BL21 Star (DE3) pLysS Competent Cell 大肠杆菌化学感受态细胞

BL21 Star (DE3) pLysS Competent Cell 大肠杆菌化学感受态细胞

货号: MF2335-5000UL 品牌: Jinpan 标签: 分子生物学

描述

BL21 Star (DE3) pLysS Chemically Competent Cell 

大肠杆菌化学感受态细胞

 

产品标签:

BL21 Star (DE3) pLysS;Rosetta (DE3);BL21 (DE3);表达感受态细胞;pET表达载体;IPTG诱导;非毒性蛋白表达;

 

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货号 产品名称 规格 价格(元)    
MF2335-1000UL   BL21 Star (DE3) pLysS Competent Cell大肠杆菌感受态细胞     10×100μl        396 
MF2335-5000UL BL21 Star (DE3) pLysS Competent Cell大肠杆菌感受态细胞 50×100μl 1696

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产品组分:

组分编号 组分名称

货号(规格)

MF2335-1000UL     MF2335-5000UL    
MF2335-A     BL21 Star (DE3) pLysS Competent Cell      10×100μl 50×100μl
MF2335-B Control Plasmid puC19, 10 pg/μl 10μl 10μl

菌株描述

BL21 Star (DE3) pLysS菌株来源于BL21(DE3)菌株。DE3命名表明该菌株染色体上整合λ噬菌体DE3溶原体(其上携带lacUV5启动子调控的T7 RNA聚合酶基因),IPTG用来诱导T7 RNA聚合酶的表达。该菌株含突变的rne基因(rne131),编码合成截短的RNase E,此酶丧失mRNA水解能力从而提高mRNA转录体的稳定性并增加异源蛋白产量。作为大肠杆菌B/r菌株,不含有lon蛋白酶和缺乏外膜蛋白酶OmpT,降低了外源蛋白的降解。

BL21 Star (DE3) pLysS菌株携带pLys质粒,具有氯霉素抗性(CamR)。含有表达T7溶菌酶的基因,T7溶菌酶能够作用于大肠杆菌细胞壁上的肽聚糖溶解大肠杆菌,从而能够降低目的基因的背景表达水平,但不干扰IPTG诱导的表达。pLys质粒还含有p15A复制起始子,这一起始子使其兼容于pUC或pBR322来源的质粒。

BL21 Star (DE3) pLysS菌株特别设计适用于高拷贝、T7启动子表达载体(比如pRSET T7载体)的非毒性蛋白的高水平表达。与BL21菌株相比,BL21 Star菌株由于提高的mRNA稳定性,呈现出更高的异源基因基础表达,因此不适合毒性蛋白表达。然而,BL21 Star (DE3) pLysS菌株比BL21 Star菌株表达更低。

BL21 Star (DE3) pLysS菌株基因型:F-ompThsdSB(rB-mB-)galdcm rne131(DE3) pLysS (CamR)

产品描述

本品是大肠杆菌BL21 Star (DE3) pLysS菌株经特殊工艺制作所得的感受态细胞,可用于DNA的热击转化。经pUC19质粒检测转化效率可达107 cfu/μg DNA。且在-80℃能稳定保存几个月转化效率不发生改变。

 

保存与运输条件

保存:-80℃保存,六个月有效。

运输:干冰运输。

 

注意事项

1)   感受态细胞必须用干冰运输。感受态细胞应在-80℃保存,不可反复冻融且放置时间过长,否则会减低感受态细胞的转化效率。

2)   最好在冰上融化感受态细胞。

3)   进行转化操作时,需在相应温度及无菌条件下进行。

4)   为防止转化实验不成功,可保留部分连接反应液以重新转化,将损失降到最低。

5)   产品包装内含质粒pUC19 DNA(10pg/μl),供对照实验用。

6)   BL21 Star (DE3) pLysS菌株携带pLysS质粒,除复苏培养基不含抗生素之外,其他所用培养基、培养液都应含有氯霉素(34μg/ml),以防止质粒丢失。

7)   为了您的安全和健康,请穿实验服并戴一次性手套操作。

使用方法【所有操作均在无菌条件的标准下进行】

1)  从-80℃冰箱取出取感受态细胞,迅速置于冰浴中,5min后待菌块融化,加入目的DNA,用手轻弹管底轻轻混匀,冰浴静置25min。

2)   42℃热激45s,迅速将离心管转移到冰浴中,冰上静置2-3min。此过程不要摇动离心管。

3)   向每个离心管中加700 μl无菌的SOC或LB培养基(不含抗生素),混匀后置于37℃ 摇床,200 rpm振荡培养60min,目的使质粒上相关的抗性标记基因表达,使菌体复苏。

4)   低速离心收菌(比如4000rpm,2min),留取100μl左右上清,用枪轻轻吹打重悬菌块,之后加到含氯霉素(34μg/ml)以及所选质粒筛选抗生素的SOC或LB固体琼脂培养基上,用无菌的涂布棒将细胞均匀涂开,将平板置于室温(或37℃)直至液体被吸收,倒置培养,37℃培养12-16h。

【注意】:

a)涂布用量可根据具体实验调整。若转化的DNA总量较多,可不用离心,直接取少量转化产物涂布平板;反之,若转化的DNA总量较少,则通过离心(4,000 rpm,2min)后吸除部分培养液,悬浮菌体后将其涂布于一个平板中。

b)新制备的固体培养基不易涂干,可将平板正置于37℃直至液体被吸收后再倒置培养。

c)涂布剩余的菌液可置于4℃保存,如果次日的转化菌落数过少,可以将剩下的菌液再涂布新培养基进行培养。

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JP0023-25G Streptomycin Sulfate, USP Grade硫酸链霉素 25g
JP0021-10G Chloramphenicol, USP Grade氯霉素 10g
JP0018-10G Ampicillin, Sodium Salt氨苄青霉素钠 10g
JP0017-5G Carbenicillin, Disodium Salt羧苄青霉素二钠盐 5g
JP0019-10G Kanamycin Sulfate硫酸卡那霉素 10g
JP0014-1G Rifampicin, USP Grade利福平 1g

 

 

规格信息

品牌:

Jinpan

CAS:

N/A

规格:

50×100μl

货期:

咨询客服

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BL21 Star (DE3) Competent Cell 大肠杆菌化学感受态细胞

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BL21 Star (DE3) Chemically Competent Cell 大肠杆菌化学感受态细胞

 

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BL21 (DE3);Rosetta (DE3);Rosetta (DE3);表达感受态细胞;pET表达载体;IPTG诱导;

 

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菌株描述

BL21 Star (DE3) 菌株来源于BL21(DE3)菌株,DE3命名表明该菌株染色体上整合λ噬菌体DE3溶原体(其上携带lacUV5启动子调控的T7 RNA聚合酶基因),IPTG用来诱导T7 RNA聚合酶的表达。该菌株携带一突变的rne基因(rne131),编码合成截短的RNase E,此酶丧失mRNA降解能力从而提高mRNA转录体的稳定性和增加蛋白产量。另外,BL21 Star (DE3)是大肠杆菌B/r菌株,缺乏lon和外膜蛋白酶OmpT,降低外源重组蛋白的被降解,进一步增加了蛋白表达率。BL21 Star (DE3) 菌株特别设计适用于低拷贝,T7启动子表达载体的非毒性蛋白的高水平表达。与BL21菌株相比, mRNA稳定性提高,BL21 Star菌株由于提高的mRNA稳定性,呈现出更高的异源基因基础表达,因此不适合毒性蛋白表达。

BL21 Star (DE3) 菌株基因型:F-ompThsdSB(rB-mB-)galdcm rne131(DE3)

产品描述

本品是大肠杆菌BL21 Star (DE3)菌株经特殊工艺制作所得的感受态细胞,可用于DNA的热击转化。经pUC19质粒检测转化效率可达108 cfu/μg DNA。且在-80℃能稳定保存几个月转化效率不发生改变。

 

保存与运输条件:

保存:-80℃保存,六个月有效。

运输:干冰运输。

 

注意事项

1)   感受态细胞必须用干冰运输。感受态细胞应在-80℃保存,不可反复冻融且放置时间过长,否则会减低感受态细胞的转化效率。

2)   最好在冰上融化感受态细胞。

3)   进行转化操作时,需在相应温度及无菌条件下进行。

4)   为防止转化实验不成功,可保留部分连接反应液以重新转化,将损失降到最低。

5)   产品包装内含质粒pUC19 DNA(10pg/μl),供对照实验用。

6)   为了您的安全和健康,请穿实验服并戴一次性手套操作。

使用方法【所有操作均在无菌条件的标准下进行】

1)   取感受态细胞置于冰浴中,如需分装可将刚刚融化细胞悬液分装到无菌预冷的离心管内,置于冰浴中。【注意:一次转化感受态细胞的建议用量为50-100 μl,可以根据实际情况分装使用。需注意所用DNA体积不要超过感受态细胞悬液体积的十分之一。】

以下实验以100 μl感受态细胞为例。

2)   向感受态细胞悬液中加入目的DNA(根据实际情况加入适量的DNA,通常100 μl感受态细胞能够被1 ng超螺旋质粒DNA所饱和),用移液器轻轻吹打混匀(或用手轻弹管轻轻混匀),冰浴静置30min。

3)   42℃热激45s,迅速将离心管转移到冰浴中,冰上静置2-3min。此过程不要摇动离心管。

4)   向每个离心管中加700 μl无菌的SOC或LB培养基(不含抗生素),混匀后置于37℃ 摇床,200 rpm振荡培养60min,目的使质粒上相关的抗性标记基因表达,使菌体复苏。

5)   根据实验需求,取适量已转化的感受态细胞,加到含相应抗生素的SOC或LB固体琼脂培养基上,用无菌的涂布棒将细胞均匀涂开,将平板置于室温(或37℃)直至液体被吸收,倒置培养,37℃培养12-16h。

【注意】:

a)涂布用量可根据具体实验调整。若转化的DNA总量较多,可取少量转化产物涂布平板;反之,若转化的DNA总量较少,可取200-300 μl转化产物涂布平板。若预计的克隆较少,可通过离心(4,000 rpm,2min)后吸除部分培养液,悬浮菌体后将其涂布于一个平板中。

b)新制备的固体培养基不易涂干,可将平板正置于37℃直至液体被吸收后再倒置培养。c)涂布剩余的菌液可置于4℃保存,如果次日的转化菌落数过少,可以将剩下的菌液再涂布新培养基进行培养。

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产品描述

本品是大肠杆菌BL21 Star (DE3)菌株经特殊工艺制作所得的感受态细胞,可用于DNA的热击转化。经pUC19质粒检测转化效率可达108 cfu/μg DNA。且在-80℃能稳定保存几个月转化效率不发生改变。

 

保存与运输条件:

保存:-80℃保存,六个月有效。

运输:干冰运输。

 

注意事项

1)   感受态细胞必须用干冰运输。感受态细胞应在-80℃保存,不可反复冻融且放置时间过长,否则会减低感受态细胞的转化效率。

2)   最好在冰上融化感受态细胞。

3)   进行转化操作时,需在相应温度及无菌条件下进行。

4)   为防止转化实验不成功,可保留部分连接反应液以重新转化,将损失降到最低。

5)   产品包装内含质粒pUC19 DNA(10pg/μl),供对照实验用。

6)   为了您的安全和健康,请穿实验服并戴一次性手套操作。

使用方法【所有操作均在无菌条件的标准下进行】

1)   取感受态细胞置于冰浴中,如需分装可将刚刚融化细胞悬液分装到无菌预冷的离心管内,置于冰浴中。【注意:一次转化感受态细胞的建议用量为50-100 μl,可以根据实际情况分装使用。需注意所用DNA体积不要超过感受态细胞悬液体积的十分之一。】

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2)   向感受态细胞悬液中加入目的DNA(根据实际情况加入适量的DNA,通常100 μl感受态细胞能够被1 ng超螺旋质粒DNA所饱和),用移液器轻轻吹打混匀(或用手轻弹管轻轻混匀),冰浴静置30min。

3)   42℃热激45s,迅速将离心管转移到冰浴中,冰上静置2-3min。此过程不要摇动离心管。

4)   向每个离心管中加700 μl无菌的SOC或LB培养基(不含抗生素),混匀后置于37℃ 摇床,200 rpm振荡培养60min,目的使质粒上相关的抗性标记基因表达,使菌体复苏。

5)   根据实验需求,取适量已转化的感受态细胞,加到含相应抗生素的SOC或LB固体琼脂培养基上,用无菌的涂布棒将细胞均匀涂开,将平板置于室温(或37℃)直至液体被吸收,倒置培养,37℃培养12-16h。

【注意】:

a)涂布用量可根据具体实验调整。若转化的DNA总量较多,可取少量转化产物涂布平板;反之,若转化的DNA总量较少,可取200-300 μl转化产物涂布平板。若预计的克隆较少,可通过离心(4,000 rpm,2min)后吸除部分培养液,悬浮菌体后将其涂布于一个平板中。

b)新制备的固体培养基不易涂干,可将平板正置于37℃直至液体被吸收后再倒置培养。c)涂布剩余的菌液可置于4℃保存,如果次日的转化菌落数过少,可以将剩下的菌液再涂布新培养基进行培养。

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