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自由基与活性氧的区别

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自由基与活性氧的区别

自由基、活性氧、氧化应激、氧化、抗氧化剂；这些术语在科学和非科学背景下都有使用，尽管它们的含义和彼此之间的关系经常令人困惑。这些分子具有非常重要的生物学作用。首先，让我们来解释一下这些术语。

自由基与活性氧的区别


自由基

自由基是任何具有不成对电子的分子物质，因此高度不稳定和反应性。通过贡献或接受电子，它们可以分别充当氧化剂或还原剂。自由基是由多种正常生物过程产生的，包括有氧代谢和致病防御机制。它们也可能是由于辐射、污染物和香烟烟雾等外部暴露造成的。

活性氧

活性氧（ROS）是含氧自由基的一个子集。一些最常见的活性氧包括羟基自由基、超氧阴离子和过氧化氢 (H 2 O 2 )。通过氧化磷酸化过程，线粒体是超氧阴离子和过氧化氢的最大产生者。代谢率高的细胞会产生更多的活性氧。活性氮 (RNS) 是非 ROS 自由基的一个例子。一氧化氮 (NO) 是最常见的 RNS，在L-精氨酸代谢过程中产生。

抗氧化剂如何发挥作用？

抗氧化剂可以对抗自由基，它们以两种不同的方式发挥作用。酶抗氧化剂的作用是将有害的 ROS 分解或转化为 H 2 0 2，然后转化为水。超氧化物歧化酶（SOD）催化两种超氧阴离子转化为过氧化氢和氧气。虽然过氧化氢也是一种活性氧，但它对细胞的毒性远低于超氧阴离子。随后，另一种酶抗氧化剂过氧化氢酶将 H 2 0 2进入水中。谷胱甘肽、维生素 E 和维生素 C 等非酶抗氧化剂通过直接与自由基反应发挥作用。例如，谷胱甘肽具有游离的巯基，是自由基攻击的一个有吸引力的目标。然后自由基被猝灭，氧化型谷胱甘肽被谷胱甘肽还原酶回收。

什么是氧化应激？

只要抗氧化剂和自由基之间存在不平衡，氧化应激就会发生，从而导致大量不受控制的反应性自由基物质的产生。氧化应激会导致 DNA、蛋白质和脂质受损，并产生巨大影响。 ROS参与类风湿关节炎、心脏和血管功能障碍以及癌症等多种炎症性疾病的发病机制。最近的一篇综述概述了 ROS 在肿瘤微环境中的作用。

然而，ROS 也参与多种生理过程。从生理学角度来看，ROS 是重要的信号分子，可促进细胞增殖、分化和成熟。 ROS在突触可塑性、免疫反应和免疫代谢、心肌功能和氧传感中发挥着重要作用。过氧化氢是多种激酶介导的信号通路的重要调节剂。同样，RNS在生理和病理机制中都有作用。


H2DCFDA (DCFH-DA, DCFH) 活性氧（ROS）荧光探针

发表于由

H2DCFDA (DCFH-DA, DCFH) 活性氧（ROS）荧光探针

货号： JP4802-250MG 品牌： Jinpan 标签： 细胞生物学研究

描述

H2DCFDA (DCFH-DA) 活性氧（ROS）荧光探针

产品关键词

H2DCFDA (DCFH-DA); 2′,7′-Dichlorodihydrofluorescein diacetate 2′,7′-二氯二氢荧光素二乙酸酯；氧化应激探针；活性氧 ROS；过氧亚硝基阴离子（ONOO-）；CellROX Green Reagent；

产品信息

产品名称

 产品编号  规格    价格（元）       

H2DCFDA (DCFH-DA) 活性氧（ROS）荧光探针            

 JP4802-10MG 10mg

226
H2DCFDA (DCFH-DA) 活性氧（ROS）荧光探针 JP4802-50MG 50mg

546
H2DCFDA (DCFH-DA) 活性氧（ROS）荧光探针 JP4802-250MG 250mg

2186

【温馨提示】：对于使用量较少且要求更简单方便，可选择我司提供的活性氧检测试剂盒（ROS assay kit）（#JP4801-1KIT），此试剂盒不仅含荧光探针H2DCFDA，还包括阳性对照。

产品描述

H2DCFDA(DCFH-DA)，英文全名2′,7′-Dichlorodihydrofluorescein diacetate，中文全名2′,7′-二氯二氢荧光素二乙酸酯，是一种通用的氧化应激指示剂。具细胞膜渗透性，本身无荧光。一旦进入细胞后，被细胞酯酶水解生成2′,7′-二氯二氢荧光素（2′,7′-Dichlorodihydrofluorescein, DCFH），之后被快速氧化生成强荧光产物2′,7′-二氯荧光素（2′,7′-dichlorofluorescein, DCF），可用荧光光谱检测（Ex/Em= 504/529nm）。适用于检测活性氧（ROS）和一氧化氮（•NO），以及确定总的氧化应激水平。普遍用来监测细胞氧化还原过程。

本品以粉末形式提供，可直接溶于无水DJPO配制成1-10mM储存液，常用工作浓度1-10μM，需根据自身的实验体系或参考文献进行优化。

产品特性

1）   CAS NO：4091-99-0

2）   化学名：Benzoic acid, 2-[3,6-bis(acetyloxy)-2,7-dichloro-9H-xanthen-9-yl]; 2-(2,7-dichloro-3,6-diacetyloxy -9H-xanthen-9-yl)-benzoic acid;

3）   英文同义名：DCFH-DA;2′,7′-Dichlorodihydrofluorescein diacetate; 2,7-Dichlorodihydrofluorescein diacetate; 2′,7′-Dichlorofluorescin diacetate;

4）   中文同义名：2′,7′-二氯二氢荧光素二乙酸酯；2,7-二氯二氢荧光素二乙酸酯；

5）   分子式：C24H16Cl2O7

6）   分子量：487.29

7）   纯度：≥97%

8）   外观：白色至带黄色光泽的白色粉末

9）   溶解性：溶于DJPO（25mg/ml）、DMF（25mg/ml）、无水乙醇（25mg/ml）

10）化学结构：H2DCFDA (DCFH-DA, DCFH) 活性氧（ROS）荧光探针

保存与运输方法

保存：-20ºC避光干燥保存，至少2年有效。

运输：冰袋运输。

注意事项

1）   有机溶剂如DJPO储存液需分装成单次用量后，-20ºC避光保存，避免反复冻融。

2）   为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。

使用方法（仅作参考）

以下步骤是来源于大量文献总结的简易操作流程，仅作参考。用户需根据特定的应用和敏感性来做调整。

1）   将低温保存的冻干粉取出回至室温，低速离心使粉末落到瓶底。之后加入适量无水DJPO或其他有机溶剂配制成1-10mM储存液。未用完的DJPO储存液需分装并避光冻存在-20℃，避免反复冻融。

2）   于正式实验前，用生理盐缓冲液（比如：PBS，HBSS，HEPES）稀释到工作浓度1-10μM。需根据具体应用来调整合适的工作浓度。

3）   吸走培养液，加入步骤2）配制的染色工作液到细胞内，室温或30℃孵育5~60min。

4）   吸走染色工作液，用预热的生理缓冲液或细胞培养液清洗一遍。重新加入预热的生理缓冲液或细胞培养液，在适宜温度内孵育。对于二乙酸酯衍生物，需要短暂复原时间让细胞内酯酶将其水解，从而让染料对氧化应激产生反应。最佳的复原时间范围很广，由于某些细胞类型通常显示极其低水平的酯酶活性。

5）   将细胞暴露于实验刺激物之前，先测定加载细胞的背景荧光强度。

6）   根据以下情况评估阴性对照（Negative control），

6.1 绿色发射光谱内检查未染色细胞的自荧光情况。

6.2 对于流式分析，查明染料加载和处理后细胞的前向角散射和侧向角散射是不变。细胞尺寸的变化可能与起泡或萎缩有关，由于处理或有毒反应引起的。

6.3 对包含和不包含刺激物的染料和缓冲液/培养基的无细胞混合物进行荧光检测。在不含细胞外酯酶和其他氧化酶的情况下，随着时间荧光的逐渐增加可能与瞬间水解、空气氧化、和/或光诱导氧化有关。

6.4 检查培养在生长培养液或简单缓冲液内的未处理加载细胞（对照）的荧光。在健康细胞内，细胞内酶和/或天然抗氧化剂会清除这些氧自由基。经过染料加载复原时间后，健康细胞应该表现出低水平的荧光信号，且在整个实验期间相对稳定。然而，逐渐增加（由于自氧化）或降低（由于细胞内染料丧失或光淬灭）也有可能观察到。在不含任何刺激物或诱导剂的体系内，健康和未处理细胞突然发现强荧光，表明细胞发生死亡或一些其他的氧化事件。

7）   建立阳性对照（Positive control），可能用以下方法刺激氧化活性：

7.1 肿瘤促进剂（PMA，工作浓度100pM~10μM）

7.2 H2O2或TBHP（终浓度~100μM）（根据细胞本身对其的灵敏度和反应性来提高或降低浓度）

8）   确保刺激药物或化合物不会引起染料荧光淬灭。检查化合物的吸收光谱，确定化合物的吸收峰不会与氧化后染料的最大激发或发射光谱发生重叠。

相关产品

货号 名称 规格
JP4801-1KIT Reactive Oxygen Species (ROS) Assay Kit活性氧（ROS）检测试剂盒 100~500T
JP4802-50MG H2DCFDA (DCFH-DA)活性氧（ROS）荧光探针 50mg
JP4804-1MG Aminophenyl fluorescein (APF)氨基苯基荧光素 1mg
JP4805-1MG Hydroxyphenyl fluorescein (HPF)羟苯基荧光素 1mg
MM0707-500ML 30% H2O2Solution 30%过氧化氢溶液（30%双氧水） 500ml
JP5603-50ML tert-Butyl hydroperoxide (TBHP) Solution叔丁基过氧化氢溶液 50ml
MZ2401-100UL PMA (TPA, 5mg/ml)佛波肉荳蔻醋酸（5mg/ml） 100μl
JP4455-1MG Dihydrorhodamine 123 (DHR 123)二氢罗丹明123 1mg
MM0706-1G Luminol鲁米诺 1g
JP4606-500UG    Coelenterazine Native天然腔肠素 500μg
JP4815-50UL CellROX Green Reagent, for oxidative stress detection氧化应激检测用探针（绿色）   50µl

 

 

 

 

规格信息

品牌：

Jinpan
CAS:

4091-99-0
规格：

250mg
货期：

咨询客服

H2DCFDA (DCFH-DA, DCFH) 活性氧（ROS）荧光探针

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H2DCFDA (DCFH-DA, DCFH) 活性氧（ROS）荧光探针

货号： JP4802-50MG 品牌： Jinpan 标签： 细胞生物学研究

描述

H2DCFDA (DCFH-DA) 活性氧（ROS）荧光探针

产品关键词

H2DCFDA (DCFH-DA); 2′,7′-Dichlorodihydrofluorescein diacetate 2′,7′-二氯二氢荧光素二乙酸酯；氧化应激探针；活性氧 ROS；过氧亚硝基阴离子（ONOO-）；CellROX Green Reagent；

产品信息

产品名称

 产品编号  规格    价格（元）       

H2DCFDA (DCFH-DA) 活性氧（ROS）荧光探针            

 JP4802-10MG 10mg

226
H2DCFDA (DCFH-DA) 活性氧（ROS）荧光探针 JP4802-50MG 50mg

546
H2DCFDA (DCFH-DA) 活性氧（ROS）荧光探针 JP4802-250MG 250mg

2186

【温馨提示】：对于使用量较少且要求更简单方便，可选择我司提供的活性氧检测试剂盒（ROS assay kit）（#JP4801-1KIT），此试剂盒不仅含荧光探针H2DCFDA，还包括阳性对照。

产品描述

H2DCFDA(DCFH-DA)，英文全名2′,7′-Dichlorodihydrofluorescein diacetate，中文全名2′,7′-二氯二氢荧光素二乙酸酯，是一种通用的氧化应激指示剂。具细胞膜渗透性，本身无荧光。一旦进入细胞后，被细胞酯酶水解生成2′,7′-二氯二氢荧光素（2′,7′-Dichlorodihydrofluorescein, DCFH），之后被快速氧化生成强荧光产物2′,7′-二氯荧光素（2′,7′-dichlorofluorescein, DCF），可用荧光光谱检测（Ex/Em= 504/529nm）。适用于检测活性氧（ROS）和一氧化氮（•NO），以及确定总的氧化应激水平。普遍用来监测细胞氧化还原过程。

本品以粉末形式提供，可直接溶于无水DJPO配制成1-10mM储存液，常用工作浓度1-10μM，需根据自身的实验体系或参考文献进行优化。

产品特性

1）   CAS NO：4091-99-0

2）   化学名：Benzoic acid, 2-[3,6-bis(acetyloxy)-2,7-dichloro-9H-xanthen-9-yl]; 2-(2,7-dichloro-3,6-diacetyloxy -9H-xanthen-9-yl)-benzoic acid;

3）   英文同义名：DCFH-DA;2′,7′-Dichlorodihydrofluorescein diacetate; 2,7-Dichlorodihydrofluorescein diacetate; 2′,7′-Dichlorofluorescin diacetate;

4）   中文同义名：2′,7′-二氯二氢荧光素二乙酸酯；2,7-二氯二氢荧光素二乙酸酯；

5）   分子式：C24H16Cl2O7

6）   分子量：487.29

7）   纯度：≥97%

8）   外观：白色至带黄色光泽的白色粉末

9）   溶解性：溶于DJPO（25mg/ml）、DMF（25mg/ml）、无水乙醇（25mg/ml）

10）化学结构：H2DCFDA (DCFH-DA, DCFH) 活性氧（ROS）荧光探针

保存与运输方法

保存：-20ºC避光干燥保存，至少2年有效。

运输：冰袋运输。

注意事项

1）   有机溶剂如DJPO储存液需分装成单次用量后，-20ºC避光保存，避免反复冻融。

2）   为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。

使用方法（仅作参考）

以下步骤是来源于大量文献总结的简易操作流程，仅作参考。用户需根据特定的应用和敏感性来做调整。

1）   将低温保存的冻干粉取出回至室温，低速离心使粉末落到瓶底。之后加入适量无水DJPO或其他有机溶剂配制成1-10mM储存液。未用完的DJPO储存液需分装并避光冻存在-20℃，避免反复冻融。

2）   于正式实验前，用生理盐缓冲液（比如：PBS，HBSS，HEPES）稀释到工作浓度1-10μM。需根据具体应用来调整合适的工作浓度。

3）   吸走培养液，加入步骤2）配制的染色工作液到细胞内，室温或30℃孵育5~60min。

4）   吸走染色工作液，用预热的生理缓冲液或细胞培养液清洗一遍。重新加入预热的生理缓冲液或细胞培养液，在适宜温度内孵育。对于二乙酸酯衍生物，需要短暂复原时间让细胞内酯酶将其水解，从而让染料对氧化应激产生反应。最佳的复原时间范围很广，由于某些细胞类型通常显示极其低水平的酯酶活性。

5）   将细胞暴露于实验刺激物之前，先测定加载细胞的背景荧光强度。

6）   根据以下情况评估阴性对照（Negative control），

6.1 绿色发射光谱内检查未染色细胞的自荧光情况。

6.2 对于流式分析，查明染料加载和处理后细胞的前向角散射和侧向角散射是不变。细胞尺寸的变化可能与起泡或萎缩有关，由于处理或有毒反应引起的。

6.3 对包含和不包含刺激物的染料和缓冲液/培养基的无细胞混合物进行荧光检测。在不含细胞外酯酶和其他氧化酶的情况下，随着时间荧光的逐渐增加可能与瞬间水解、空气氧化、和/或光诱导氧化有关。

6.4 检查培养在生长培养液或简单缓冲液内的未处理加载细胞（对照）的荧光。在健康细胞内，细胞内酶和/或天然抗氧化剂会清除这些氧自由基。经过染料加载复原时间后，健康细胞应该表现出低水平的荧光信号，且在整个实验期间相对稳定。然而，逐渐增加（由于自氧化）或降低（由于细胞内染料丧失或光淬灭）也有可能观察到。在不含任何刺激物或诱导剂的体系内，健康和未处理细胞突然发现强荧光，表明细胞发生死亡或一些其他的氧化事件。

7）   建立阳性对照（Positive control），可能用以下方法刺激氧化活性：

7.1 肿瘤促进剂（PMA，工作浓度100pM~10μM）

7.2 H2O2或TBHP（终浓度~100μM）（根据细胞本身对其的灵敏度和反应性来提高或降低浓度）

8）   确保刺激药物或化合物不会引起染料荧光淬灭。检查化合物的吸收光谱，确定化合物的吸收峰不会与氧化后染料的最大激发或发射光谱发生重叠。

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货号 名称 规格
JP4801-1KIT Reactive Oxygen Species (ROS) Assay Kit活性氧（ROS）检测试剂盒 100~500T
JP4802-50MG H2DCFDA (DCFH-DA)活性氧（ROS）荧光探针 50mg
JP4804-1MG Aminophenyl fluorescein (APF)氨基苯基荧光素 1mg
JP4805-1MG Hydroxyphenyl fluorescein (HPF)羟苯基荧光素 1mg
MM0707-500ML 30% H2O2Solution 30%过氧化氢溶液（30%双氧水） 500ml
JP5603-50ML tert-Butyl hydroperoxide (TBHP) Solution叔丁基过氧化氢溶液 50ml
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JP4606-500UG    Coelenterazine Native天然腔肠素 500μg
JP4815-50UL CellROX Green Reagent, for oxidative stress detection氧化应激检测用探针（绿色）   50µl

 

 

 

 

规格信息

品牌：

Jinpan
CAS:

4091-99-0
规格：

50mg
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Reactive Oxygen Species (ROS) Assay Kit 活性氧（ROS）检测试剂盒

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Reactive Oxygen Species (ROS) Assay Kit 活性氧（ROS）检测试剂盒

货号： JP4801-1KIT 品牌： Jinpan 标签： 细胞生物学研究

描述

Reactive Oxygen Species (ROS) Assay Kit 活性氧（ROS）检测试剂盒

搜索关键词：

Reactive Oxygen Species，ROS活性氧；DCFH-DA；JC-1线粒体模电位探针；JC-10；CAS NO：4091-99-0；

产品订购：

  货号                                                                                                产品名称            规格                价格（元）  
  Reactive Oxygen Species (ROS) Assay Kit 活性氧（ROS）检测试剂盒   JP4801-1KIT   100~500T   468

研究意义：

活性氧（Reactive Oxygen Species，ROS）包括超氧自由基、过氧化氢、及其下游产物过氧化物和羟化物等，参与细胞生长增殖、发育分化、衰老和凋亡以及许多生理和病理过程。

产品描述：

活性氧检测试剂盒（Reactive Oxygen Species Assay Kit，或ROS Assay Kit）是一种利用荧光染料DCFH-DA（2,7-Dichlorodihydrofluorescein diacetate）进行细胞内活性氧水平检测的常用方法。检测原理在于DCFH-DA本身无荧光，能自由穿过细胞膜，一旦进入细胞后，被胞内的酯酶水解生成无荧光的DCFH。DCFH不能穿透细胞膜，从而保留在胞内。此时胞内的活性氧可以氧化DCFH生成有荧光的DCF。通过DCF荧光的强弱即可反映活性氧的水平。

本试剂盒包含活性氧阳性对照Rosup，利于活性氧的检测。Rosup是一种混合物，浓度为50mg/ml。因检测对象和反应体系的不同，本试剂盒可检测100-500个样品。

产品组成：

 组分编号         组分名称                                              规格               储存方法
 JP4801-A  活性氧探针DCFH-DA（10mM）  0.1ml  -20℃避光保存
 JP4801-B  活性氧阳性对照（Rosup, 50mg/ml）  1ml  -20℃保存
— —  产品说明书

1份

保存与运输方法：

保存：-20ºC保存，有效期一年。

运输：冰袋运输。

使用方法

1. 装载探针

【注意】：对于刺激时间较短（通常2h以内）的细胞，先装载探针，后用活性氧阳性对照Rosup和/或待研究药物刺激细胞；对于刺激时间较长（通常6h以上）的细胞，先用活性氧阳性对照Rosup或待研究药物刺激细胞，后装载探针。

1.1 原位装载探针（仅适用于贴壁细胞）

1）检测前一天进行细胞铺板，确保活性氧检测当天细胞汇合率达到50~70%。

2）吸出细胞培养液，加入适量体积以及浓度的待研究药物，于37ºC细胞培养箱内孵育，具体诱导时间根据细胞类型和药物自身特性决定。

【可选】阳性对照Rosup：先用无血清培养液按照1:1000比例稀释阳性对照，通常37℃培养箱内刺激20~30min可以观察到显著的活性氧水平提高，但依细胞类型会有比较明显差异【刺激时间可参考文献或实验经验来调整】。如果刺激后30min内未观察到活性氧水平升高，可以适当提高Rosup的工作浓度；反之，如果活性氧升高过快，则适当降低Rosup的工作浓度。

3）按照1:1000用无血清培养液稀释DCFH-DA（10mM），使其终浓度为10μM.。吸出细胞培养液，加入适当体积DCFH-DA工作液。【注意】：加入体积以能充分盖住细胞为宜。对于6孔板，每个孔加入DCFH-DA工作液不少于1ml。对于96孔板，每个孔加入DCFH-DA工作液不少于0.1ml。

4）37ºC细胞培养箱内孵育20min。

5）用无血清细胞培养液洗涤细胞三次，以充分去除未进入细胞内的DCFH-DA。

1.2 收集细胞后装载探针

1）按照常规方法，清洗并收集足量的细胞。【注意】：保证细胞的状态健康。

2）用适量体积以及浓度的待研究药物重新悬浮细胞，于37ºC细胞培养箱内孵育，具体诱导时间根据细胞类型和药物自身特性决定。【可选】阳性对照Rosup：先用无血清培养液按照1:1000比例稀释阳性对照，通常37℃培养箱内刺激20~30min可以观察到显著的活性氧水平提高，但依细胞类型会有比较明显差异【刺激时间可参考文献或实验经验来调整】。如果刺激后30min内未观察到活性氧水平升高，可以适当提高Rosup的工作浓度；反之，如果活性氧升高过快，则适当降低Rosup的工作浓度。

3）探针装载前，按照1:1000用无血清培养液稀释DCFH-DA（10mM），使其终浓度为10μM.。

4）离心，吸出细胞内刺激药物，之后用适量DCFH-DA工作液重悬细胞，使得细胞密度为1×106~2×107/ml。【注意】：细胞密度需根据后续检测体系，检测方法，以及检测总量来调整。例如，对于流式分析，单管检测内细胞数目控制在104~ 106之间。

5）37ºC细胞培养箱内孵育20min。每隔3~5min颠倒混匀一下，使探针和细胞充分接触。

6）用无血清细胞培养液洗涤细胞三次，以充分去除未进入细胞内的DCFH-DA。

2. 检测

2.1 原位装载法

可用激光共聚焦显微镜直接观察，或收集细胞后用荧光分光光度计、荧光酶标仪或流式细胞仪检测。

2.2 收集细胞后装载法

可用荧光分光光度计、荧光酶标仪或流式细胞仪检测，也可用激光共聚焦显微镜直接观察。

3. 参数设置

使用488nm激发波长，525nm发射波长，实时或逐时间点检测刺激前后荧光的强弱。DCF的荧光光谱和FITC非常相似，可用FITC的参数设置检测DCF。

4. 其他说明

1）对于某些细胞，若发现没有刺激的阴性对照细胞荧光也比较强，可以按照1:2000～1:5000稀释DCFH-DA，使DCFH-DA的工作浓度为2～5μM。探针装载时间也可依情况在15～60min内适当进行调整。

2）Rosup仅仅用于作为阳性对照的样品，并不是在每个样品中都需加入Rosup阳性对照。

注意事项

1）探针装载后，一定要洗净残余的未进入细胞内的探针，否则会导致背景较高。

2）探针装载完毕并洗净残余探针后，可以进行激发波长的扫描和发射波长的扫描，以确认探针的装载情况是否良好。

3）尽量缩短探针装载后到测定所用的时间（刺激时间除外），以减少各种可能的误差。

4）为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。

 — — Written/Edited by V. Shallan【版权归集奇生物/JP金畔所有】

规格信息

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Jinpan
CAS:

N/A
规格：

100~500T
货期：

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