jembio:DNA 连接酶(大肠杆菌)


jembio:DNA 连接酶(大肠杆菌)

简要描述:DNA 连接酶(大肠杆菌) DNA 连接酶(大肠杆菌)催化双链 DNA 中并置的 5′ 磷酸盐和 3′ 羟基粘性末端之间磷酸二酯键的形成。 jembio:DNA 连接酶(大肠杆菌)

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jembio:DNA 连接酶(大肠杆菌)

DNA 连接酶(大肠杆菌)   DNA 连接酶(大肠杆菌)催化双链 DNA 中并置的 5' 磷酸盐和 3' 羟基粘性末端之间磷酸二酯键的形成。  

 描述:

 • 催化具有粘性末端的双链DNA 片段之间磷酸二酯键的形成。 

• 5'-磷酰基与相邻的3'-羟基的缩合与NAD+的水解相结合。

 • 适用于全长cDNA 的高效克隆(1, 2)。 

单位定义:1 个单位定义为 lambda DNA 的 Hind III 片段产生 50% 连接所需的酶量。在 20 µl 检测混合物中于 16°C 下孵育,DNA 末端浓度为 0.02 µM (50 µg/ml)。  储存条件:储存于-20oC。   反应缓冲液:30 mM Tris-HCl(22°C 时 pH 8.0)、1 mM 二硫苏糖醇、4 mM MgCl2、26 µM NAD+、50 µg/ml 牛血清白蛋白。 最佳连接温度为 16°C。   

储存缓冲液:10 mM Tris-HCl(22°C 时 pH 7.4)、50 mM KCl、0.1 mM EDTA、10 mM 硫酸铵、1 mM 二硫苏糖醇和 50% (v/v) 甘油。   

质量控制:所有制剂均经过核酸内切酶和核酸外切酶污染活性测试,以及连接反应中的功能测试。 连接测定条件:30 mM Tris-HCl(22°C 时 pH 8.0)、4 mM MgCl2、1.2 mM EDTA、1 mM 二硫苏糖醇、0.026 mM NAD+、50 µg/ml 牛血清白蛋白和 lambda DNA 的 Hind III 片段。 16°C 孵育 30 分钟。  

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avidity:BirA 生物素蛋白连接酶


avidity:BirA 生物素蛋白连接酶

简要描述:BirA 生物素蛋白连接酶 (EC 6.3.4.15) 激活生物素形成生物素 5′-腺苷酸,并将生物素转移至生物素接受蛋白(例如 AviTag™ 肽)。avidity:BirA 生物素蛋白连接酶

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avidity:BirA 生物素蛋白连接酶

BirA 生物素蛋白连接酶 (EC 6.3.4.15) 激活生物素形成生物素 5'-腺苷酸,并将生物素转移至生物素接受蛋白(例如 AviTag™ 肽)。它还充当生物素操纵子阻遏物。该蛋白质由 birA 基因编码。

请注意:我们强烈建议使用 AviTag™ 氨基酸序列,而不是其他生物素化肽序列。 BirA 酶对 AviTag™ 序列进行生物素化,其反应速率是天然底物 (BCCP) 的 2 倍,比使用的其他肽序列高一个数量级或更高。与其他肽生物素化序列相比,AviTag™ 需要更少量的酶和更短的孵育时间,从而最大限度地减少与蛋白酶和蛋白质不稳定性相关的辅助问题。

产品信息

套件随附以下内容:

  • 两 (2) 瓶 20uL,每瓶 1mg/mL BirA 生物素蛋白连接酶(总共 40ug)

  • 两 (2) 瓶每瓶 1.5mL BiomixA(0.5M 二甘氨酸缓冲溶液,pH 8.3)

  • 两 (2) 瓶每瓶 1.5mL BiomixB(100mM ATP、100mM Mg(OAc)2、500uM d-生物素)

  • 两 (2) 瓶 1.5mL,每瓶额外 BIO-200(500uM d-生物素)

BirA 生物素蛋白连接酶 (EC 6.3.4.15) 通过 ATP 中间体(生物素 5'-腺苷酸)以高效和靶向的方式将 d-生物素共价添加到生物素受体肽/蛋白上。酶促生物素化蛋白质的下游应用多种多样、重要且强大。生物素-亲和素/链霉亲和素相互作用通常用于亲和层析或表面或基质上的蛋白质固定。通过抗生物素抗体或亲和素/链霉亲和素-报告酶缀合物(-HRP、-碱性磷酸酶)或荧光探针进行蛋白质检测成为可能。生物素化 MHC 分子的多聚体形式是免疫生物学中常用的工具。

当与我们的 AviTag™ 生物素受体肽氨基酸序列结合使用时,生物素化发生率是天然大肠杆菌 BCCP 底物的两倍,比其他生物素化肽序列高出一个数量级或更多。因此,与其他可用序列相比,AviTag™ 序列需要更少的 BirA 酶和更短的孵育时间来完成生物素化。如果蛋白质不稳定性或蛋白酶活性是一个问题,这可能对下游的成功很重要。

我们的 BirA 酶是大肠杆菌野生型,由 birA 基因编码,并通过传统方法纯化至 99% 以上的纯度。该酶的其他名称包括:生物素连接酶;生物素操纵子阻遏蛋白;比尔A;生物素全酶合成酶;生物素-[乙酰辅酶A羧化酶]合成酶;生物素-[乙酰辅酶A-羧化酶]连接酶;生物素-[乙酰辅酶A羧化酶]合成酶;乙酰辅酶A全羧化酶合成酶;乙酰辅酶A全羧化酶合成酶;生物素:脱辅基羧化酶连接酶;生物素全酶合成酶。

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PROTACs简介

PROTACs简介

PROTACs 技术是一种使用泛素蛋白酶系统 (USP) 靶向特定蛋白质并诱导其在细胞中降解的策略。如图 1 所示,PROTACs 是一种异双功能分子。它包含两种不同的配体,一种是E3泛素连接酶的相应配体,另一种是与目的蛋白(POI)结合的配体。两个配体通过连接体连接形成聚合物:POI配体-连接体-E3连接酶配体。

PROTACs简介

PROTACs简介

PROTAC诱导的蛋白质降解机制如图2所示。进入细胞后,PROTAC分子将POI与E3连接酶结合形成三元复合物,诱导E3连接酶泛素化靶蛋白,并触发降解过程。

PROTACs简介

PROTACs技术的优势

预计PROTACs将克服耐药性

PROTACs无需长期结合即可降解靶蛋白并将其全清除,因此可以有效克服小分子靶向药物的耐药性。

PROTAC 可以提高选择性

通过PROTACs技术可以将泛抑制剂转化为选择性降解剂,从而有效提高选择性和效率。

PROTACs 具有降解不可成药靶标的巨大潜力

市售药物作用于一个或多个特定靶点。统计数据显示,可作为药物治疗的已开发靶点仅占总量的20%,高达80%的蛋白质靶点无法通过传统开发方法进行干预。PROTACs直接介导靶蛋白的降解,因此具有更广泛的作用范围,可以作用于不可成药的靶标。

疗效比其他类型的药物持续时间更长

通常,PROTACs可以被回收并再次使用,除了PROTACs通过共价键与POI结合。因此,它比其他类型的药物具有更长的有效性。