S17-1 λpir Chemically Competent Cell 大肠杆菌化学感受态细胞 货号： MF2493-1000UL 品牌： Jinpan 标签： 分子生物学

描述

S17-1 λpir Chemically Competent Cell

大肠杆菌化学感受态细胞

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菌株描述

S17-1 λpir菌株的染色体整合了RP4-2质粒，该质粒可携带染色体的部分DNA在接合菌株之间转移。S17- 1 λpir菌株缺失核酸内切酶 （endA1），提高了质粒DNA的产量和质量；重组酶缺陷型 （recA1）减少插入片段的同源重组概率，保证了插入DNA的稳定性。Tn7赋予该菌株弱的链霉素抗性。

S17-1 λpir菌株基因型：RP4-2(Km::Tn7,Tc::Mu-1), pro-82, LAMpir, recA1, endA1, thiE1, hsdR17, creC510

产品描述

本品是大肠杆菌S17-1 λpir菌株经特殊工艺制作所得的感受态细胞，可用于DNA的热击转化。经pUC19质粒检测转化效率可达1×108 cfu/μg DNA。且在-80℃能稳定保存几个月转化效率不发生改变。

产品包装

保存与运输条件：

保存：-80℃保存，六个月有效。

运输：干冰运输。

注意事项

1） 感受态细胞必须用干冰运输，感受态细胞应在-80℃保存。

2） 感受态细胞最好在冰上融化，不可在冰上放置时间过长，长时间存放会降低转化效率。

3） 进行转化操作时，需在相应温度及无菌条件下进行。

4） 为防止转化实验不成功，可保留部分连接反应液以重新转化，将损失降到最低。

5） 产品包装内含质粒pUC19 DNA(10pg/μl)，供对照实验用。

6） 后续进行阳性菌落的扩繁和高纯质粒的获取，推荐选用TB培养基（Terrific Broth），优于LB或SOC。

7） 为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。

使用方法【所有操作均在无菌条件的标准下进行】

1） 从-80℃冰箱取出取感受态细胞，迅速置于冰浴中，5min后待菌块融化，加入目的DNA（质粒或连接产物），用手轻弹管底轻轻混匀（避免用枪吸打），冰浴静置25min。

2） 42℃水浴热激45s，迅速将离心管转移到冰浴中，冰上静置2min。此过程不要摇动离心管。

3） 向每个离心管中加700 μl无菌的LB培养基（不含抗生素），混匀后置于37℃ 摇床，200 rpm振荡培养60min，目的使质粒上相关的抗性标记基因表达，使菌体复苏。

4） 低速离心收菌（比如5000rpm，1min），留取100μl左右上清，用枪轻轻吹打重悬菌块，之后加到含所选质粒筛选抗生素的LB固体琼脂培养基上，用无菌的涂布棒将细胞均匀涂开，将平板置于室温（或37℃）直至液体被吸收，倒置培养，37℃培养过夜（12-15h）。

【注意】：

a）涂布用量可根据具体实验调整。若转化的DNA总量较多，可不用离心，直接取少量转化产物涂布平板；反之，若转化的DNA总量较少，则通过离心（5000 rpm，1min）后吸除部分培养液，悬浮菌体后将其涂布于一个平板中。原则是以在平板上能挑到单克隆菌落为宜。

b）新制备的固体培养基不易涂干，可将平板正置于37℃直至液体被吸收后再倒置培养。

c）涂布剩余的菌液可置于4℃保存，如果次日的转化菌落数过少，可以将剩下的菌液再涂布新培养基进行培养。

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 — —Written/Edited by V. Shallan【版权归金畔生物/JP金畔所有】

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