近年来，改进的重组腺病毒载体在基因治疗上迅速流行，因为他们没有免疫原性，宿主范围光，并可实现长期的转基因表达。在宿主细胞扩增之后的腺病毒纯化是一个关键的步骤。当表达载体在辅助载体的帮助下去感染包装细胞系，并产生重组的腺病毒颗粒后，一些病毒颗粒会裂解细胞并释放到培养液上清中，还有一些仍然会保留在细胞里，因此需要对上清及细胞进行处理和纯化以获得纯的感染性腺病毒颗粒。

常规的腺病毒纯化一般采用CsCl超速密度离心法（利用不同大分子，如DNA、蛋白、病毒颗粒、细胞碎片等具有不同的密度进行梯度离心而分离出来的原理）分离病毒颗粒，但是耗时耗力。Cell Biolabs的大部分纯化试剂盒都采用了新颖的专利ViraBind™技术，力求使用最前沿的技术为客户提供最完美的解决方案。Cell Biolabs为腺病毒纯化提供了两种不同的纯化方案，一种使用离心柱，一种是注射器样的透析柱（注：腺病毒纯化均未采用Matrix胶吸附，而是采用了新型的纯化装置，因此操作时间上只需要30分钟），常规离心即可。

其中小提（Miniprep）试剂盒，即离心柱式纯化如下，Kit包括以下4个组分：收集管收集柱、Loading缓冲液、洗液、洗脱液。无需超速离心，只通过一般实验室的常规离心（2000g）小提腺病毒。超过90%的回收率，但是只需要30min即可完成，一次可以提纯T75培养瓶或10cm培养皿内的感染细胞，最多可获得1×10¹¹个病毒颗粒，可进行10次提取。

还有一种是注射器式滤器纯化，又可分为中提和大提系列，每次分别可以用来纯化获得2.5×10¹²和2.5×10¹³病毒颗粒（大概相当于40和400个T75培养瓶的感染细胞），分别能进行10次和1次纯化；回收效率很高，超过90%。Kit内包括纯化滤器、洗液、洗脱液、再生液共4样组分，该Kit与上述Miniprep小提Kit基本类似，只不过是使用了注射器样的滤器装置用于更快速和大量的纯化，无需离心。整个操作只需要30分钟，无需离心设备。

美国著名细胞学试剂专家Cell BioLabs为您提供全套的腺病毒技术解决方案，RAPAD®腺病毒表达系统有多种样式供您选择，还有预装有多种重组基因的腺病毒供您直接使用，ViraBind™腺病毒小提及中提大提试剂盒采用了专利技术能让你获得更高滴度和纯度的腺病毒，Cell BioLabs还有转为腺病毒载体用的293AD细胞及高效转染试剂供您选择，如果您对腺病毒产品感兴趣，请致电021-50837765到上海金畔生物科技有限公司垂询腺病毒相关的实验解决方案，或索取最新的Cell BioLabs产品资料。

通过对腺病毒基因组的改造，腺病毒载体是继逆转录病毒载体后被广泛应用的转基因载体，现已发展到第三代，转染效率高，且相对制备容易。从最早的腺病毒载体出现至今，腺病毒载体的包装系统已经经历了一系列的改进。腺病毒载体已经被广泛应用于动物细胞的基因转染和基因治疗等。

在腺病毒的应用过程中，我们经常需要测量病毒液的病毒含量以及腺病毒滴度。目前实验里做腺病毒常规滴度检测有通过TCID50或者空斑计数法（PFU）测量腺病毒感染滴度的方法，但是这种传统的方法实验周期较长，操作繁琐。如常规PFU的检测就就需要10天左右的时间。Cell BioLabs的QuickTiter™腺病毒功能滴定试剂盒，采用免疫蛋白反应的原理检测腺病毒标志性外壳蛋白——Hexon的表达含量，从而得到腺病毒液的功能滴度，只需2天多的时间就能获得比常规实验所需要10天的测量结果还要准确的数据。但是即使是这样的方法，也需耗时2天，一般说来，如果已经获得了纯化的病毒液，通过测量OD260来估算病毒颗粒的总含量不失为一种快捷的多的腺病毒定量方案。

上海金畔生物科技有限公司针对腺病毒定量为您推荐美国细胞生物学专业产品制造商Cell BioLabs的QuickTiter™ Adenovirus Rapid Quantitation Kit（目录号：VPK-106）。该试剂盒的工作原理如右图所示，首先使用核酸酶将病毒悬液内的核算分子降解，然后用特异性的腺病毒捕获珠子结合腺病毒，从而分离出蛋白核酸复合物，洗脱下腺病毒后进一步降解，然后标记其病毒核酸，通过480/520 nm滤镜荧光仪下读取数据，对照腺病毒DNA标准曲线得出腺病毒滴度。

Cell BioLabs腺病毒快速定量试剂盒内包括溶液A、溶液B、溶液C、腺病毒捕获液、Dye染料以及腺病毒DNA标准物。该试剂盒不仅能直接用于已纯化的病毒悬液，对于未纯化的腺病毒，该试剂提供快速纯化试剂，您可以在纯化前通过该kit测算出病毒悬液上清中的腺病毒含量，也可以使用该Kit内的纯化试剂先进行纯化步骤。整个腺病毒定量步骤快捷，可以在45-60min内获得数据，检测灵敏。

另外，该定量试剂盒不仅能应用于腺病毒，由于是通过OD260测量核酸含量从而通过与标准曲线的比对得出腺病毒的含量，因此还能应用于其他的病毒定量。如反转录病毒，慢病毒等。 

Cell BioLabs为您提供全套的腺病毒技术解决方案，RAPAD®腺病毒表达系统有多种样式供您选择，还有预装有多种重组基因的腺病毒供您直接使用，ViraBind™腺病毒小提及中提大提试剂盒采用了专利技术能让你获得更高滴度和纯度的腺病毒，Cell BioLabs还有转为腺病毒载体用的293AD细胞及高效转染试剂供您选择，如果您对腺病毒产品感兴趣，请致电021-50837765到上海金畔生物科技有限公司垂询腺病毒相关的实验解决方案，或索取最新的Cell BioLabs产品资料。

常用的基因转染技术是将外源基因导入靶细胞需要一定的载体和导入方法，就哺乳动物细胞的基因转染技术，从初期的磷酸钙转染和电转染，发展到脂质体转染技术，但脂质体对于不再分裂，或处于细胞周期后阶段的细胞，或许多原代培养细胞等不能达到有效的转染效率。

而病毒介导基因转移则很好的解决了细胞转染的问题。作为基因转染的载体之一，腺病毒转染效率及感染滴度都比较高，并且外源基因的表达水平也比传统的转染方法高。并且腺病毒具有病毒颗粒比较稳定,可以纯化和浓缩、可感染非分裂细胞、无随机插入的危险性,宿主范围广的特点。考虑到重组腺病毒的制备程序，Cell BioLabs专门为您制备了预装有多种基因的重组腺病毒，有近200多种外源基因重组腺病毒供您选择。

根据基因的种类，Cell Biolabs预装基因的重组腺病毒主要包括以下类型的基因：对照及报告基因（Controler and Reporter Genes）、NFΚB信号通路相关基因（NFΚB Signaling）、细胞骨架调控相关基因（Cytoskeleton Regulation）、MAP激酶信号通路基因（MAP Kinase Signaling）、细胞周期相关基因（Cell Cycle）、血管生成相关（Angiogenesis）、肿瘤抗原基因（Tumor Antigens）、酪氨酸激酶及PKC通路（Tyrosin Kinase and PKCs）等。

每个Cell Biolabs预装基因的重组腺病毒试剂包含有50ul病毒液，共有5×10⁹个腺病毒颗粒溶于10%甘油的TBS溶液里，浓度大约为1×10¹¹病毒颗粒/ml，可以直接用于您的实验。如果您对预装基因的重组腺病毒产品感兴趣，请致电垂询更详细的预转基因产品信息。

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常用的基因转染技术是将外源基因导入靶细胞需要一定的载体和导入方法，基因转技术则是将纯化的含有靶基因的质粒DNA送入细胞内，并在细胞内表达。转染方法有多种，主要有化学方法如磷酸钙转染、电转染和脂质体转染及生物方法病毒介导基因转移。物理和化学方法转染效率低，而脂质体对于不再分裂，或处于细胞周期后阶段的细胞，或许多原代培养细胞等，如神经细胞，内皮细胞，心肌细胞等等，不能达到有效的转染效率。相反，腺病毒转染效率高。作为基因转染的载体之一，腺病毒具有病毒颗粒比较稳定,可以纯化和浓缩、可感染非分裂细胞、无随机插入的危险性,宿主范围广的特点。

但腺病毒并非对所有细胞的感染效率均令人满意。腺病毒要进入细胞,需先细胞表面的柯萨奇病毒和腺病毒受体（CAR）结合,继后在α-整合素介导下被细胞内吞。腺病毒对一些特定细胞的感染受到限制,可能就是由于这些细胞表面缺乏受体和整合素。

上海金畔生物科技有限公司针对上述腺病毒转染中遇到的问题向您推荐Cell BioLabs的ViraDuctin™腺病毒转染试剂（目录号：AD-200/AD-201），由于使用了专利技术，该转染试剂不依赖于CAR的水平，并且比依赖于CAR的常规转染效率要高最多达12倍，甚至能转染一些腺病毒无法转染的细胞，如造血细胞和干细胞。该转染试剂不但能提高转染的效率，而且还同时提高基因转导进细胞后的表达效率！

ViraDuctin™的增强高效腺病毒转染。 100,000个NIH3T3细胞种植到6孔板上过夜培养，加入50 MOI重组β-Gal慢病毒 (目录号：ADV-002)，使用ViraDuctin™腺病毒转染试剂转染NIH3T3细胞，转染48小时后，使用X-gal染色显微镜下观察，左边为不使用ViraDuctin™腺病毒转染试剂对照。

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基因免疫和治疗是将外源目的基因转移到机体内，表达具有生物学功能的蛋白，达到免疫预防或治疗的目的。病毒载体是常用的基因导入方式之一。腺病毒载体(Adenovirus vector，Adv)、反转录病毒载体、腺病毒伴随病毒载体、单纯疱疹病毒载体、痘苗病毒载体和牛乳头瘤病毒载体等是基因免疫和治疗研究中应用较多的载体。目前，基因治疗临床试验的40%都采用腺病毒载体。

重组腺病毒在科学研究和治疗应用领域都具有很大的潜力。同时作为作为基因转移工具相对于其他病毒载体有多方面的优势。腺病毒可感染分裂细胞和非分裂细胞，转导细胞种类多，如肺细胞、肝细胞、骨细胞、血管、肌肉、脑、中枢神经系统等。其感染细胞滴度和外源基因的表达水平较高，因此重组腺病毒被广泛应用于使用脂质体转染效率较低细胞的基因转导和蛋白表达。当腺病毒进入细胞后，病毒不与染色体发生重组重排，因此不会导致宿主细胞基因的激活和失活。最近，重组腺病毒也被应用于递送RNAi到细胞内。

目前比较成熟的制备重组腺病毒的方法主要有两种，第一种是在腺病毒包装细胞系里，通过包含有目的基因的穿梭载体和含有腺病毒骨架质粒载体（E1/E3功能限制型）之间的同源重组重组，然后使用多蚀斑分离方法分离出目的重组腺病毒，这种方法耗时耗力，一般需要12-18周的时间。第二种是使用pAdEasy系统，通过在大肠杆菌E.coli中的双同源重组功能，同源重组目的基因的穿梭载体和把含有腺病毒骨架质粒载体从而得到重组腺病毒，该方案具有很高的保真性，但是由于需要筛选大量的细胞克隆，虽然比第一种方法省略了一些操作步骤，但是也是较为费时的，整个程序约需要8-9周。

针对以上腺病毒表达系统的不足，Cell Biolabs的RAPAd®腺病毒表达系统提供了一个更快更安全的产生无RCA，且高滴度的重组腺病毒方案。该系统使用了全新的腺病毒骨架基因（缺失左侧ITR、包装信号和E1序列），无需进行pAdEasy的细菌体内的同源重组步骤，无需使用多蚀斑分离方法分离目的重组腺病毒的步骤，因此不管是操作上还是时间上都进行了很大的提升。该腺病毒表达系统较其他系统生长更快，只需要2周时间；并且大大降低了重组形成野生型可复制腺病毒的危险，无E1a，不产生复制型腺病毒。

通过RAPAd®腺病毒表达系统产生的重组腺病毒。PacI线性化的pacAd5 RSV-GFP载体和pacAd5 9.2-100载体共转染293细胞后，用倒置荧光显微镜观察到转染后病毒颗粒的位置。

Cell Biolabs的RAPAd®腺病毒表达系统更易实验室人员的使用，操作方法简捷，很容易上手，并且由于对腺病毒骨架载体和穿梭载体都进行了优化，在共转染直到从病毒颗粒中分离过程中都大大简化，同时保证了高效的感染滴度。另外，在Cell Biolabs的RAPAd®腺病毒表达系统中，具有三种启动子模式供您选择。有不含有启动子的，您可以用来表达特异性启动子引导的基因，还有真核基因表达启动子RSV和强力启动子CMV供您选择。

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