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BL21 Chemically Competent Cell 大肠杆菌化学感受态细胞

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BL21 Chemically Competent Cell 大肠杆菌化学感受态细胞

货号： MF2481-5000UL 品牌： Jinpan 标签： 分子生物学

描述

BL21 Chemically Competent Cell 大肠杆菌化学感受态细胞

产品标签：

BL21；pGEX；pMAL；BL21 (DE3)；Rosetta (DE3)；羧苄青霉素钠；卡那霉素；链霉素；

 

产品订购：更大包装或产品技术问题，请来电/在线咨询，电话：021-50837765 。

货号 产品名称 规格           价格（元）  
MF2481-1000UL   BL21 Chemically Competent Cell大肠杆菌化学感受态细胞   10×100μl 396
MF2481-5000UL BL21 Chemically Competent Cell大肠杆菌化学感受态细胞 50×100μl 1696

【好消息】：见我司的感受态细胞促销活动。买感受态细胞得京东卡，发表使用评论，赢红包，双重惊喜，行动起来啦。

 

产品组分：

组分编号

组分名称

货号（规格）

MF2481-1000UL   

MF2481-5000UL   
MF2481-A    BL21 Competent Cell 10×100μl 50×100μl
MF2481-B Control Plasmid puC19, 10pg/μl    10μl 10μl

 

菌株描述

BL21菌株是最先开发的原核表达用的大肠杆菌菌株，适用于转化和非T7载体的常规蛋白表达，主要用于非毒性蛋白的表达。该菌株不含T7 RNA聚合酶基因，因此，不可用于T7启动子驱动的蛋白表达（如pET系列表达载体）；但含大肠杆菌RNA聚合酶基因，可以用于tac或trc等利用大肠杆菌RNA聚合酶的原核标系统的表达（如pGEX，pMAL表达载体）。该菌株缺乏lon蛋白酶和外膜蛋白酶ompT的基因，这两种酶的缺失降低了外源重组蛋白在菌体内的降解，从而增加了蛋白表达量。对噬菌体T1（fhuA2）具有抗性。

BL21菌株基因型：E. coli B F-dcm ompT hsdS(rB-mB-) gal [malB+]K-12(λS)

 

产品描述

本品是大肠杆菌BL21菌株经特殊工艺制作所得的感受态细胞，可用于DNA的热激转化。经pUC19质粒检测转化效率可达107 cfu/μg DNA。且在-80℃能稳定保存几个月转化效率不发生改变。

 

保存与运输条件

保存：-80℃保存，六个月有效。

运输：干冰运输。

 

注意事项

1）   感受态细胞必须用干冰运输。感受态细胞应在-80℃保存，不可反复冻融且放置时间过长，否则会减低感受态细胞的转化效率。

2）   最好在冰上融化感受态细胞。

3）   进行转化操作时，需在相应温度及无菌条件下进行。

4）   为防止转化实验不成功，可保留部分连接反应液以重新转化，将损失降到最低。

5）   产品包装内含质粒pUC19 DNA(10pg/μl)，供对照实验用。

6）   为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。

使用方法【所有操作均在无菌条件的标准下进行】

1）   取感受态细胞置于冰浴中，如需分装可将刚刚融化细胞悬液分装到无菌预冷的离心管内，置于冰浴中。【注意：一次转化感受态细胞的建议用量为50-100 μl，可以根据实际情况分装使用。需注意所用DNA体积不要超过感受态细胞悬液体积的十分之一。】

以下实验以50 μl感受态细胞为例。

2）   向感受态细胞悬液中加入目的DNA（根据实际情况加入适量的DNA，通常100 μl感受态细胞能够被1 ng超螺旋质粒DNA所饱和），用手轻弹管底轻轻混匀（避免用枪吹打），冰浴静置25min。

3）   42℃热击45s，迅速将离心管转移到冰浴中，冰上静置2-3min。此过程不要摇动离心管。

4）   向每个离心管中加入450 μl无菌的2YT或LB培养基（不含抗生素），混匀后置于37℃ 摇床，200 rpm振荡培养60min，目的使质粒上相关的抗性标记基因表达，使菌体复苏。

5）   5000rpm离心1min收菌，留取100μl上清轻轻吹打重悬菌体，加到含相应抗生素的2YT或LB固体琼脂培养基上，用无菌的涂布棒将细胞均匀涂开，将平板置于室温（或37℃）直至液体被吸收，倒置培养，37℃培养过夜。

【注意】：

a）涂布用量可根据具体实验调整。若预计的克隆较多，可直接吸取转化产物涂布平板；若预计的克隆较少，则同上离心（5,000 rpm，1min）后留取适量培养液，悬浮菌体后将其涂布于一个平板中。

b）新制备的固体培养基不易涂干，可将平板正置于37℃直至液体被吸收后再倒置培养。c）涂布剩余的菌液可置于4℃保存，如果次日的转化菌落数过少，可以将剩下的菌液再涂布新培养基进行培养。

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JP0021-10G Chloramphenicol, USP Grade氯霉素 10g
JP0018-10G Ampicillin, Sodium Salt氨苄青霉素钠 10g
JP0017-5G Carbenicillin, Disodium Salt羧苄青霉素二钠盐 5g
JP0019-10G Kanamycin Sulfate硫酸卡那霉素 10g
JP0014-1G Rifampicin, USP Grade利福平 1g
MF2002-5G IPTG异丙基-β-D-硫代半乳糖苷 5g
MF2002-10G IPTG异丙基-β-D-硫代半乳糖苷 10g
MF2002-100G IPTG异丙基-β-D-硫代半乳糖苷 100g

 

 

 

规格信息

品牌：

Jinpan
CAS:

N/A
规格：

50×100μl
货期：

咨询客服

BL21 Chemically Competent Cell 大肠杆菌化学感受态细胞

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货号： MF2481-1000UL 品牌： Jinpan 标签： 分子生物学

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BL21 Chemically Competent Cell 大肠杆菌化学感受态细胞

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BL21；pGEX；pMAL；BL21 (DE3)；Rosetta (DE3)；羧苄青霉素钠；卡那霉素；链霉素；

 

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货号 产品名称 规格           价格（元）  
MF2481-1000UL   BL21 Chemically Competent Cell大肠杆菌化学感受态细胞   10×100μl 396
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MF2481-1000UL   

MF2481-5000UL   
MF2481-A    BL21 Competent Cell 10×100μl 50×100μl
MF2481-B Control Plasmid puC19, 10pg/μl    10μl 10μl

 

菌株描述

BL21菌株是最先开发的原核表达用的大肠杆菌菌株，适用于转化和非T7载体的常规蛋白表达，主要用于非毒性蛋白的表达。该菌株不含T7 RNA聚合酶基因，因此，不可用于T7启动子驱动的蛋白表达（如pET系列表达载体）；但含大肠杆菌RNA聚合酶基因，可以用于tac或trc等利用大肠杆菌RNA聚合酶的原核标系统的表达（如pGEX，pMAL表达载体）。该菌株缺乏lon蛋白酶和外膜蛋白酶ompT的基因，这两种酶的缺失降低了外源重组蛋白在菌体内的降解，从而增加了蛋白表达量。对噬菌体T1（fhuA2）具有抗性。

BL21菌株基因型：E. coli B F-dcm ompT hsdS(rB-mB-) gal [malB+]K-12(λS)

 

产品描述

本品是大肠杆菌BL21菌株经特殊工艺制作所得的感受态细胞，可用于DNA的热激转化。经pUC19质粒检测转化效率可达107 cfu/μg DNA。且在-80℃能稳定保存几个月转化效率不发生改变。

 

保存与运输条件

保存：-80℃保存，六个月有效。

运输：干冰运输。

 

注意事项

1）   感受态细胞必须用干冰运输。感受态细胞应在-80℃保存，不可反复冻融且放置时间过长，否则会减低感受态细胞的转化效率。

2）   最好在冰上融化感受态细胞。

3）   进行转化操作时，需在相应温度及无菌条件下进行。

4）   为防止转化实验不成功，可保留部分连接反应液以重新转化，将损失降到最低。

5）   产品包装内含质粒pUC19 DNA(10pg/μl)，供对照实验用。

6）   为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。

使用方法【所有操作均在无菌条件的标准下进行】

1）   取感受态细胞置于冰浴中，如需分装可将刚刚融化细胞悬液分装到无菌预冷的离心管内，置于冰浴中。【注意：一次转化感受态细胞的建议用量为50-100 μl，可以根据实际情况分装使用。需注意所用DNA体积不要超过感受态细胞悬液体积的十分之一。】

以下实验以50 μl感受态细胞为例。

2）   向感受态细胞悬液中加入目的DNA（根据实际情况加入适量的DNA，通常100 μl感受态细胞能够被1 ng超螺旋质粒DNA所饱和），用手轻弹管底轻轻混匀（避免用枪吹打），冰浴静置25min。

3）   42℃热击45s，迅速将离心管转移到冰浴中，冰上静置2-3min。此过程不要摇动离心管。

4）   向每个离心管中加入450 μl无菌的2YT或LB培养基（不含抗生素），混匀后置于37℃ 摇床，200 rpm振荡培养60min，目的使质粒上相关的抗性标记基因表达，使菌体复苏。

5）   5000rpm离心1min收菌，留取100μl上清轻轻吹打重悬菌体，加到含相应抗生素的2YT或LB固体琼脂培养基上，用无菌的涂布棒将细胞均匀涂开，将平板置于室温（或37℃）直至液体被吸收，倒置培养，37℃培养过夜。

【注意】：

a）涂布用量可根据具体实验调整。若预计的克隆较多，可直接吸取转化产物涂布平板；若预计的克隆较少，则同上离心（5,000 rpm，1min）后留取适量培养液，悬浮菌体后将其涂布于一个平板中。

b）新制备的固体培养基不易涂干，可将平板正置于37℃直至液体被吸收后再倒置培养。c）涂布剩余的菌液可置于4℃保存，如果次日的转化菌落数过少，可以将剩下的菌液再涂布新培养基进行培养。

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MF2002-100G IPTG异丙基-β-D-硫代半乳糖苷 100g

 

 

 

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品牌：

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N/A
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10×100μl
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K599 Chemically Competent Cell 农杆菌化学感受态细胞

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K599 Chemically Competent Cell 农杆菌化学感受态细胞

货号： MF2455-5000UL 品牌： Jinpan 标签： 分子生物学

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K599 Chemically Competent Cell

农杆菌化学感受态细胞

产品关键词：

Agrobacterium rhizogenes发根农杆菌；Ri质粒；K599感受态细胞；C58C1；Ar Qual；GV3101根癌农杆菌；特美汀 Timentin；

 

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货号 产品名称 规格 价格（元）  
MF2455-1000UL    K599 Chemically Competent Cell农杆菌化学感受态细胞    10×100μ    l 430
MF2455-5000UL K599 Chemically Competent Cell农杆菌化学感受态细胞 50×100μl 1830

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货号（规格）
MF2455-1000UL     MF2455-5000UL  
MF2455-A         K599 Chemically Competent Cell 10×100μl 50×100μl
MF2455-B pCAMBIA2301 Control Vector (10ng/μl)     10μl 10μl

 

产品描述

发根农杆菌（Agrobacterium rhizogenes）是根瘤菌科农杆属的一种革兰氏阴性土壤细菌，能够侵染大多数双子叶植物和少数单子叶植物以及个别裸子植物。起关键作用的是其携带的Ri质粒，含有负责发根自主性生长和冠瘿碱合成的基因。结构上于Ti质粒类似，主要有致毒区（Vir），T-DNA区以及冠瘿碱合成功能区等。根据合成冠瘿碱的不同，Ri质粒分为4种类型：1）甘露碱型；2）黄瓜碱型；3）农杆碱型；4）米奇矛型。

发根农杆菌菌株K599（NCPPB2659）含有pRi2659农杆碱型Ri质粒，具有广泛的宿主范围（葫芦科，豆科，茄科等），同时具有链霉素抗性。

我司（金畔生物）提供的K599化学转化感受态细胞经特殊工艺制作，基因型为Agrobacterium rhizogenes (strR) pRi2659 (agropine type)，经pCAMBIA2301质粒（卡那霉素抗性）检测转化效率>103cfu/μg DNA。

 

保存与运输条件：

保存：-80℃保存，一年有效。

运输：干冰运输。

 

注意事项

1）   感受态细胞应保存在-80℃，不可反复冻融和放置时间过长，以免降低感受态细胞的转化效率。

2）   整个转化操作，严格根据相应温度及无菌条件要求进行。

3）   加入质粒的体积不应大于感受态体积的1/10。质粒不纯或存在乙醇等有机物污染，会导致转化效率急剧下降。质粒增大一倍，转化效率下降一个数量级。

4）   混匀质粒时应用手指快速拨打管底或用枪吹吸混匀，务必使质粒快速、均匀分散开，与感受态细胞充分接触。

5）   转化高浓度的质粒可相应减少最终涂板用量。

6）   平板上克隆密度过大时，由于营养不足，克隆生长变慢，菌落变小。为获得大菌落，应减少质粒用量或降低涂板的菌量。

7）   K599具有链霉素抗性，不可用于具链霉素抗性质粒的转化。

8）   为了保证最佳的转化效率，发根农杆菌的培养务必使用TY培养基（配方见附表1）。

9）   为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。

使用方法

1)        取-80℃保存的感受态细胞于室温或手心片刻待其部分融化，达到冰水混合状态时插入冰浴中使其完全融化。

2)        往100μl感受态细胞悬液中加入0.01~1μg质粒DNA（转化效率较高，第一次使用前最好做预实验确定所加质粒的量），用手快速、剧烈拨打管底混匀或用枪吹吸混匀，依次放于冰中间静置5min，液氮5min，37℃水浴5min，冰浴5min。

3)        冰浴中拿出放室温，加入700μl无抗生素的TY液体培养基，于28℃振荡培养2h。

4)        6,000rpm离心1min，吸掉600ul上清，之后用枪轻轻吹打重悬菌体。之后加到含相应抗生素的TY平板上，用无菌玻棒轻轻的将细胞均匀涂开。室温正置10 min，待液体被吸收后，倒置平板，28℃培养2-3天。

附表1 固体和液体TY培养基配方

附表2 常见发根农杆菌对抗生素敏感性总表

农杆菌菌株  羧苄（carb） 链霉素（strep） 利福平（rif） 庆大霉素（gent） 卡那霉素（kan）
Ar A4 S S S S R
Ar Qual S R S R S
Ar 1193 R R R S S
K599 S R S S S
C58C1 S R R S S
JPU440 S R S S S
【备注】：S代表敏感，R代表抗性。

附表3 常见农杆菌抗生素配制方法

抗生素 配方 母液              工作液       
羧苄青霉素 去离子水溶解，0.22μm滤膜除菌 50mg/ml 50μg/ml
硫酸卡那霉素          去离子水溶解，0.22μm滤膜除菌 50mg/ml 50μg/ml
链霉素 去离子水溶解，0.22μm滤膜除菌 10mg/ml 50μg/ml
庆大霉素 去离子水溶解，0.22μm滤膜除菌 20mg/ml 40μg/ml
利福平 DJPO溶解，0.22μm有机相滤膜除菌 10mg/ml 20μg/ml
氯霉素 无水乙醇溶解，0.22μm有机相滤膜除菌           34mg/ml 34μg/ml

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MF2459-1000UL Ar Qual Chemically Competent Cell农杆菌化学感受态细胞 10×100μl
MF2461-1000UL Ar 1193 Chemically Competent Cell农杆菌化学感受态细胞 10×100μl
JP0021-10G Chloramphenicol, USP Grade氯霉素 10g
JP0018-10G Ampicillin, Sodium Salt氨苄青霉素钠 10g
JP0017-5G Carbenicillin, Disodium Salt羧苄青霉素二钠盐 5g
JP0019-10G Kanamycin Sulfate硫酸卡那霉素 10g
JP0014-1G Rifampicin, USP Grade利福平 1g

 

 

 

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50×100μl
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K599 Chemically Competent Cell 农杆菌化学感受态细胞

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货号： MF2455-1000UL 品牌： Jinpan 标签： 分子生物学

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K599 Chemically Competent Cell

农杆菌化学感受态细胞

产品关键词：

Agrobacterium rhizogenes发根农杆菌；Ri质粒；K599感受态细胞；C58C1；Ar Qual；GV3101根癌农杆菌；特美汀 Timentin；

 

产品订购：更大包装或产品技术问题，请来电/在线咨询，电话：021-50837765 。

货号 产品名称 规格 价格（元）  
MF2455-1000UL    K599 Chemically Competent Cell农杆菌化学感受态细胞    10×100μ    l 430
MF2455-5000UL K599 Chemically Competent Cell农杆菌化学感受态细胞 50×100μl 1830

【好消息】：见我司的感受态细胞促销活动。买感受态细胞得京东卡，发表使用评论，赢红包，双重惊喜，行动起来啦。

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组分编号 组分名称

货号（规格）
MF2455-1000UL     MF2455-5000UL  
MF2455-A         K599 Chemically Competent Cell 10×100μl 50×100μl
MF2455-B pCAMBIA2301 Control Vector (10ng/μl)     10μl 10μl

 

产品描述

发根农杆菌（Agrobacterium rhizogenes）是根瘤菌科农杆属的一种革兰氏阴性土壤细菌，能够侵染大多数双子叶植物和少数单子叶植物以及个别裸子植物。起关键作用的是其携带的Ri质粒，含有负责发根自主性生长和冠瘿碱合成的基因。结构上于Ti质粒类似，主要有致毒区（Vir），T-DNA区以及冠瘿碱合成功能区等。根据合成冠瘿碱的不同，Ri质粒分为4种类型：1）甘露碱型；2）黄瓜碱型；3）农杆碱型；4）米奇矛型。

发根农杆菌菌株K599（NCPPB2659）含有pRi2659农杆碱型Ri质粒，具有广泛的宿主范围（葫芦科，豆科，茄科等），同时具有链霉素抗性。

我司（金畔生物）提供的K599化学转化感受态细胞经特殊工艺制作，基因型为Agrobacterium rhizogenes (strR) pRi2659 (agropine type)，经pCAMBIA2301质粒（卡那霉素抗性）检测转化效率>103cfu/μg DNA。

 

保存与运输条件：

保存：-80℃保存，一年有效。

运输：干冰运输。

 

注意事项

1）   感受态细胞应保存在-80℃，不可反复冻融和放置时间过长，以免降低感受态细胞的转化效率。

2）   整个转化操作，严格根据相应温度及无菌条件要求进行。

3）   加入质粒的体积不应大于感受态体积的1/10。质粒不纯或存在乙醇等有机物污染，会导致转化效率急剧下降。质粒增大一倍，转化效率下降一个数量级。

4）   混匀质粒时应用手指快速拨打管底或用枪吹吸混匀，务必使质粒快速、均匀分散开，与感受态细胞充分接触。

5）   转化高浓度的质粒可相应减少最终涂板用量。

6）   平板上克隆密度过大时，由于营养不足，克隆生长变慢，菌落变小。为获得大菌落，应减少质粒用量或降低涂板的菌量。

7）   K599具有链霉素抗性，不可用于具链霉素抗性质粒的转化。

8）   为了保证最佳的转化效率，发根农杆菌的培养务必使用TY培养基（配方见附表1）。

9）   为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。

使用方法

1)        取-80℃保存的感受态细胞于室温或手心片刻待其部分融化，达到冰水混合状态时插入冰浴中使其完全融化。

2)        往100μl感受态细胞悬液中加入0.01~1μg质粒DNA（转化效率较高，第一次使用前最好做预实验确定所加质粒的量），用手快速、剧烈拨打管底混匀或用枪吹吸混匀，依次放于冰中间静置5min，液氮5min，37℃水浴5min，冰浴5min。

3)        冰浴中拿出放室温，加入700μl无抗生素的TY液体培养基，于28℃振荡培养2h。

4)        6,000rpm离心1min，吸掉600ul上清，之后用枪轻轻吹打重悬菌体。之后加到含相应抗生素的TY平板上，用无菌玻棒轻轻的将细胞均匀涂开。室温正置10 min，待液体被吸收后，倒置平板，28℃培养2-3天。

附表1 固体和液体TY培养基配方

附表2 常见发根农杆菌对抗生素敏感性总表

农杆菌菌株  羧苄（carb） 链霉素（strep） 利福平（rif） 庆大霉素（gent） 卡那霉素（kan）
Ar A4 S S S S R
Ar Qual S R S R S
Ar 1193 R R R S S
K599 S R S S S
C58C1 S R R S S
JPU440 S R S S S
【备注】：S代表敏感，R代表抗性。

附表3 常见农杆菌抗生素配制方法

抗生素 配方 母液              工作液       
羧苄青霉素 去离子水溶解，0.22μm滤膜除菌 50mg/ml 50μg/ml
硫酸卡那霉素          去离子水溶解，0.22μm滤膜除菌 50mg/ml 50μg/ml
链霉素 去离子水溶解，0.22μm滤膜除菌 10mg/ml 50μg/ml
庆大霉素 去离子水溶解，0.22μm滤膜除菌 20mg/ml 40μg/ml
利福平 DJPO溶解，0.22μm有机相滤膜除菌 10mg/ml 20μg/ml
氯霉素 无水乙醇溶解，0.22μm有机相滤膜除菌           34mg/ml 34μg/ml

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货号 名称 规格             
MF2451-1000UL     JPU440 Chemically Competent Cell农杆菌化学感受态细胞     10×100μl
MF2453-1000UL C58C1 Chemically Competent Cell农杆菌化学感受态细胞 10×100μl
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JP0021-10G Chloramphenicol, USP Grade氯霉素 10g
JP0018-10G Ampicillin, Sodium Salt氨苄青霉素钠 10g
JP0017-5G Carbenicillin, Disodium Salt羧苄青霉素二钠盐 5g
JP0019-10G Kanamycin Sulfate硫酸卡那霉素 10g
JP0014-1G Rifampicin, USP Grade利福平 1g

 

 

 

规格信息

品牌：

Jinpan
CAS:

N/A
规格：

10×100μl
货期：

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Y190 Chemically Competent Cell 酵母菌化学感受态细胞

发表于由

Y190 Chemically Competent Cell 酵母菌化学感受态细胞

货号： MF2364-5000UL 品牌： Jinpan 标签： 分子生物学

描述

Y190 Chemically Competent Cell 酵母菌化学感受态细胞

产品关键词：

Y190-GAL4酵母单杂交系统；Y1HGold；pGBKT7；pGADT7；Ar Qual；X-α-Gal；Aureobasidin A （AbA）；金担子素；

 

产品订购：更大包装或产品技术问题，请来电/在线咨询，电话：021-50837765 。

货号 产品名称 规格 价格（元） 
MF2364-1000UL     Y190 Chemically Competent Cell 酵母菌化学感受态细胞      10×100μl       290
MF2364-5000UL Y190 Chemically Competent Cell 酵母菌化学感受态细胞 50×100μl 1320

 

产品组分：

组分编号 组分名称 保存               货号（规格）
MF2364-1000UL       MF2364-5000UL     
MF2364-A         Y190 Chemically Competent Cell       -80℃ 10×100μl 50×100μl
MF2364-B pGADT7 Control Vector (10ng/μl) -80℃ 10μl   10μl  
MF2364-C Carrier DNA (10μg/μl) -20℃ 100μl  500μl 
MF2364-D PEG/LiAC Solution +4℃ 5ml 25ml

 

产品描述

酵母双杂交系统是用于体内研究蛋白相互作用的一种非常便利的工具，常用的如GAL4为基础的双杂交系统，使用酵母转录因子GAL4来检测转录激活后的蛋白相互作用。工作原理为：一个完整的酵母转录因子GAL4由两个可以分开，功能上相互独立的结构域组成，N端有一个147个氨基酸组成的DNA结合域（DNA- BD），C端有一个由113个氨基酸组成的转录激活域（AD）。DB可以识别并结合上游激活序列（UAS），而AD能激活UAS下游基因进行转录，单独的BD或AD不能激活基因转录。正常情况，BD和AD不会结合，将待检测的蛋白质分别与BD和AD融合，形成诱饵融合蛋白（bait-DNA）和诱捕融合蛋白（prey-DNA），只有当诱饵和诱捕蛋白发生相互作用，促使BD和AD的相互接近，形成完整的GAL4，从而激活报告基因的转录。

Y190是GAL4系统酵母双杂交用实验菌株，MATa型，能直接转化质粒或与MATα型酵母菌株Y187通过接合（mating）操作进行蛋白相互作用验证或筛库实验。转化标志为trp1，leu2，cyh2。报告基因为lacZ，HIS3，MEL1。Y190-GAL4酵母双杂交系统需要两种质粒配套使用，pGB&pACT2或pGBKT7& pGADT7。pGB由或pGBKT7改造而来，筛选标志为Trp，用于表达DNA-BD与诱饵蛋白（bait）的融合蛋白；pACT2和pGADT7的结构和功能类似，筛选标志为Leu，用于表达AD与诱捕蛋白（prey）的融合蛋白。

本品为经特殊工艺制备的Y190酵母菌化学感受态细胞，用pGADT7质粒检测转化效率＞104cfu/μg DNA。且在-80℃能稳定保存三个月。

基因型

MATa, ura3-52, his3-200, ade2-101, lys2-801, trp1-901, leu2-3, 112, gal4Δ, gal80Δ, cyhr2, LYS2 : : GAL1UAS-HIS3TATA-HIS3, MEL1 URA3 : : GAL1UAS-GAL1TATA-lacZ

 

保存与运输方法

保存：其中感受态细胞按标签注明置于-80℃保存，三个月有效。其他组分按照标签注明保存，一年有效。

运输：干冰运输。

 

注意事项

1）   最好在冰上融化感受态细胞。

2）   转化高浓度质粒可相应减少用于涂板的菌量。同时转化2-3种质粒可适当增加质粒的用量。

3）   Y190对高温敏感，最适生长温度为27-30℃，一旦高于31℃，生长速度和转化率都呈指数下降。

4）   菌落变粉红色并不是污染，而是酵母细胞生长中的一种常见现象。当酵母细胞在平板上培养几天，将平板内的腺嘌呤消耗殆尽，那时酵母试图通过自身代谢途径合成腺嘌呤以供利用。然而，某些菌株ADE2基因被破坏，腺嘌呤合成受阻。且ADE4，5，6，7，8基因均正常。由此，造成中间产物P-ribosylamino imidazole（AIR）在细胞的积累使得菌落变为粉红色。

5）   酵母菌在缺陷培养基上生长速度比YPDA培养基慢，营养缺陷成分越多，生长越慢，以转化涂板为例：涂YPDA平板于29℃，48h培养可见直径1mm克隆；涂SD单缺平板于29℃，48-60h培养可见直径1mm克隆；涂SD双缺平板于29℃，60-80h培养可见直径1mm克隆；涂SD三缺或四缺平板于29℃，80-90h培养可见直径1mm克隆；

6）   为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。

使用方法

1）   Carrier DNA于使用前通过加热处理使其变性为单链状态，方法如下：95-100℃ 水浴或金属浴3min，快速插入冰中，静置3min。重复一次。

2）   取100 µl冰上融化的Y190化学感受态细胞，依次加入预冷的目的质粒0.5-3 µg，单链Carrier DNA 10 µl，PEG/LiAc 500µl，用枪吹打几次充分混匀，30℃水浴30 min（在15min时翻转6-8次混匀）。

3）   之后将管子放42℃水浴15 min（在7.5min时翻转6-8次混匀）。

4）   5000 rpm离心40s弃上清，用400 µl ddH2O重悬沉淀，离心30s弃上清。

5）  用50 µl ddH2O重悬，涂板，放入29℃培养48-96 h。

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规格信息

品牌：

Jinpan
CAS:

N/A
规格：

50×100μl
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