Aobious 免疫测定试剂盒

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Aobious 免疫测定试剂盒

1-磷脂酰肌醇-4，5-二磷酸磷酸二酯酶ELISA试剂盒

1-磷脂酰肌醇-4，5-二磷酸磷酸二酯酶ELISA试剂盒
目录号:E0269h

范围:0.156-10纳克/毫升

预期用途

该免疫测定试剂盒允许体外定量测定人1-磷脂酰肌醇-4，5-二磷酸磷酸磷酸二酯酶γ-1、血清、血浆、尿液、组织匀浆和细胞培养上清液以及其他生物流体中的浓度。


测试原理

该试剂盒中提供的微量滴定板已经预先包被了特异性针对1-磷脂酰肌醇-4，5-二磷酸磷酸二酯酶γ-1的抗体。然后将标准品或样品加入适当的微量滴定板孔中，将对1-磷脂酰肌醇-4，5-二磷酸磷酸二酯酶γ-1特异的生物素偶联的多克隆抗体制剂和与辣根过氧化物酶(HRP)偶联的抗生物素蛋白加入每个微量滴定板孔中并孵育。然后向每个孔中加入TMB底物溶液。只有那些含有1-磷脂酰肌醇-4，5-二磷酸磷酸二酯酶γ-1、生物素偶联的抗体和酶偶联的抗生物素蛋白的孔会显示颜色变化。通过加入硫酸溶液终止酶-底物反应，并用分光光度计在450nm±2nm的波长下测量颜色变化。然后通过将样品的外径与标准曲线进行比较来确定样品中的浓度。

材料和部件

试剂数量

检测板1

标准2

样本稀释液1×20毫升

检测稀释剂A 1×10毫升

检测稀释剂B 1×10毫升

检测试剂A 1 × 120μl

检测试剂B 1 × 120μl

洗涤缓冲液(25倍浓缩液)1×30毫升

底物1×10毫升

停止溶液1×10毫升

用于96孔的平板密封器5

说明1


所需的其他用品

酶标仪

移液器和移液器吸头

EP管

去离子水或蒸馏水


工具包的储存

检测板、标准品、检测试剂A和检测试剂B收到后应储存在-20℃下。收到试剂盒后，底物应始终保存在4℃下。其他试剂根据小瓶上的标签保存。但是为了长期保存，请将整个试剂盒保存在-20℃下。未使用的条带应保存在密封袋中，并提供干燥剂，以尽量减少暴露在潮湿空气中。检测试剂盒可在试剂盒的有效期内使用(自生产日期起六个月)。如果按照上述规定储存，打开的检测试剂盒将保持稳定，直到所示的失效日期。


样本收集和储存

血清-使用血清分离管(SST ),使样品凝结30分钟，然后以大约1000 × g的速度离心15分钟。取出血清并立即进行分析，或者等分并在-20℃或-80℃下储存样品。

血浆-使用EDTA或肝素作为抗凝剂收集血浆。在采集的30分钟内，将样品在2℃ – 8℃下以1000 × g离心15分钟。将样品储存在-20℃或-80℃下。避免反复冻融循环。

尿液——无菌收集当天的第一次尿液(中段),直接排入无菌容器。离心去除颗粒物质，立即化验或等分并储存在≤ -20℃下。避免反复冻融循环。

组织匀浆——组织匀浆的制备取决于组织类型。对于该分析，用1X PBS冲洗组织以去除多余的血液，在20mL 1X PBS中匀浆，并在≤ -20℃下储存过夜。在进行两次冻融循环以破坏细胞膜后，将匀浆以5000 x g离心5分钟。去除上清液并立即进行分析，或者等分并在≤ -20℃下储存。

细胞培养上清液和其他生物液体——通过离心去除颗粒，并立即进行分析，或在-20℃或-80℃下等分并储存样品。避免反复冻融循环。

注意:

5天内使用的样品可储存在2-8℃下，否则样品必须储存在-20℃ (1个月)或-80℃ (2个月)，以避免生物活性损失和污染。
由于某些化学物质的影响，由化学裂解缓冲液制备的组织或细胞提取样本可能会导致意外的ELISA结果。
受包括细胞生存力、细胞数量以及取样时间等因素的影响，试剂盒可能无法检测到来自细胞培养上清液的样品
样本溶血会影响结果，因此不能检测溶血标本。
进行检测时，将样品缓慢置于室温。
不要使用热处理过的样品。

程序的局限性

AOBIOUS仅对试剂盒本身负责，但不对检测过程中消耗的样品负责。用户应计算整个测试中可能使用的样本量。请提前预留足够的样品。
试剂盒不得在超过试剂盒标签上的有效期后使用。
请勿将其他批次或来源的试剂混合或替换。
如果样本生成的值高于最高标准，用样本稀释剂进一步稀释样本，然后重复检测。标准稀释剂、操作员、移液技术、清洗技术、培养时间或温度以及试剂盒年限的任何变化都会导致结合的变化。

试剂制备

洗涤缓冲液-如果浓缩物中有晶体形成，加热至室温并轻轻混合，直到晶体溶解。将30毫升洗涤缓冲液浓缩物稀释到去离子或蒸馏水中，以制备750毫升洗涤缓冲液。
标准品-用1.0毫升样品稀释液重新配制标准品。这种复溶产生200 ng/mL的储备溶液。在进行系列稀释之前，让标准品静置至少15分钟，并轻轻搅动(不允许直接在孔中进行系列稀释)。未稀释的标准作为高标准(200 ng/mL)。样本稀释剂用作零标准(0 ng/mL)。

纳克/毫升200±100。50.0 25.0 12.5 6.25 3.12 0

检测试剂A和B -分别使用检测稀释剂A和B (1:100)稀释至工作浓度。

化验程序

让所有试剂达到室温(请勿直接在37℃溶解试剂)。移液前，应轻轻旋转，混合所有试剂。避免起泡。为一次实验保留适当数量的试纸条，并从微量滴定板上移除多余的试纸条。取出的试纸条应重新密封，并储存在4℃下，直至试剂盒到期。按照前面章节的说明准备所有试剂、工作标准和样品。请在化验前预测浓度。如果这些值不在标准曲线的范围内，用户必须为他们的特定实验确定最佳样品稀释度。


每孔添加100 μl标准品、空白或样品。用板密封器覆盖。在37℃下孵育2小时。
清除每个孔的液体，不要冲洗。向每个孔中添加100 μl检测试剂工作溶液。用板密封器覆盖。在37℃下孵育1小时。检测试剂A工作溶液可能会出现浑浊。升温至室温，轻轻混合，直到溶液变得均匀。
吸取每个孔并清洗，重复该过程三次，总共清洗三次。使用喷射瓶、多通道移液器、歧管分配器或自动清洗器，用清洗缓冲液(约400 μl)填充每个孔进行清洗。在每个步骤中去除液体对于良好的性能至关重要。最后一次清洗后，通过抽吸或倾析去除任何残留的清洗缓冲液。将盘子倒置，用干净的纸巾吸干。
向每个孔中加入100 μl检测试剂B工作溶液。用新的板密封剂覆盖。在37℃下孵育1小时。
重复步骤4中的抽吸/清洗。
向每个孔中加入90 μl底物溶液。用新的板密封剂覆盖。在37℃下孵育15-30分钟。避光。
向每个孔中加入50 μl终止液。如果颜色变化不均匀，轻敲平板以确保充分混合。
使用设置为450纳米的酶标仪，一次测定每个孔的光密度。

注意:

吸光度是孵育时间的函数。因此，在开始分析前，建议所有试剂在使用前应新鲜制备，并且所有需要的条形孔都固定在微量滴定框架中。这将确保每个移液步骤花费的时间相等，不会中断。
请根据说明小心地重新配制标准品或工作检测试剂A和B，避免起泡并轻轻混合，直到晶体溶解。复溶的标准检测试剂A和B只能使用一次。这种分析需要少量的移液。为了最大限度地降低移液造成的不精确性，请确保移液器经过校准。建议一次移液吸取10μl以上。
为了确保准确的结果，在培养步骤中，板密封器的适当粘附是必要的。在孵育步骤之间，不要让孔长时间无盖放置。一旦将试剂添加到孔板条中，在检测过程中的任何时候都不要让孔板条变干。
对于程序中的每个步骤，向检测板添加试剂的总分配时间不应超过10分钟。
为避免交叉污染，请在添加每个标准水平、添加样品和添加试剂之间更换移液器吸头。此外，每种试剂使用单独的容器。
清洗程序至关重要。清洗不充分会导致精度下降和吸光度读数错误升高。
尽管不要求，但建议复制所有标准和样本。
底物溶液容易被污染。请避光保存。


特征：该分析识别重组和天然人1-磷脂酰肌醇-4，5-二磷酸磷酸二酯酶γ-1。没有观察到明显的交叉反应或干扰。

注意:限于目前的技术和知识，我们不可能完成人与所有类似物之间的交叉反应检测，因此，交叉反应可能仍然存在。

探测距离：3.12-200纳克/毫升。

统计

平均每个标准品、对照品和样品的重复读数，并减去平均零标准光密度。使用能够生成四参数逻辑(4-PL)曲线拟合的计算机软件，通过减少数据来创建标准曲线。或者，通过在x轴上绘制每个标准的平均吸光度与y轴上的浓度来构建标准曲线，并通过图上的点绘制最佳拟合曲线。数据可以通过绘制1-磷脂酰肌醇-4，5-二磷酸磷酸二酯酶γ-1浓度的对数对O.D .的对数来线性化，并且最佳拟合线可以通过回归分析来确定。建议用一些相关的软件来做这个计算，比如曲线专家1.3。这个过程将产生一个适当的但不太精确的数据拟合。如果样品已经稀释，从标准曲线读取的浓度必须乘以稀释系数。

重要提示:

受目前条件和科学技术的限制，我们无法对供应商提供的原材料进行全面的鉴定和分析。因此，使用该试剂盒可能存在一些定性和技术风险
最终的实验结果将与产品的有效性、最终用户的操作技能和实验环境密切相关。请确保有足够的样品。
不同批次的试剂盒在检测范围、灵敏度和显色时间上可能略有不同。请严格按照试剂盒中的说明进行实验，而我们网站上的电子说明仅供参考。
第一次打开板时，孔中可能有一些模糊的物质。它不会对最终检测结果产生任何影响。
除非需要，否则不要从储存袋中取出微量滴定板。
带宽为10纳米或更小、在450纳米波长下光密度范围为0-3 OD或更大的微量滴定板读数器可用于吸光度测量。
每次转移时使用新的一次性移液器吸头，以避免污染。
请勿将试剂从一个试剂盒批次替换到另一个试剂盒批次。仅使用制造商提供的试剂。
即使是同一个操作员在两个不同的实验中也可能得到不同的结果。为了获得更好的重现性结果，应控制检测中每一步的操作。此外，建议在对每批产品进行检测前进行初步实验。
每个套件都经过严格的质量控制测试。然而，由于一些意外的运输条件或不同的实验室设备，最终用户的结果可能与我们的内部数据不一致。来自不同批次的试剂盒之间的测定内差异也可能由上述因素引起。
不同制造商生产的同一产品的试剂盒可能会产生不同的结果，因为我们没有将我们的产品与其他制造商的产品进行比较。
有效期:六个月。

预防

建议与该试剂盒一起使用的终止溶液是酸性溶液。使用这种材料时，戴上眼睛、手、脸和衣服防护装置。

典型数据

此图表数据作为示例显示。每次运行检测时，必须生成标准曲线。

AOBIOUS是一家小型但发展迅速的公司，为全球研究市场提供新的生物活性药物样小分子。自2014年以来，我们是该市场上在定价方面提供按需定量(QOD)服务的公司。我们也是自2016年以来提供MolCart(摩尔浓度计算车)订购产品的公司。客户可以选择使用QOD/摩尔卡购买任何数量或摩尔浓度的产品。

一般储存条件
在没有任何附加说明的情况下，我们所有的产品都应在4摄氏度的冰箱中短期储存2-6个月。

我们不建议客户将我们的产品长期存放在他们自己的地方，因为他们可以随时从我们这里订购他们需要的确切数量。

上海金畔生物科技有限公司 是一家专注于分子生物学、细胞生物学、细菌学、遗传学、免疫学、生物化学、蛋白质学、细胞治疗、临床应用等领域，以销售为主的生物技术公司。销售的产品涉及，细胞株和菌株、胎牛血清、生化试剂、ELISA试剂盒、抗体和抗原、细胞因子、技术服务、实验耗材和消耗品、仪器设备等。Aobious 销售

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