你知道细胞破碎有几种方式吗

你知道细胞破碎有几种方式吗

  细胞破碎是指利用外力破坏细胞膜和细胞壁,使细胞内容物包括目的产物成分释放出来的技术,是分离纯化细胞内合成的非分泌型生化物质(产品)的基础。结合重组DNA技术和组织培养技术上的重大进展,以前认为很难获得的蛋白质现在可以大规模生产。
  但是由于细菌、酵母、真菌、植物细胞壁的组成成分不同,且同类细胞结成的网状结构也不同,所以其细胞壁的坚固程度不同。而动物细胞虽没有细胞壁,但具有细胞膜,也需要一定的细胞破碎方法来破膜,达到提取产物的目的。
  在目前的细胞破碎方法中主要使用的仪器种类包括:
  1. 高剪切均质乳化破碎细胞
  方法:高剪切均质机主要是由于了转子高速运转所产生的高速线速度,还有频率高的机械的效应,伴随着强劲的动能,让组织或细胞可以在定子、转子之间非常狭窄的空隙之中受到了非常的强烈的机械还有液力的剪切、液层的摩擦、离心的挤压、撞击的撕裂还有湍流等多种综合性的效果,造成细胞破碎。
  2. 组织捣碎机破碎细胞
  方法:将材料配成稀糊状液,放置于筒内约 1/3体积,盖紧筒盖,将调速器先拨至最慢处,开动开关后, 逐步加速至所需速度。
  3. 超声波破碎细胞
  方法:用一定功率的超声波处理细胞悬液,使细胞急剧震荡破裂,超声对细胞的作用主要有热效应,空化效应和机械效应。
  说明:处理少量样本,操作简单,重复性较好,节省时间;多用于微生物和组织细胞的破碎,如用大肠杆菌制备各种酶。因为超声波产生的化学自由基团能使某些敏感性活性物质变性失活;大容量装置声能传递,散热均有困难,应采取相应降温措施;对超声波敏感和核酸应慎用。
  4. 组织匀浆器破碎细胞
  方法:先将剪碎的组织置于管中,再套入研杆来回研磨,上下移动,即可将细胞研碎。匀浆器的研钵磨球和玻璃管内壁之间间隙保持在十分之几毫米距离。
  说明:此法细胞破碎程度高,适用于量少和动物脏器组织。较易造成堵塞的团状或丝状真菌,较小的革兰氏阳性菌以及有些亚细胞器,质地坚硬,易损伤匀浆阀者,不适合用该法处理。

支原体抗生素——Myco系列支原体清除

细胞培养(特别是传代细胞)被支原体污染是个世界性难题,也是让每个细胞实验室工作者头疼的问题。在细胞培养中支原体感染发生率达到63%,支原体感染发生后能改变细胞的DNA,RNA及蛋白表达,又不能通过可视法对其进行检测,而且它对细胞的生长率影响较小,不易引起注意。支原体是一类缺乏细胞壁的原核细胞型微生物,它不同于细胞,也不同于病毒。支原体最突出的结构特征是没有细胞壁,一般来讲,对作用于细胞壁生物合成的抗生素,如β-内酰胺类、万古霉素等完全不敏感;对多粘菌素(polymycin)、利福平、磺胺药物普遍耐药。

对支原体最有抑制活性及常用于支原体感染治疗的抗生素是四环素类、大环内酯类及一些氟喹诺酮;其他类抗生素如氨基糖苷类、氯霉素对支原体有较小抑制作用,所以常不用来作为支原体感染的化学治疗剂。有实验人员试用了红霉素。结果发现使用红霉素有一定的效果,细胞生长很快,状态明显好转。但红霉素不能完全根治支原体感染,停药后一段时间支原体又复发了。用四环素支原体抗生素——Myco系列支原体清除也遇到了类似的问题。也有发现庆大霉素和卡那霉素对于抑制支原体的生长具有一定的效用,但是效果也不是很明显,毕竟氨基甙类不能完全的抑制甚至杀灭支原体。

伴随着新一代支原体专用抗生素的诞生,一些新的抗生素开始进入细胞实验室,如InioGen公司的M-Plasmocin,Applichem的Myco-3等,这一类的抗生素属于氟喹诺酮类环丙沙星类抗生素,很多细胞培养污染相关的支原体对该抗生素敏感,该抗生素无毒副作用。Applichem的Myco-3支原体清除试剂是100倍浓缩液,可直接加入培养基中稀释即可使用,每2-3天换液一次,连续处理2周左右,可有效清除大多数支原体污染,简单易操作。

对于顽固性的支原体污染,或者单独使用新型支原体抗生素效果不是很理想的,推荐使用抗生素联合使用。其实一些在医药上已经被广泛使用的支原体抗生素,比上述广谱性的抗生素在支原体的处理上具有更好的效果。泰妙菌素是一种双萜类动物专用抗生素,作为世界十大兽用抗生素之一,对革兰氏阳性菌、支原体、猪胸膜肺炎放线杆菌有较强的抗菌作用,特别是支原体。另一种支原体抗生素米诺环素,其抗菌谱与四环素相似,但是对于支原体的抑制效果更好,一般来说,这两种抗生素的联合使用会起到很好的支原体清除效果。具体应用于被顽固支原体污染的细胞,先用Applichem的Myco-1连续处理4天后换Myco-2处理3天,如此重复2-3次即可完全清除细胞内的支原体污染。

产品名称(货号) 产品说明
Myco-1(A5222) 泰妙菌素是一种双萜类动物专用抗生素,对革兰氏阳性菌、支原体等有较强的抗菌作用。Myco-1在泰妙菌素的基础上有进行了修饰优化,并且和Myco-2联合用药进行了配比优化。先用Applichem的Myco-1连续处理4天后换Myco-2处理3天,如此重复2-3次即可完全清除细胞内的支原体污染。
Myco-2(A5233) 米诺环素(盐酸二甲胺四环素,美满霉素),其抗菌谱与四环素相似,但是对于支原体的抑制效果更好。Myco-2在米诺环素的基础上有进行了修饰优化,并且和Myco-1联合用药进行了配比优化。先用Applichem的Myco-1连续处理4天后换Myco-2处理3天,如此重复2-3次即可完全清除细胞内的支原体污染。
Myco-3(A5240) 氟喹酮类的环丙沙星, 多种支原体对其敏感包括: 莱氏无胆支原体, 口腔支原体, 猪鼻支原体, 发酵支原体和精氨酸支原体等, 在推荐使用浓度下, 该产品对细胞无毒性, 且极易操作. Myco-3支原体清除试剂是100倍浓缩液,可直接加入培养基中稀释即可使用,每2-3天换液一次,连续处理2周左右,可有效清除大多数支原体污染,简单易操作。

除了支原体抗生素类的清除试剂,上海金畔生物科技有限公司还向您推荐AppliChem的其他更完整的细胞支原体污染解决方案,其PCR Mycoplasma Test Kit能通过高度灵敏的支原体基因保守序列,提供给你即用型的PCR Mix试剂盒,能快速检测您的细胞或者样品是否被含有支原体;另外AppliChem还提供针对细胞培养过程中各个可能支原体的污染源进行消毒的产品,如针对CO2培养箱的喷雾消毒产品、培养箱内的水源消毒溶液以及水浴箱等设备的消毒试剂,为您提供一站式的支原体解决方案!

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