TOP10F` Chemically Competent Cell 大肠杆菌化学感受态细胞

TOP10F` Chemically Competent Cell 大肠杆菌化学感受态细胞

货号: MF2349-1000UL 品牌: Jinpan 标签: 分子生物学

描述

TOP10F` Chemically Competent Cell

大肠杆菌化学感受态细胞

产品标签

TOP10F`;TOP10;F′附加体(F′ episome);F-TOP10;IPTG;卡那霉素;链霉素;

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货号 产品名称 规格 价格(元)
MF2349-1000UL TOP10F` Chemically Competent Cell 大肠杆菌化学感受态细胞 10×100μl 396
MF2349-5000UL TOP10F` Chemically Competent Cell 大肠杆菌化学感受态细胞 50×100μl 1696

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产品组分:

组分编号 组分名称 货号(规格)
MF2349-2000UL MF2349-10000UL
MF2349-A TOP10F` Chemically Competent Cell 20×100μl 100×100μl
MF2349-B Control Vector puC19, 10pg/μl 10μl 10μ

 

菌株描述

TOP10F`菌株来源于TOP10菌株,除了F′附加体(F′ episome)的引入。F′附加体携带四环素抗性基因,使其能从携带f1复制子的载体中纯化单链DNA。F′附加体还携带lacIq抑制子,参与IPTG作为诱导剂对trc,tac和lac启动子的诱导表达。TOP10F`菌株进行蓝白斑筛选,需要IPTG诱导β-半乳糖苷酶基因的表达。recA1和endA1的突变有利于克隆DNA的稳定和高纯度质粒DNA的提取。适用于高效克隆和质粒扩繁。

TOP10F`菌株基因型:F´{lacIq Tn10 (TetR)} mcrA Δ(mrr-hsdRJP-mcrBC) Φ80lacZΔM15 ΔlacX74 recA1 araD139 Δ(ara-leu)7697 galU galK rpsL endA1 nupG

产品描述

本品是大肠杆菌TOP10F`菌株经特殊工艺制作所得的感受态细胞,经pUC19载体检测转化效率>10cfu/μg DNA。且在-80℃能稳定保存几个月转化效率不发生改变。

 

保存与运输条件:

保存:-80℃保存,六个月有效。

运输:干冰运输。

注意事项

1) 感受态细胞必须用干冰运输。感受态细胞应在-80℃保存,不可反复冻融且放置时间过长,否则会减低感受态细胞的转化效率。

2) 最好在冰上融化感受态细胞。在冰上融化后立即加入目标DNA,不可在冰上放置时间过长。长时间存放会降低转化效率,混入目的DNA时需轻柔操作。

3) 进行转化操作时,需在相应温度及无菌条件下进行。

4) 为防止转化实验不成功,可保留部分连接反应液以重新转化,将损失降到最低。

5) 产品包装内含载体pUC19 DNA(10pg/μl),供对照实验用。

6) 为了您的安全和健康,请穿实验服并戴一次性手套操作。

使用方法【所有操作均在无菌条件的标准下进行】

1.1 将TOP10F`感受态细胞从-80℃取出,迅速插入冰中,5min后待菌块融化,加入目的DNA(质粒或连接产物),并用手拨打管底轻轻混匀,冰中静置25min。

1.2 42℃水浴热激45s,迅速放回冰上并静置2min。 此过程不要摇动离心管。

1.3 向每个离心管中加入700 μl无菌的2YT或LB培养基(不含抗生素),混匀后置于37℃ 摇床,200 rpm振荡培养60min,目的使质粒上相关的抗性标记基因表达,使菌体复苏。

1.4 低速离心收菌(比如4000rpm,2min),留取100μl左右上清,用枪轻轻吹打重悬菌块,之后加到含相应抗生素的2YT或LB固体琼脂培养基上,用无菌的涂布棒将细胞均匀涂开,将平板置于室温(或37℃)直至液体被吸收,之后倒置放于37℃过夜培养。如果进行蓝白斑筛选,37℃至少培养13h。

【注意】:

a)涂布用量可根据具体实验调整。若转化的DNA总量较多,可不用离心,直接取少量转化产物涂布平板;反之,若转化的DNA总量较少,则通过离心(4,000 rpm,2min)后吸除部分培养液,悬浮菌体后将其涂布于一个平板中。

b)新制备的固体培养基不易涂干,可将平板正置于37℃直至液体被吸收后再倒置培养。

c)涂布剩余的菌液可置于4℃保存,如果次日的转化菌落数过少,可以将剩下的菌液再涂布新培养基进行培养。

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MF2002-1G IPTG 异丙基-β-D-硫代半乳糖苷 1g

 

 

规格信息

品牌:

Jinpan

CAS:

N/A

规格:

10×100μl

货期:

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