen Octyl FF
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HiScreen Octyl FF层析柱预装有Octyl Sepharose 4 Fast Flow疏水作用层析(HIC)填料。该层析柱是方法优化和参数筛选的最佳选择。

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ABI Q5 0.2ml荧光PCR八联盖配管V2081-C


ABI Q5 0.2ml荧光PCR八联盖配管

  • 产品型号:V2081-C
  • 产品时间:2021-12-29
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ABI Q5 0.2ml荧光PCR八联盖配管上海金畔提供适配所有品牌荧光定量PCR仪、普通/梯度PCR仪用单管、八连管、96孔板、384孔板等,品质好价格优,大量现货。

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PCR八联管光学平盖
pp材质,光学设计,适用于Real-Time(实时荧光定量)PCR反应
V2008-C/V2108-C适配于V2081-C和V2081-M
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V2081-C V2008-C(透明盖)

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