badrilla免疫测定校准技术简述

Badrilla 开发了一种用于免疫测定校准的专有技术，可将常见的免疫测定平台（蛋白质印迹）升级为强大的定量平台。定量免疫测定可用于有限数量的应用（某些 ELISA 测定），但大多数免疫测定形式（蛋白质印迹、免疫显微镜）中不存在定量免疫测定。研究人员希望尽可能以绝对化学单位准确、可重复地测量生物标志物。为了实现这一目标，Badrila 创建了一种专有的校准标准技术，将蛋白质印迹升级为定量免疫测定，能够检测绝对化学单位（pmol/样本或类似单位）的生物标志物浓度。这为快速开发感兴趣的生物标志物的简单定量测定提供了一条途径。

这项技术是如何运作的？

高质量校准标准品将特定免疫测定的表位特征整合到重组产品中，或者通过共价连接到支架上确定的反应位点（本身是重组蛋白：b），或者通过制造为支架本身的延伸a）。这些制造方法允许根据需要掺入各种复杂的表位，从简单的肽和磷酸肽到蛋白质结构域。

可以快速生成所研究的生物标志物校准标准。此类校准标准可以以允许构建校准曲线的浓度范围并入测定中。这可用于高精度地确定生物标志物的绝对浓度。

在测试系统中，对 His6 表位校准标准品进行了两次蛋白质印迹分析。观察到 55kDa 的单条带，信号强度随校准物上样量的变化而变化 (4pmol – 0.125pmol)。

原始数据的密度测定允许构建校准曲线，该校准曲线可以通过以高的精度一式三份检查的三种校准物浓度轻松定义。使用校准曲线可以计算并行检查的生物标志物的浓度。观察到的浓度和绝对浓度的变化小于 10%。

哪些生物标志物可以校准？

· 线性肽表位

· 翻译后修饰位点（磷酸化、糖化等）

· 半抗原（染料、药物、代谢物）

· 蛋白质结构域

· 单个或多个表位，以及

· 上述的组合

通过协作发展

Badrilla 与利兹大学、利物浦大学和牛津大学的杰出学术团体合作开展了一项研发计划。我们富有成效的协作方法使我们能够：

· 采用定量质谱法的基准定量蛋白质印迹技术

· 将定量蛋白质印迹与高通量蛋白质印迹相结合，以实现更高的分析通量

· 探索新颖的制造技术（用于校准标准）以扩展该技术的多功能性。

抗体定量的最佳技术是什么？

抗体定量是可重复标记和可靠鉴定各种单克隆抗体类别的重要步骤。它提供了可操作的信息，包括特定应用的最佳稀释度、如何有效纯化特定抗体以及哪些细胞系将产生最有价值的结果。

评估总抗体浓度可能具有挑战性，因为根据用于纯化样品的技术，只有总计数的一部分包含活性抗原结合抗体。此外，分子科学家可以使用各种实验方法来进行抗体定量。那么哪种技术最好呢？

抗体终点滴定

滴定用于测量未知溶质的浓度。抗体浓度由终点指示，通常是溶液中跟随或等于等当点的颜色变化。尽管该技术有其优点，但抗体滴度可能会产生误导，特别是对于含有高浓度非活性或低亲和力抗体的样品。

酶联免疫吸附测定 (ELISA)

ELISA 试剂盒在很大程度上取代了湿化学实验室中的终点滴定，因为它们提供了更高的重现性和总抗体浓度的准确测量。它们的工作原理是抗体-抗原结合，允许使用与报告酶缀合的抗体对特定分析物进行准确定量，报告酶在添加到底物时会进行催化。同样，反应通常由颜色变化来指示。

传统的 ELISA 试剂盒通常被认为是临床诊断应用的金标准，但这种免疫吸附测定有多种形式，包括直接、夹心和竞争 ELISA 试剂盒。

然而，结果的精度通常基于单点插值，单点插值依赖于落在标准曲线内的样品稀释度光密度。

通过分光光度法进行抗体定量

分光光度法可以根据 280 nm 处的吸光度快速准确地进行抗体定量。通过 280 nm 处的分光光度吸光度进行抗体定量是一种简单且经济有效的方法。它提供了输入特定消光系数的机会，无需标准曲线或检测试剂即可获得准确的测量结果，并可以评估荧光标记抗体的染料掺入情况。此外，用户还可以使用 Bradford 或 Lowry 等比色测定法进行分光光度抗体定量。