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逆转录病毒克隆载体-重组反转录病毒表达载体

发表于由

逆转录（也成为反转录病毒，Retrovirus）病毒载体是常用的病毒载体之一。反转录病毒载体在构建时，删去了pol、env基因和gag基因的3′端，但保留了病毒颗粒所需的ψ+序列。其目的是在于提高载体的安全性，防止反转录病毒进入宿主细胞后进行增殖并包装成病毒颗粒对宿主细胞造成可能的伤害。这样，反转录病毒载体就可利

Vector Names Catalog Number
pBABEhygro RTV-001-HYGRO
pBABEneo RTV-001-NEO
pBABEpuro RTV-001-PURO
pMCs-IRES-GFP RTV-040
pMCs-Puro RTV-041
pMXs RTV-010
pMXs-IRES-Blasticidin RTV-016
pMXs-IRES-GFP RTV-013
pMXs-IRES-Neo RTV-015
pMXs-IRES-Puro RTV-014
pMXs-Neo RTV-011
pMXs-Puro RTV-012
pMYs RTV-020
pMYs-IRES-GFP RTV-021
pMYs-IRES-Neo RTV-023
pMYs-IRES-Puro RTV-022
pMYs-Puro RTV-024
pMZs RTV-030

用这些外壳蛋白包装成病毒颗粒在辅助细胞系内大量扩增。反转录病毒载体可以容纳外源DNA的长度在10 kb左右，以很高的转染率感染宿主细胞，特别是分裂中的细胞。转入宿主的细胞后，反转录病毒载体随机整合到宿主细胞基因组内，这种载体还在不断改进之中。

逆转录表达载体种类较多，根据其基本载体骨架分为pBABE、pMCs、pMXs、pMYx等，又有不同筛选标记，hygro（潮霉素）、neo（新霉素）、puro（嘌呤霉素）、Blasticidin（杀稻瘟素）等。很多逆转录病逆转录病毒克隆载体-重组反转录病毒表达载体毒载体包括pBABE和pMXs都是基于莫洛尼鼠白血病病毒 (MMLV)，这种逆转录病毒载体在一些非成熟细胞里面被沉默表达，如胚胎瘤细胞、胚胎干细胞和造血干细胞，因此适应面受到限制。而骨髓瘤病毒(MPSV)和PCC4细胞来源的骨髓瘤病毒(PCMV)是MMLV的变种，能很好的在上述非成熟细胞内稳定表达。

Cell Biolabs的pMCs 、pMYs和pMZs都在MMLV启动子的基础上又加上了PCMV或MPSV启动子，后者能使逆转录病毒在EC肿瘤干细胞和ES胚胎干细胞内更稳定表达。特别的，pMYs系统更适合于造血干细胞中的外源基因表达，pMC则更适合在EC和ES细胞内使用。

美国著名细胞产品公司Cell BioLabs为逆转录病毒研究人员提供完备的重组逆转录病毒表达系统及其相关产品和服务，产品包括逆转录病毒的最新一代表达系统，针对逆转录病毒滴度低的软肋而专门设计的逆转录病毒浓缩纯化试剂盒，逆转录病毒的快速定量，以及逆转录病毒高效转染试剂和用于包装重组逆转录病毒的包装细胞系等，几乎覆盖反转录病毒研究中的所有技术环节。如果您对上述逆转录病毒包装细胞系感兴趣，请请致电021-50837765到上海金畔生物科技有限公司垂询相关的实验解决方案，或索取最新的Cell BioLabs产品资料。

逆转录病毒表达载体—Cell Biolabs重组逆转录病毒克隆载体

发表于由

逆转录病毒载体是常用的病毒载体之一。转入宿主的细胞后，反转录病毒载体随即整合到宿主细胞基因组内，这种整合的位点是随机的。逆转录病毒载体就可利用这些外壳蛋白包装成病毒颗粒在辅助细胞系内大量扩增。反转录病毒载体可以容纳外源DNA的长度在10 kb左右，以很高的转染率感染宿主细胞，特别是分裂中的细胞。

产品名称 货号（点击查看说明书）
pBABEhygro RTV-001-HYGRO
pBABEneo RTV-001-NEO
pBABEpuro RTV-001-PURO
pMCs-GFP RTV-051
pMCs-IRES-GFP RTV-040
pMCs-Puro RTV-041
pMXs RTV-010
pMXs-IRES-Blasticidin RTV-016
pMXs-IRES-GFP RTV-013
pMXs-IRES-Neo RTV-015
pMXs-IRES-Puro RTV-014
pMXs-Neo RTV-011
pMXs-Puro RTV-012
pMYs RTV-020
pMYx-GFP RTV-052
pMYx-IRES-GFP RTV-021
pMYs-IRES-Neo RTV-023
pMYs-IRES-Puro RTV-022
pMYs-Puro RTV-024
pMZs RTV-030

逆转录病毒是一类正链RNA病毒，其分为顺式功能基因和反式功能基因。由于逆转录病毒包膜上有env 编码的糖蛋白能被许多哺乳动物细胞膜上特异性受体所识别，并能介导逆转录病毒的遗传物质高效地进入宿主细胞内；同时逆转录病毒结构基因gag env 和pol的缺乏不影响其他部分的活性，因此可用外源性基因代替这部分病毒基因，外源性基因较大容量为8.0kb左右，可适用于大部分目的基因；并且病毒在自身表达的整合酶催化作用下可高效地整合入宿主细胞染色体中，这有利于外源基因在宿主细胞的永久表达。

目前较常用的逆转录病毒载体为Moloney小鼠白血病病毒改建的各类逆转录病毒载体，逆转录病毒载体其他部分为细菌质粒pBR322基因，便于病毒载体体外大量扩增。Cell Biolabs提供几十种逆转录病毒表达载体。根据其根据其基本载体骨架分为pBABE、pMCs、pMXs、pMYx等；又有不同筛选标记供选择，hygro（潮霉素）、neo（新霉素）、puro（嘌呤霉素）、Blasticidin（杀稻瘟素）等。

Cell Biolabs的逆转录病毒载体pBABE和pMXs都是基于莫洛尼鼠白血病病毒 (MMLV)，这种逆转录病毒载体在一些非成熟细胞里面被沉默表达，如胚胎瘤细胞、胚胎干细胞和造血干细胞，因此适应面受到限制。而骨髓瘤病毒(MPSV)和PCC4细胞来源的骨髓瘤病毒(PCMV)是MMLV的变种，能很好的在上述非成熟细胞内稳定表达。Cell Biolabs的pMYXs、pMYs、pMCs和pMZs都在MMLV启动子的基础上又加上了PCMV或MPSV启动子，后者能使逆转录病毒在EC和ES细胞内更稳定表达。特别的，pMYs系统更适合于造血干细胞中的外源基因表达，pMC则更适合在EC肿瘤干细胞和ES胚胎干细胞内使用。

逆转录病毒表达载体—Cell Biolabs重组逆转录病毒克隆载体

美国著名细胞产品公司Cell BioLabs为逆转录病毒研究人员提供完备的重组逆转录病毒表达系统及其相关产品和服务，产品包括逆转录病毒的最新一代表达系统，针对逆转录病毒滴度低的软肋而专门设计的逆转录病毒浓缩纯化试剂盒，逆转录病毒的快速定量，以及逆转录病毒高效转染试剂和用于包装重组逆转录病毒的包装细胞系等，几乎覆盖反转录病毒研究中的所有技术环节。如果您对上述逆转录病毒包装细胞系感兴趣，请致电021-50837765到上海金畔生物科技有限公司垂询相关的实验解决方案，或索取最新的Cell BioLabs产品资料。

逆转录病毒包装细胞系—铂金版Plat-E/Plat-A/Plat-GP系列

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逆转录（也成为反转录病毒，Retrovirus）病毒载体是常用的病毒载体之一。转入宿主的细胞后，反转录病毒载体随即整合到宿主细胞基因组内，这种整合的位点是随机的。反转录病毒载体就可利用这些外壳蛋白包装成病毒颗粒在辅助细胞系内大量扩增。反转录病毒载体可以容纳外源DNA的长度在10 kb左右，以很高的转染率感染宿主细胞，特别是分裂中的细胞。

逆转录病毒通过整合进目的细胞基因组，能实现持久的表达，而且几乎没有免疫原性，因此很受欢迎。特别是和腺病毒相比，其能整合进基因组的优势导致逆转录病毒也被广泛应用，然后逆转录病毒系统也存在一定的缺陷，首先是安全性比较低，因为所有包装所需的基因都放到一个载体上，还有就是基因能整合进目的细胞也可能会导致细胞基因组的紊乱，而且其滴度比较低。由于逆转录病毒表达系统的特殊性，其包装细胞的种类较多，表达载体的种类也较多，因此需要根据不同的实际来选择合适的表达系统。Cell Biolabs的逆转录病毒表达产品包括包装细胞系、表达系统（同时包括了包装细胞和表达质粒载体）、逆转录病毒表达质粒以及插入了目的基因的重组逆转录病毒表达质粒。

逆转录病毒包装细胞系—铂金版Plat-E/Plat-A/Plat-GP系列Cell Biolabs提供三种铂金版逆转录病毒包装细胞系：单嗜性（Ecotropic）Plat-E包装细胞系、双嗜性（Amphotropic）Plat-A包装细胞系及泛嗜性（Pantropic）Plat-GP包装细胞系。它们对不同的细胞具有不同的侵染性。

Plat-E包装细胞系（Ecotropic）是一种来源于人胚肾(Human Embryonic Kidney, HEK)293细胞系,主要用于快速、短暂地产生高滴度逆转录病毒，同时也能用于稳定地产生逆转录病毒。由Plat-E包装细胞系产生的病毒表达一种单嗜性的被膜，因而只能感染小鼠和大鼠细胞。Plat-GP包装细胞系（Pantropic）也来源于HEK293，但却是一种泛嗜性的包装细胞系，其包装产生的逆转录病毒颗粒既能感染哺乳动物细胞，也能感染非哺乳动物细胞。在使用过程中, Plat-GP细胞需要用逆转录病毒载体和pVSV-G来共转染。VSV-G是泡状口炎病毒(Vesicular Stomatitis Virus) 的被膜糖蛋白，能通过脂质结合及质膜融合来介导病毒进入细胞。因此在使用Plat-GP细胞系时，还需要额外的使用pVSV-G完成包装。Plat-A包装细胞系（Amphotropic）也是一种来源于HEK293细胞的细胞，在将病毒env 基因导入该细胞时利用嘌呤霉素作为选择标记，因而对于一些使用嘌呤霉素作为筛选标记的载体无法使用。

产品名称 货号 产品说明（点击查看说明书）
Platinum-E Retroviral Packaging Cell Line, Ecotropic RV-101 单嗜性逆转录包装细胞系，包装病毒可感染小鼠、大鼠，一个包装>3 x 106细胞
Platinum-A Retroviral Packaging Cell Line, Amphotropic RV-102 双嗜性逆转录包装细胞系，包装病毒可感染小鼠、大鼠、人，一个包装>3 x 106细胞
Platinum-GP Retroviral Packaging Cell Line, Pantropic RV-103 多嗜性逆转录包装细胞系，包装病毒感染宿主范围非常广，但是需要额外提供VSVG蛋白，>3 x 106细胞
pVSV-G Packaging Vector RV-110 提供VSVG包膜蛋白

一般来说，Plat-E是最常用的逆转录病毒包装细胞；Plat-GP则是适用性最广的逆转录包装细胞（但是需要多增加一个表达载体pVSV-G Packaging Vector提供外壳蛋白VSV-G，该外壳蛋白宿主范围非常广）；Plat-A用的比较少，但是其宿主范围比Plat-E要多一些，比如可应用于人、猴、狗来源的细胞等。

美国著名细胞产品公司Cell BioLabs为逆转录病毒研究人员提供完备的重组逆转录病毒表达系统及其相关产品和服务，产品包括逆转录病毒的最新一代表达系统，针对逆转录病毒滴度低的软肋而专门设计的逆转录病毒浓缩纯化试剂盒，逆转录病毒的快速定量，以及逆转录病毒高效转染试剂和用于包装重组逆转录病毒的包装细胞系等，几乎覆盖反转录病毒研究中的所有技术环节。如果您对上述逆转录病毒包装细胞系感兴趣，请致电021-50837765到上海金畔生物科技有限公司垂询相关的实验解决方案，或索取最新的Cell BioLabs产品资料。

腺相关病毒转染——Cell Biolabs腺相关病毒高效转染试剂

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安全高效的将目的基因导入人体靶细胞是成功进行基因治疗的关键之一。经典的基因导入方式（如显微注射、电穿孔、磷酸钙转染等）虽然曾在科研中起了一定的作用，但由于不能很好的解决转染率、靶向性等问题而限制了它们的应用。随着病毒学等相关学科的发展，目前基因打靶已广泛使用各种病毒为载体，AAV载体是最近几十年发展起来的一类新型载体。作为病毒载体的重要一员，AAV不具有明显的细胞毒性效应并且不会像其他病毒载体那样引起细胞强烈的免疫反应等特性，因为其在基因治疗中的应用潜力引起了人们越来越多的兴趣和关注。

由于AAV是天然的缺陷性病毒，需要提供多个因素才能导致转染发生，因此也被认为是最安全的病毒载体。同时腺相关病毒能感染分裂型和非分裂型细胞，甚至S期静止细胞，这使腺相关病毒成为很有前途和吸引力的基因治疗载体。腺相关病毒的转导过程包括病毒结合、进入细胞以及进入后的作用、核内转移和病毒第二条DNA链的合成。在这过程中，最后一步，也就是AAV第二条DNA链的合成是腺相关病毒载体转染的限速步骤。腺相关病毒转染——Cell Biolabs腺相关病毒高效转染试剂

Cell BioLabs针对腺相关病毒转染过程中的主要问题，开发出ViraDuctin™腺相关病毒转染试剂（ViraDuctin™ AAV Transduction Kit 目录号：AAV-200/AAV-201）。该试剂盒能高效提高腺相关病毒在多种细胞内的转染效率，包括传统转染方法转导较低的细胞非分裂细胞，如原代培养细胞和干细胞。该转染试剂使用便捷，只需2小时，是AAV转染非分裂细胞的首选。该试剂盒按照可转染次数分两种包装，AAV-200能进行10次6孔板或者35mm细胞培养皿的转染，货号为AAV-201的则能进行50次转染。

产品名称 货号 产品说明（点击查看说明书）
ViraDuctin™ AAV Transduction Reagent AAV-200 10次6孔板/35mm细胞转染
AAV-201 50次6孔板/35mm细胞转染

美国著名细胞学试剂专家Cell BioLabs为您提供高效简便的重组腺相关病毒相关产品和服务，产品包括腺相关病毒的纯化、定量和高效转染试剂。ViraBind™腺相关病毒纯化试剂盒采用特殊的纯化Matrix技术，无需超速离心，在大大减少试验时间的同时还保证了AAV的纯度。QuickTiter™腺相关病毒定量试剂盒通过检测腺相关病毒DNA含量来测定其病毒含量，只需2小时。ViraDuction™腺相关病毒转导试剂能极大的增加腺相关病毒在多种细胞内的转导效率，包括传统转染方法转导效率低的非分裂细胞，如原代培养细胞和干细胞。如果您对腺相关病毒产品感兴趣，请致电021-50837765到上海金畔生物科技有限公司垂询腺相关病毒相关的实验解决方案，或索取最新的Cell BioLabs产品资料。

ViraSafe™ 慢病毒表达系统——Cell BioLabs慢病毒表达载体

发表于由

在基因治疗中广泛应用的逆转录病毒载体存在的主要问题，是无法高效转导非分裂期细胞，而腺病毒载体虽然能转导非分裂期细胞，但在体内不能实现目的基因稳定的长期表达，且反复应用容易引起免疫反应。慢病毒载体不但可以感染非分裂期细胞，还具有容纳外源性目的基因片段大、稳定整合持久表达、免疫反应小等优点。市场上的慢病毒是由人类免疫缺陷病毒（HIV），通过去除env、vif、vpr、vpu等毒性基因改造而来。复制缺陷型HIV载体通常用水泡口炎病毒G糖蛋白来代替HIV-1的包膜进行包装，从而更安全，宿主范围更广，还能增加病毒的滴度。

慢病毒载体的发展经历了3个阶段：第一代慢病毒载体系统是以三质粒系统为代表。在构建时把HIV-1基因组中进行包装、逆转绿和整合所需的顺式作用元件与编码反式作用蛋白的序列分离，分别构建在三个独立的质粒表达系统上，即包装质粒（一个强启动子如CMV作用下，控制除env以外所有病毒结构基因的表达）、包膜质粒（包含VSV-G基因）和载体质粒（包含目的基因），用这三种质粒共同转染包装细胞如人胚肾293T细胞，在细胞上清中即可收获只有一次感染能力、而无复制能力的慢病毒颗粒。第二代慢病毒载体系统从安全性角度又删去了HIV的所有附属基因。第三代慢病毒载体又进一步做了些安全方面的改进，如删除了U3区的3′LTR和tat基因。

ViraSafe™ 慢病毒表达系统——Cell BioLabs慢病毒表达载体

安全性始终是大家关心的问题，毕竟是HIV改造过来的，不容许有一点闪失。国内的实验室很多都达不到P2的级别，甚至是一堆人挤在一个房间里做各种各样的实验。Cell BioLabs的新一代慢病毒表达系统对广泛应用的第三代慢病毒进行了改进，将Rev与gag和pol基因分离，这意味着要产生原始的病毒，还需要更多的重组步骤。这样完整的ViraSafe™ 慢病毒表达系统包含5个载体（包括一个对照载体），安全性更高。

慢病毒的表达流程一般如下：将目的基因片段克隆到表达载体上；将重组表达载体，与包装混合物（通常是几个质粒的混合物）共转染293细胞；收集病毒上清，测定滴度；感染目的细胞，瞬时表达目的蛋白或用抗生素筛选稳定细胞株；分析目的蛋白。看上去并不复杂，但中间许多步骤需要不断优化。而且慢病毒有一个软肋，就是病毒滴度不高。你可能还需要纯化或浓缩，才能得到108TU/ml的慢病毒。

与目前市场上流行的新一代慢病毒相比，ViraSafe™ 慢病毒表达系统进行了进一步的优化。如在载体质粒上插入了cPPT（增加基因表达水平）及WPRE（增加感染滴度），在一个包装载体中插入腺病毒VA基因以增加感染滴度；同时在整个系统载体的多个部分做了一些基因的优化或删减和插入以增加病毒的安全性。经过这样的优化，ViraSafe™ 最新一代慢病毒表达系统的包装容量增大到10kb，在应用上更广泛；其感染细胞的滴度及外源基因的表达水平均提高，这也在一定程度上弥补了慢病毒在基因治疗领域内的不足；由于对整个慢病毒系统的多层面改造，降低了载体间的同源率和重组机率，更安全。如果您的实验需要长期稳定的基因表达或沉默，而目的细胞又很难转染，那ViraSafe™ 慢病毒表达系统将是您的最理想选择。

产品名称 货号 产品说明
ViraSafe™ Universal Lentiviral Expression System VPK-211-ECO 通用慢病毒表达系统，MCS位点前无启动子，克隆时可插入特异性启动子序列，分双嗜和多嗜两种
VPK-211-PAN
ViraSafe™ Lentivirus Expression System (Puro) VPK-212-ECO EF-1α真核细胞启动子类型，带有Puro抗性筛选标记，分双嗜和多嗜两种
VPK-212-PAN
ViraSafe™ Lentivirus Expression System (Neo) VPK-213-ECO EF-1α真核细胞启动子类型，带有Neo抗性筛选标记，分双嗜和多嗜两种
VPK-213-PAN
ViraSafe™ Lentivirus Expression System (Hygro) VPK-214-ECO EF-1α真核细胞启动子类型，带有Hygro抗性筛选标记，分双嗜和多嗜两种
VPK-214-PAN

另外，根据您实验的不同需求，ViraSafe™ 设计出不同的启动子类型供您选择。有不含有启动子的通用型慢病毒表达载体，您可以用来表达特异性启动子引导的基因；还有真核基因强力启动子CMV启动子类型以及用于表达shRNA的RNAi以及miRNA的启动子供您选择。

美国著名细胞学试剂专家Cell BioLabs为您提供全套的慢病毒技术解决方案，ViraSafe™ 慢病毒表达系统有多种样式供您选择；专门针对慢病毒滴度低的软肋而专门设计的ViraBind™慢病毒浓缩&纯化试剂盒，能让你获得更高滴度和纯度的慢病毒；还有多种慢病毒快速定量以及感染滴度滴定检测方案；Cell BioLabs还有转为慢病毒载体用的293LTV细胞及高效转染试剂供您选择，如果您对慢病毒产品感兴趣，请致电021-50837765到上海金畔生物科技有限公司垂询慢病毒相关的实验解决方案，或索取最新的Cell BioLabs产品资料。