上海金畔社生物科技有限公司日本同仁化学dojindo全线产品代理 中国代理商
C16H17Cl2N5
350.25
关联产品
实验工具|稀释计算器|摩尔浓度计算器
上海金畔社生物科技有限公司日本同仁化学dojindo全线产品代理 中国代理商
C16H17Cl2N5
350.25
关联产品
实验工具|稀释计算器|摩尔浓度计算器
上海金畔社生物科技有限公司日本同仁化学dojindo全线产品代理 中国代理商
C16H17Cl2N5
350.25
特点:
● 可用于流式细胞仪
● 活细胞核染色试剂
规格性状
规格
特性:该产物为黄色至微黄色的绿棕色粉末或固体,可溶于水和稀盐酸。
水溶性:试验成功
NMR光谱:试验成功
产品概述
荧光染料DAPI是一种可对DNA 染色的细胞核染色试剂,常用于细胞凋亡检测。DAPI是含有特定AT序列DNA的一种嵌入剂,它能像Hoechst染料一样粘附在DNA双螺旋的小沟区。尽管DAPI不能通过活细胞膜,但却能穿透扰乱的细胞膜而对细胞核染色。DAPI具有很高的光漂白承受水平,能用来检测酵母线粒体DNA,叶绿体DNA,病毒DNA,microplasm DNA以及染色体DNA。DAPI-DNA复合物的激发和发射波长分别为360 nm和460 nm。
荧光特性
λex=360 nm, λem=460 nm
操作说明
产品使用步骤
1.用PBS或适当的缓冲液制备10-50μMDAPI溶液。a)
2.在细胞培养基中加入体积为细胞培养基1/10的DAPI溶液。b)
3.将细胞在37℃下孵育10-20分钟。
4.用PBS或适当的缓冲液清洗细胞两次。
5.使用带有360 nm激发光和460 nm发射滤光片的荧光显微镜观察细胞。
a)由于DAPI可能致癌,因此在处理过程中必须格外小心。
b)或者您可以用1/10浓度的DAPI缓冲溶液代替培养基。
注意事项
制备DAPI储备溶液时要用水(难溶于PBS)。
但是,那些溶解在水中的物质不适合长期储存。
考虑长期存储时,请使用解决方案类型产品-Cellstain®-DAPI解决方案(代码:D523),以提高解决方案的稳定性。
文献
1) W.Schnedl,A.V.Mikelsaar,M.Breitenbach and O.Dann,”DIPI and DAPI: Fluorescence Banding with Only Negligible Fading”,Hum. Genet.,1977,36,167.
2) I.W.Taylor and B.K.Milthorpe,”An Evaluation of DNA Fluochromes, Staining Techniques, and Analysis for Flow Cytometry. I. Unperturebed Cellpopulations”,J.Histochem. Cytochem., 1980, 28(11), 1224.
3) F.Otto and K.G.Tsou,”A Comparative Study of DAPI,DIPI,and Hoechst 33258 and 33342 as Chromosomal DNA Stains”, Stain Technol.,1985, 60, 7.
4) N.Poulin, A.Harrison and B.Palcic,”Quantitative Precision of an Automated Image Cytometric System for the Measurement of DNA Content and Distribution in Cells Labeled with Fluorescent Nucleic Acid Stains”, Cytometry, 1994,16,227.
5)M.Kawai,N.Yamaguchi and M.Nasu,”Rapid Enumeration of Physiologically Active Bacteria in Purified Water Used in the Pharmaceutical Manufacturing Process”, J.Appl. Microbiol.,1999, 86 (3),496.
常见问题Q&A
Q1 核染色中所用染料的特征和区别是什么? |
A1:这里引入的染料具有通过与核酸相互作用而发出荧光或增加荧光强度的特性。 除荧光波长以外的差异如下。 [EB] 它没有碱基特异性,可与所有DNA和RNA结合。 它没有活细胞的膜通透性,并且可以染色死细胞。 [PI] 像EB一样,它没有基础特异性。它是一种更广泛使用的染料,因为插入时它的荧光强度比EB高。 它没有活细胞的膜通透性,并且可以染色死细胞。 [DAPI] 与双链小槽结合。它与腺嘌呤-胸苷簇具有高度结合。 它没有活细胞的膜通透性,并且可以染色死细胞。 [AO] 通过利用插入双链时和与单链磷酸结合时荧光波长不同的事实,可以在双链和单链之间进行区分。 它渗透到活细胞的细胞膜上。 [Hoechst33342,33258] 它与DNA的腺嘌呤胸苷部分特异性结合。 它是一种颜料,可以渗透到活细胞的细胞膜上并染色活细胞的DNA。 |
Q2:细胞染料的激发波长和发射波长是多少。 |
A2: |
Q3 如何使用DAPI进行核染色? |
A3:有以下使用情况报告示例。制备DAPI储备溶液时要用水(难溶于PBS)。 但是,那些溶解在水中的物质不适合长期储存。 对于长期存储,请使用解决方案类型产品-Cellstain®-DAPI解决方案(货号:D523),具有更高的解决方案稳定性。使用时,用缓冲液或有机溶剂将储备溶液稀释至所需浓度。 [使用DAPI进行细胞染色的示例] 包含实体瘤或簇的样品的DAPI染色示例(参考文献3) 1)用0.02%胰蛋白酶-EDTA处理,在37°C下孵育30分钟,以1,500 rpm离心5分钟,然后冲洗上清液。 2)在-20°C下用50%甲醇(也可以使用乙醇)固定后,以1,500 rpm离心5分钟以除去上清液。 3)在-20℃下用30%甲醇洗涤后,以1,500rpm离心5分钟以除去上清液。 4)用0.2 M磷酸盐缓冲液(pH 7.2)洗涤后,以1,500 rpm离心5分钟以除去上清液。 5)每106个细胞添加0.2 mL的RNase的0.2 M磷酸盐缓冲液(pH 7.2)(pH 7.2)(1 mg / mL),并在37°C下孵育30分钟。 6)用0.2 M磷酸盐缓冲液(pH 7.2)洗涤后,以1,500 rpm离心5分钟以除去上清液。 7)加入10 mL 1μg/ mL DAPI溶液,并在黑暗中于4°C染色2小时。 [使用DAPI进行细胞染色的例子] Vollenweider等人在磷酸化因子激活的杀伤(LAK)细胞的细胞增殖试验中。 使用荧光打印机执行DAPI染色并进行测量(参考2)。 那时,请使用0.1 mg / mL的水溶液和1μg/ mL的甲醇溶液。 使用每孔100μL进行荧光染色。 |
上海金畔社生物科技有限公司日本同仁化学dojindo全线产品代理 中国代理商
C16H17Cl2N5
350.25
关联产品
实验工具|稀释计算器|摩尔浓度计算器
DAPI Fluoromount-GTM 抗荧光淬灭封片剂(含DAPI,水溶性)
货号: MM1402-5ML 品牌: Jinpan 标签: 免疫学
DAPI Fluoromount-GTM 抗荧光淬灭封片剂(含DAPI,水溶性)
产品信息
产品名称 |
产品编号 | 规格 | 价格(元) |
DAPI Fluoromount-GTM 抗荧光淬灭封片剂(含DAPI,水溶性) |
MM1402-5ML | 5ml |
255 |
DAPI Fluoromount-GTM 抗荧光淬灭封片剂(含DAPI,水溶性) | MM1402-25ML | 5ml |
885 |
【温馨提示】:见抗荧光淬灭封片剂(Antifade Mounting Medium)产品专题,了解更多精彩内容。
产品描述
DAPI Fluoromount-GTM是一种水溶性、含蓝色细胞核荧光探针DAPI的封片剂,用来对最后一步染色为水溶液体系的玻片样本进行封片,同时还能完成对细胞核的复染,可以明显降低荧光显微镜下玻片样本分析中的荧光淬灭现象。DAPI Fluoromount-GTM产生半永久封固性,从而延长玻片样本在2-8℃的保存周期。本封片剂适用于细胞涂片/爬片和组织切片的封片,与免疫荧光、免疫细胞化学、免疫组化等实验兼容。
本品以1×储存液的形式提供,室温避光稳定保存。直接滴加一滴到样本上,盖上盖玻片即可,同时实现核染和封片,使用非常方便。
保存与运输方法
保存:室温保存,一年有效。
运输:室温运输。
使用方法
1) 根据已建立体系制备细胞离心涂片;
2) 固定和再水化细胞涂片,用PBS缓冲液,重复操作3次;
3) 从水溶性缓冲液中取出一片玻片,直接滴加一滴DAPI Fluoromount-GTM,盖上盖玻片,用无纺纱布轻轻按压盖玻片以去除多余分封片剂和封固盖玻片。
4)室温下避光晾干封片剂至少5min,再进行普通荧光显微镜或者共聚焦显微检测。
5)若样本需长久保存,使用指甲油对盖玻片四周进行密封。
注意事项
1)DAPI Fluoromount-GTM含0.1%叠氮钠用作防腐剂。操作过程中请避免与皮肤、眼睛与衣物直接接触,需佩戴防护眼罩和面罩。
2)Fluoromount-GTM是Southern Biotechnology公司的注册商标。
应用示例
图1:BALB/c小鼠肠冰冻切片用生物素标记的大鼠抗小鼠MAdCAM-1标记,之后用FITC-链霉亲和素检测。切片用DAPI-Fluoromount-G (Cat. MM1402-5ML)封固。
图2:E15.5胎鼠脑冰冻切片用anti-HMGB2标记,之后用Rhodamine Red ™-X偶联二抗检测。切片用DAPI-Fluoromount-G (Cat. MM1402-5ML)封固。
图3:人肿瘤相关的成纤维细胞经18 Gy曝光处理120h后,先后用anti-vinculin和AF488标记二抗检测,再用DAPI-Fluoromount-G (Cat. MM1402-5ML)封固。
图4:人关节软骨细胞先后用anti-collagen II和AF594二抗检测,之后用DAPI-Fluoromount-G (Cat. MM1402-5ML)封固。
品牌: |
Jinpan |
---|---|
CAS: |
N/A |
规格: |
5ml |
货期: |
咨询客服 |
产品货号:A1001
性状:固体(无水)
产品规格:
货号 |
名称 |
规格 |
A1001,0010 |
DAPI BioChemica |
10mg |
A1001,0025 |
DAPI BioChemica |
25mg |
A1001,0100 |
DAPI BioChemica |
100mg |
产品简介:
DAPI即4′,6-Diamidino-2-Phenylindole Dihydrochloride ; 也称:DAPI dihydrochloride
分子式为:C16H15N5 · 2HCl ,分子量为350.25 g/mol
CAS Number 28718-90-3
DAPI染色原理:
DAPI是一种可以穿透细胞膜的蓝色荧光染料。其发散光的波长范围含盖了蓝色至青绿色。和双链DNA结合后可以产生比DAPI自身强20多倍的荧光。和EB(ethidium bromide)相比,对双链DNA的染色灵敏度要高很多倍。DAPI也可以和RNA结合,但产生的荧光强度不及与DNA结合的结果,其发散光的波长范围约在400nm左右。
DAPI的发散光为蓝色,且DAPI和绿色荧光蛋白(Green fluorescent protein, GFP)或Texas Red染剂(红色荧光染剂)的发散波长,仅有少部分重叠,研究员可以善用这项特性在单一的样品上进行多重荧光染色。
DAPI能快速进入活细胞中与DNA结合,因此DAPI对生物体而言,也被视为一种毒性物质与致癌物。使用过程中应注意操作与抛弃的处理程序。
DAPI染色常用于细胞凋亡检测,染色后用荧光显微镜观察或流式细胞仪检测。
DAPI也常用于普通的细胞核染色以及某些特定情况下的双链DNA染色。DAPI的较大激发波长为340nm,较大发射波长为488nm;
DAPI和双链DNA结合后,较大激发波长为223nm;261nm;342nm。
最小激发波长:246nm,282nm。
DAPI溶液用水配制。用于细胞核染色时,推荐的DAPI工作浓度为:0.5-10μg/ml
包装 : DAPI 及产品说明书一份
保存条件:2-8℃避光保存,效期:10-13个月。
注意事项:
DAPI对人体有一定刺激性,请注意适当防护。
荧光染料都存在淬灭的问题,建议染色后尽量当天完成检测。
为减缓荧光淬灭可以使用抗荧光淬灭封片液。抗荧光淬灭封灭剂。可以向上海金畔生物科技有限公司订购。订购热线021-50837765.
为了您的安全和健康,请穿实验服并戴一次性手套操作。