肽标记策略
肽标记策略
标记肽可以通过修饰分离的肽或在固相合成过程中结合标记来制备。用荧光团标记肽的常用策略包括:
肽合成过程中的标记-可以耐受解封闭程序的染料可以结合到肽链的氨基末端。
2.N端修饰:N端是指蛋白质或多肽链起始处的游离胺基（-NH2）。可以使用胺反应性琥珀酰亚胺酯荧光团对其进行共翻译修饰或翻译后修饰。
3.赖氨酸残基:赖氨酸残基的ε-氨基可以用胺反应性琥珀酰亚胺酯荧光团修饰。
4.C端修饰:C端是指蛋白质或多肽链末端的羧基（-COOH）。它可以在翻译后进行修饰，通常是在C端酰胺化之后。
5.如果肽链上有半胱氨酸，巯基反应蛋白标记可以共价标记合成肽。
6.非天然氨基酸可以在合成过程中结合到肽链中，然后通过生物正交反应（例如基于叠氮化物和炔烃的反应以及酮醛反应）用染料或其他探针标记。
使用 3Dye 差异蛋白质组试剂进行蛋白质标记
差异蛋白质组学可以比较来自不同生物来源的大量蛋白质。通常的例子是经过处理和未经处理的细胞、不同的细菌菌株。即使蛋白质谱中的微小差异也可以通过差异蛋白质组学来发现。
Lumiprobe 3Dye 套件包含 Cyanine2、Cyanine3 和 Cyanine5 染料，它们的光谱不同，但迁移率匹配。因此，用这些染料标记的蛋白质在凝胶电泳中共同迁移。由于使用染料进行的蛋白质标记依赖于 NHS 酯化学，因此赖氨酸残基是标记的主要位点。
二维蛋白质组学的最佳实践意味着使用合并的内部对照样本，该样本本质上是在一个实验中分析的两个样本的混合物。内部对照样品用 Cyanine2 标记，分析样品用 Cyanine3 或 Cyanine5 标记（这两种染料可以互换）。
3Dye 试剂以 5 nmol、10 nmol 和 25 nmol 包装进行预先测量。染料被冻干以延长其保质期。每个包装在使用前均应用 DMF 重新配制。 DMF 质量对于实验和产品保质期至关重要。套件中的染料附带 DMF。
蛋白质混合物的制备是测定中变化最大、要求最高的部分。它超出了协议的范围，因为不同的样品需要非常不同的裂解条件才能获得适合检测的蛋白质混合物。本质上，被比较的两个样品应该在相同的条件下裂解以获得有意义的结果。一般来说，如果实验需要裂解，建议使用基于 CHAPS 的裂解溶液。
通过每 1 nmol 每种染料添加 1 μL DMF（来自试剂盒），制备每种染料的 1 mM 库存溶液。这些溶液在 -20°C 下可稳定保存三个月。为了确保保质期，在打开前将管干燥、全解冻，在关闭前尽可能用惰性气体吹扫。
使用无胺缓冲液（NaHCO3、醋酸盐）或 Tris 缓冲液将蛋白质混合物 pH 调节至 8.5。在单独的小瓶中，准备三个用于标记的蛋白质样品：(1) 第一个蛋白质样品，(2) 第二个蛋白质样品，以及 (3) 两者的混合物（合并的内部对照）。每个样品中的蛋白质浓度理想情况下应为 5–10 mg/mL，但也可以使用低至 1 mg/mL 的浓度。每次反应取 50 μg 蛋白质。
通过取等分的 1 mM 库存溶液并用 DMF 稀释至 0.4 mM 来制备染料工作溶液。
将 1 μL 工作染料溶液添加到反应混合物中：Cyanine3 表示未处理，Cyanine5 表示处理过（反之亦然），Cyanine2 表示合并的内部对照。通过移入和移出混合每个反应，并在黑暗中放置 30 分钟。
通过向每种溶液中添加 1 μL 10 mM 赖氨酸来停止反应（试剂盒中不包含该试剂，但该试剂很容易获得）。
合并三个样品并运行 2D 凝胶。
使用任何能够检测 Cyanine2、Cyanine3 和 Cyanine5 的成像仪进行分析。可以从凝胶上切下蛋白质斑点并通过质谱分析。
cortecnet的大肠杆菌蛋白表达简介
细菌中的蛋白质表达是迄今为止制备稳定同位素富集蛋白质样品的常用方法。大肠杆菌是表达重组蛋白常用的生物体，是一种培养时间短的宿主。大肠杆菌能够使用简单的分子技术进行直接的基因操作，并且细胞对氘表现出良好的耐受性，从而可以使用13 C、 15 N 和2 H
在厌氧条件下，大肠杆菌可以使用葡萄糖、乙酸盐和甘油作为其碳源以及铵盐作为其氮源来合成所有 20 种必需氨基酸。使用标记的基本介质试剂，例如氧化氘、 15 N 铵盐、 13 C 6、D 7或13 C 6 /D 7标记的葡萄糖，可以直接生产均匀标记的蛋白质样品。
使用相应的标记试剂获得均匀的标记
I SOGRO 是一种源自藻类裂解物的复杂粉末状丰富培养基，旨在增强细菌中的蛋白质表达。 ISOGRO 粉末具有13 C、 15 N 和2 H 标记的各种组合，可用作独立培养基或基本培养基的补充，以提高蛋白质产量。
A。 p38 生长的 SDS-PAGE。数据由美国大学化学/生物化学系 Jeffrey W. Peng 博士提供美国印第安纳州圣母院。 b. pLysS 中的心肌肌钙蛋白 cTnC(1-89)。细胞在 37°C 摇瓶中生长。红色曲线是 ISOGRO 补充的最小介质，黑色曲线是单独的最小介质。
如果使用大肠杆菌无法成功进行蛋白质表达，则可以考虑其他选择，例如昆虫细胞、哺乳动物细胞或无细胞表达系统。
简要描述：Nanoprobes免疫金标记用镍 (II) 硝基乙酸 (NTA) 螯合物功能化的1.8 nm 金颗粒。用于定位和检测蛋白质复合物、细胞或组织中的多组氨酸标签靶标。比抗体探针小。
详细介绍
产品咨询
| 品牌 | Nanoprobes | 供货周期 | 两周 |
|---|---|---|---|
| 应用领域 | 环保,化工,生物产业,能源 |
Nanoprobes免疫金标记
上海金畔生物代理Nanoprobes在中国的业务，Nanoprobes代理，Nanoprobes代理，Nanoprobes上海代理，Nanoprobes华南代理，Nanoprobes华东代理，Nanoprobes华西代理，Nanoprobes华北代理，上海金畔生物科技有限公司专业代理进口品牌实验产品，*，欲购从速（敬请咨询）
Nanoprobes成立于1990年,专门生产免疫金标记和免疫测定试验产品。主要为广大科研机构提供用于检测生物分子的灵敏的试剂和技术。NanoprobesNanoprobes公司的金标技术使用化学交联的金属簇和纳米颗粒作为标签。与胶体金颗粒静电吸附在抗体和蛋白质上的传统免疫金探针不同,Nanoprobes公司的金标是与生物分子在特定位点交联的不带电荷的分子,故其探针具有胶体金不具备的范围和灵活性。
通用性：在电子显微镜、光学显微镜和印迹中检测和定位带 His 标签的重组蛋白。
稳定和可溶：表面功能化和外壳赋予高稳定性和高溶解性，使 Ni-NTA-Nanogold ®与大多数系统兼容。
高分辨率：1.8 nm 直径的金颗粒为准确、精确的分子和大分子鉴定以及分离蛋白质复合物和大分子的超微结构研究提供高分辨率。
污渍不褪色。
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| 左：Ni-NTA-Nanogold ®的结构显示与与 His 标签蛋白的相互作用；右图：用 6x-His 标签克隆的来自腺病毒的旋钮蛋白，用 Ni-NTA-Nanogold 标记，从过量金中纯化的柱子，在扫描透射电子显微镜 (STEM) 中观察，未染色（全宽约 245 nm）。 |
银或金增强的情况下检测到 10 ng His-tagged ATF-1。黄金增强允许检测 0.5 ng，与大肠杆菌没有可见的结合。提取控制。
上海金畔生物科技有限公司，1.国内试剂耗材经销代理2.国外试剂的订购。可提供欧美实验室品牌的采购方案。3。提供加急物流处理，进口货物，最快交期1-2周。4.进出口货物代理服务。5.公司代理众多有名生命科学领域的研究试剂、仪器和实验室消耗品品牌：CELL DATA,Alamanda Polymers， cstti，Click Chemistry tools，Nanoprobes，Ancell，NANOCS，Ambeed, Inc，SPEED BioSystems, LLC，Tulip Biolabs, Inc，Torrey Pines Biolabs，magsphere ,FabGennix International ,paratechs，Medicago,Oraflow,CWE,Wasatch Photonics, alphananote, It4ip, proteoform, Caprico等,重点合作品牌 Lee Biosolutions,chematech,Nanopartz,denovix,Atto tec,macrocyclics等。质量保证，所有产品都提供售后服务。付款方式灵活。公司坚持“一站式”服务模式，为客户全面解决实验、生产、开发需求。公司整合国际与国内资源，加强网络建设，提高公司内部运作效率，为客户提供方便、快捷的服务。
公司突出创新思维，提高工作效能，减低运作成本，为客户提供优惠的价格。Nanoprobes免疫金标记。
FlexAble抗体标记试剂盒的工作原理
FlexAble 抗体标记是通过使用高亲和力、非共价 FlexLinker 来实现的。 FlexLinker 在几分钟内与抗体紧密结合，一旦结合就不会从抗体上释放。通过添加 FlexQuencher 可以中和未结合的 FlexLinker。
使用 FlexAble 的标记反应可产生均质、结构明确、功能齐全的抗体。标记过程中未观察到抗体聚集或损失。
FlexAble 标签套件可用于标记：
来自任何供应商的一抗
任何浓度的抗体
任何缓冲液配方中的抗体
FlexAble 抗体标记试剂盒已使用来自不同供应商的一抗进行了验证。低浓度一抗、储存在 50% 甘油中的抗体以及补充有 BSA 等载体的抗体均适合与 FlexAble 试剂盒一起使用。
FlexAble 抗体标记试剂盒适用于任何抗体制剂。使用高亲和力 FlexLinker 进行标记不受 BSA 或甘油、含胺缓冲液或防腐剂等稳定剂的影响。
FlexAble 抗体标记试剂盒适用于任何抗体制剂，无需在标记前纯化或缓冲液交换。这节省了时间和金钱，还避免了在这些过程中可能发生的抗体损失。由于 FlexAble 利用高亲和力 FlexLinker 分子与抗体进行位点特异性结合，因此结合反应不受 BSA 或甘油等载体、Tris 等含胺缓冲液等防腐剂的影响。
采用简单的两步方案，使用 FlexAble 标记抗体既快速又简单。该过程只需要大约 30 秒的操作时间，并且只需要一根移液器。将一抗、FlexLinker 和 FlexBuffer 混合在一起并孵育 5 分钟。添加 FlexQuencher 以中和未结合的 FlexLinker 并再次孵育 5 分钟。在给试管贴标签的时间内，抗体就可以使用了。
FlexAble 提供了简单的方法来多重使用同一物种和同种型的抗体。 FlexLinker 以高亲和力和特异性与一抗结合，一旦结合就不会从抗体上释放。因此，来自同一物种或同种型的抗体在用FlexAble标记后可以与样品同时孵育。尚未观察到与其他抗体同种型的泄漏或交叉结合。