RNA 定量的最佳技术介绍

RNA 和 DNA 定量（有时称为核酸定量）可确定给定样品中 RNA 或 DNA 的浓度。定量过程的一部分可能涉及处理混合物样品，可能含有多种污染物，例如蛋白质、其他核酸或有机化合物。

什么是RNA定量？

有多种实验方法可用于 RNA 定量。其中包括用于 RNA 定量、荧光或分光光度测量的 PCR 方法。 

用于RNA 定量的分光光度法和荧光法比 PCR 等方法具有多个优势。使用光学方法进行 RNA 定量不需要任何额外的样品制备，非常经济高效且耗时较少。虽然基于 PCR 的方法可以提供良好的灵敏度，但它们更复杂且执行成本更高，并且只有极低 RNA 浓度的 RNA 定量才需要这种水平的灵敏度。 

分光光度法和荧光分析

分光光度测量提供了一种稳健且直接的 RNA 定量方法。RNA 定量通常在 260 nm 下进行，同时还会收集 UV 范围内的一系列波长。大多数蛋白质、小有机分子和核酸在该区域具有很强的吸收和发射特征，从而可以对 RNA 进行定量并识别潜在污染物。

在已知光程下测量的样品吸光度与该样品的浓度成正比。在特定波长（RNA 为 260 nm）下透过样品的光量可用于 Beer-Lambert 方程来计算感兴趣样品的浓度，在本例中用于 RNA 定量。还必须知道感兴趣物种的摩尔吸收系数。

计算摩尔吸收系数相对简单。由于给定波长下的吸光度和光程之间的关系与浓度成线性比例，因此可以测量参考样品的一系列给定稀释度。通过对这些数据点进行线性拟合，可以计算摩尔吸收系数并用于将来的量化。对于 DNA 和 RNA 等充分表征的样品，系数是已知的并包含在分析软件中。 

RNA 定量也可以通过荧光测量来进行。荧光测量比基于吸光度的测量具有更高的灵敏度。已经开发出专为激发感兴趣的分析物而开发的检测试剂盒。即使在复杂混合物或存在污染物的情况下，这些也可用于 RNA 定量。样品的荧光量也与浓度成正比，并且可以通过使用已知浓度的类似样品的标准曲线来定量。 

用于 RNA 定量的分光光度计

DeNovix 是生物技术专家，拥有多种针对 RNA 定量进行优化的仪器，包括 DS-11 系列和 QFX 荧光计，这些仪器在设计时考虑了 RNA 定量的一些复杂性。

QFX 荧光计具有出色的灵敏度和特异性，适用于可能涉及高度复杂的混合物或需要在极低浓度下进行 RNA 定量的挑战性 RNA 定量情况。它配备了四个光源和带有敏感光电二极管的发射通道，所有这些都可以选择用于药理学应用的安全审计跟踪记录。 

DS -11 系列是一款适用于常规样品和珍贵样品的微量仪器。DS-11 可以处理小至一微升的体积，并在最宽的可用动态范围内进行定量。DS-11 还配备了易于使用的软件，可以显示全光谱扫描以及通常用作 RNA 定量和质量控制一部分的 260/280 和 260/230 比率。

使用 RNA 测序对细胞类型进行分类

RNA 测序 (RNA-seq) 是一项革命性技术，改变了基因组学领域。它为研究人员揭示细胞和分子水平上发生的许多复杂过程开辟了新途径。与 DNA 测序不同，RNA-seq 通过提供任何给定时间所有活性基因的快照来深入了解基因组的功能元件。那么，这如何帮助用户对不同的细胞类型进行分类呢？请继续阅读以了解更多信息。

RNA 测序在细胞类型分类中的威力

RNA 测序已成为细胞类型分类的强大工具。它使科学家能够识别特定的细胞类型并了解它们在各种生物过程中的作用。这是因为 RNA-seq 能够分析单个细胞中的基因表达水平。许多研究领域都将从这种开创性的方法中受益，但它在研究肺纤维化等疾病方面已经显示出非凡的潜力，在这些疾病中，不同细胞群的作用尚未全了解。

单细胞 RNA 测序：游戏规则改变者

单细胞 RNA 测序 (scRNA-seq) 将 RNA 测序提升到一个新水平。它使科学家能够分析单个细胞的转录组，提供细胞类型和状态的高分辨率视图。与传统的 RNA 测序方法相比，这是一个重大进步，传统的 RNA 测序方法提供大量细胞的平均基因表达谱。

在最近一项题为“单细胞 RNA 测序揭示肺纤维化中不同上皮和间质谱系的促纤维化作用“的研究中，scRNA-seq 被用来揭示肺纤维化的复杂细胞景观。该研究使用 10x Genomics Chromium 平台进行单细胞 RNA 测序，该平台生成乳液中的单细胞凝胶珠 (GEM)，用于逆转录过程以创建 cDNA。然后对该 cDNA 进行扩增并用于测序。

DeNovix 在 RNA 测序中的作用

DeNovix DS-11 FX+ 分光光度计/荧光计在这项研究中发挥了至关重要的作用。该仪器用于定量 RNA，这是 RNA 测序过程中的关键步骤。RNA的定量确保了测序过程有足够的材料，并有助于保证样品的质量。这是 10x Genomics 平台单细胞 RNA 测序的准备步骤。

细胞计数是 RNA 测序的另一个重要准备步骤。在一项相关研究“模拟人类肺细胞暴露于野火中发现异常的 lncRNA 特征“中，DeNovix CellDrop™ 系统用于在 0.4% 台盼蓝 1:1 稀释液中对人类永生化支气管气管细胞 (AALE) 进行计数，并在其死亡前 24 小时进行计数。直接烟雾暴露（DSE）。暴露于气液界面 (ALI) 室后，细胞用于 RNA 测序分析，以识别 IncRNA 的变化。结果表明烟雾成分对于野火烟雾的分子效应的重要性。具体来说： 

“我们的结果阐明了化学成分（以及地理来源）在评估野火烟雾暴露可能导致的呼吸系统健康风险方面的重要性。我们使用通过实验生成的 RNA-seq 数据进行公正的分析，旨在识别差异表达的转录本，在这里，通过严格和全局的分析，我们证明不同的野火烟雾会诱导 lncRNA 的异常表达。”

机器学习和 RNA 测序

机器学习是另一种越来越多地与 RNA 测序结合使用的工具。通过训练已知细胞类型的数据，机器学习算法可以根据细胞类型的基因表达谱对细胞类型进行分类。这可以大大提高细胞类型分类的准确性和效率。

RNA测序的应用

RNA-seq 的应用广泛且多样。从了解疾病中细胞群的复杂性到发现选择性剪接变体，RNA-seq 是现代基因组学库中的多功能工具。

RNA 测序的未来

随着新技术和方法的不断开发，RNA测序的未来是光明的。对不同 RNA 分子及其表达水平的研究不断增长，这将与 RNA-seq 的进步契合，并扩大我们可以理解的细胞类型的数量。 

在 DeNovix，我们很自豪能够成为这个令人兴奋的领域的一部分。我们邀请您探索我们的产品和服务范围，并与我们一起突破 RNA 测序的可能界限。使用我们的组合分光光度计/荧光计和开创性的自动细胞计数器，用户可以优化 RNA 测序的准备步骤，以保证最高的质量。我们可以一起继续解开细胞的秘密，并在分子水平上增进我们对生命的理解。