Puromycin Aminonucleoside 嘌呤霉素氨基核苷

Puromycin Aminonucleoside 嘌呤霉素氨基核苷

货号: JP0124-50MG 品牌: Jinpan 标签: 生化试剂

描述

Puromycin Aminonucleoside 嘌呤霉素氨基核苷

产品标签

Puromycin Aminonucleoside 嘌呤霉素氨基核苷;Puromycin 嘌呤霉素盐酸盐;Nephrotic syndrome 肾病综合征;Proteinuria 蛋白尿症;CAS:58-60-6;

产品信息

产品名称 产品编号 规格              价格(元)   
Puromycin Aminonucleoside 嘌呤霉素氨基核苷    JP0124-10MG     10mg 896
Puromycin Aminonucleoside 嘌呤霉素氨基核苷 JP0124-50MG 50mg 3566

产品描述

嘌呤霉素氨基核苷(Puromycin Aminonucleoside, PANS)是抗生素嘌呤霉素的氨基核苷部分,这一嘌呤霉素类似物不能抑制蛋白合成或诱导凋亡,替代的是用于诱导肾病的实验动物模型,以研究局灶节段性肾小球硬化、肾病变的诱导和引发蛋白尿症的事件。大鼠体内注射PANS(0.5-5 μM)能影响肾小球上皮细胞黏附,降低α3β1整合素表达。PANS还能减少肾病蛋白(Nephrin)和足突蛋白(Podocin)的表达。

产品特性

1)   化学名:4-amino-2-[6-(dimethylamino)purin-9-yl]-5-(hydroxymethyl)oxolan-3-ol

2)   同义名:PANS; NSC 3056;3′-amino-3′-deoxy-N,N-dimethyl-adenosine; 3′-Amino-3′-deoxy-N6,N6- dimethyladenosine; 氨基甘嘌呤霉素;氨基核苷嘌呤霉素;

3)   CAS NO:58-60-6

4)   来源:半合成,来自嘌呤霉素

5)   分子式:C12H18N6O3

6)   分子量:294.3 g/mol

7)   纯度:≥98% (HPLC)

8)   溶解性:溶于DJPO(20mg/ml),DMF(10mg/ml),H2O(10mg/ml)

9)   化学结构式:Puromycin Aminonucleoside 嘌呤霉素氨基核苷

保存与运输方法

保存:-20℃干燥保存,3年有效。

运输:室温运输。

配制储存液

         质量

溶剂体积

浓度

1mg 5mg 10mg          50mg
1mM               3.3978 mL        16.9889 mL     33.9778 mL      169.8889 mL   
5mM 0.6796 mL 3.3978 mL 6.7956 mL 33.97778 mL
10mM 0.3398 mL 1.6989 mL 3.3978 mL 16.9889mL
50mM 0.0680 mL 0.3398 mL 0.6796 mL 3.3978 mL

使用方法【源自文献,仅作参考】

文献1,Krishnamurti U et al.Puromycin aminonucleoside suppresses integrin expression in cultured glomerular epithelial cells.J Am Soc Nephrol. 2001 Apr;12(4):758-66. PMID: 11274237

体外研究:

细胞类型(Cell type):T- SV40 immortalized human glomerular epithelial cell line (56/10 A1)

实验方法(Assay):The 56/10 A1 cells were seeded at 0.01 × 106/cm2in 96-well plates and incubated for 2 d at 37℃. PAN was added to the media at a concentration of 0, 0.5, or 5.0 μg/ml (n = 12 for each PAN concentration), and the cells were incubated for another 48 h. Then the effect of PAN on proliferation of cells was assessed by an enzyme-linked immunosorbent assay method, using BrdU.

实验结果(Results):Control wells that were not exposed to PAN contained 204.3 ± 31.1 × 103cells/cm2, compared with 204.0 ± 30.6 × 103cells/cm2in wells that were exposed to 0.5 μg/ml PAN and 163.7 ± 36.3 × 103cells/cm2in wells that were exposed to 5.0 μg/ml PAN.

文献2,Kho MC et al. Plantago asiatica L. Ameliorates Puromycin Aminonucleoside-Induced Nephrotic Syndrome by Suppressing Inflammation and Apoptosis. Nutrients. 2017 Apr 14; 9(4). pii: E386. PMID: 28420111

体内研究:

动物模型(Animal Model):Eight-week-old maleSprague-Dawley (SD) rats (weighing170–200g)

药物配制(Preparation):Puromycin aminonucleoside (PAN) was dissolved in dissolved in saline

实验方法(Assays):Rats were randomly divided into four groups: Control group; a PAN-treated Nephrotic syndrome (NS) group; a NS plus Losartan (30 mg/kg/day) treated group; and a NS plus PAL (200 mg/kg/day) treated group. Rats were intravenously injected with PAN (75 mg/kg/day, dissolved in saline). The control group was injected with saline only. Rats were administered either distilled water (Control and NS groups), Losartan or PAL by an oral gavage method once daily for 7 days.

实验结果(Results):Proteinuria is an important characteristic of puromycin aminonucleoside-induced NS in rats. 24-h urinary protein excretion progressively increased following PAN injection. Proteinuria levels in the NS group peaked on day 7 compared to the Control group. However, the PAL-treated group exhibited significantly decreased proteinuria levels on day 7 (p < 0.01). Similarly, treatment with losartan produced similar results to those seen in the PAL group.

给药途径(Administration):Intravenous (i.v.) injection

 

 

 

规格信息

品牌:

Jinpan

CAS:

58-60-6

规格:

50mg

货期:

咨询客服

Puromycin Aminonucleoside 嘌呤霉素氨基核苷

Puromycin Aminonucleoside 嘌呤霉素氨基核苷

货号: JP0124-10MG 品牌: Jinpan 标签: 生化试剂

描述

Puromycin Aminonucleoside 嘌呤霉素氨基核苷

产品标签

Puromycin Aminonucleoside 嘌呤霉素氨基核苷;Puromycin 嘌呤霉素盐酸盐;Nephrotic syndrome 肾病综合征;Proteinuria 蛋白尿症;CAS:58-60-6;

产品信息

产品名称 产品编号 规格              价格(元)   
Puromycin Aminonucleoside 嘌呤霉素氨基核苷    JP0124-10MG     10mg 896
Puromycin Aminonucleoside 嘌呤霉素氨基核苷 JP0124-50MG 50mg 3566

产品描述

嘌呤霉素氨基核苷(Puromycin Aminonucleoside, PANS)是抗生素嘌呤霉素的氨基核苷部分,这一嘌呤霉素类似物不能抑制蛋白合成或诱导凋亡,替代的是用于诱导肾病的实验动物模型,以研究局灶节段性肾小球硬化、肾病变的诱导和引发蛋白尿症的事件。大鼠体内注射PANS(0.5-5 μM)能影响肾小球上皮细胞黏附,降低α3β1整合素表达。PANS还能减少肾病蛋白(Nephrin)和足突蛋白(Podocin)的表达。

产品特性

1)   化学名:4-amino-2-[6-(dimethylamino)purin-9-yl]-5-(hydroxymethyl)oxolan-3-ol

2)   同义名:PANS; NSC 3056;3′-amino-3′-deoxy-N,N-dimethyl-adenosine; 3′-Amino-3′-deoxy-N6,N6- dimethyladenosine; 氨基甘嘌呤霉素;氨基核苷嘌呤霉素;

3)   CAS NO:58-60-6

4)   来源:半合成,来自嘌呤霉素

5)   分子式:C12H18N6O3

6)   分子量:294.3 g/mol

7)   纯度:≥98% (HPLC)

8)   溶解性:溶于DJPO(20mg/ml),DMF(10mg/ml),H2O(10mg/ml)

9)   化学结构式:Puromycin Aminonucleoside 嘌呤霉素氨基核苷

保存与运输方法

保存:-20℃干燥保存,3年有效。

运输:室温运输。

配制储存液

         质量

溶剂体积

浓度

1mg 5mg 10mg          50mg
1mM               3.3978 mL        16.9889 mL     33.9778 mL      169.8889 mL   
5mM 0.6796 mL 3.3978 mL 6.7956 mL 33.97778 mL
10mM 0.3398 mL 1.6989 mL 3.3978 mL 16.9889mL
50mM 0.0680 mL 0.3398 mL 0.6796 mL 3.3978 mL

使用方法【源自文献,仅作参考】

文献1,Krishnamurti U et al.Puromycin aminonucleoside suppresses integrin expression in cultured glomerular epithelial cells.J Am Soc Nephrol. 2001 Apr;12(4):758-66. PMID: 11274237

体外研究:

细胞类型(Cell type):T- SV40 immortalized human glomerular epithelial cell line (56/10 A1)

实验方法(Assay):The 56/10 A1 cells were seeded at 0.01 × 106/cm2in 96-well plates and incubated for 2 d at 37℃. PAN was added to the media at a concentration of 0, 0.5, or 5.0 μg/ml (n = 12 for each PAN concentration), and the cells were incubated for another 48 h. Then the effect of PAN on proliferation of cells was assessed by an enzyme-linked immunosorbent assay method, using BrdU.

实验结果(Results):Control wells that were not exposed to PAN contained 204.3 ± 31.1 × 103cells/cm2, compared with 204.0 ± 30.6 × 103cells/cm2in wells that were exposed to 0.5 μg/ml PAN and 163.7 ± 36.3 × 103cells/cm2in wells that were exposed to 5.0 μg/ml PAN.

文献2,Kho MC et al. Plantago asiatica L. Ameliorates Puromycin Aminonucleoside-Induced Nephrotic Syndrome by Suppressing Inflammation and Apoptosis. Nutrients. 2017 Apr 14; 9(4). pii: E386. PMID: 28420111

体内研究:

动物模型(Animal Model):Eight-week-old maleSprague-Dawley (SD) rats (weighing170–200g)

药物配制(Preparation):Puromycin aminonucleoside (PAN) was dissolved in dissolved in saline

实验方法(Assays):Rats were randomly divided into four groups: Control group; a PAN-treated Nephrotic syndrome (NS) group; a NS plus Losartan (30 mg/kg/day) treated group; and a NS plus PAL (200 mg/kg/day) treated group. Rats were intravenously injected with PAN (75 mg/kg/day, dissolved in saline). The control group was injected with saline only. Rats were administered either distilled water (Control and NS groups), Losartan or PAL by an oral gavage method once daily for 7 days.

实验结果(Results):Proteinuria is an important characteristic of puromycin aminonucleoside-induced NS in rats. 24-h urinary protein excretion progressively increased following PAN injection. Proteinuria levels in the NS group peaked on day 7 compared to the Control group. However, the PAL-treated group exhibited significantly decreased proteinuria levels on day 7 (p < 0.01). Similarly, treatment with losartan produced similar results to those seen in the PAL group.

给药途径(Administration):Intravenous (i.v.) injection

 

 

 

规格信息

品牌:

Jinpan

CAS:

58-60-6

规格:

10mg

货期:

咨询客服

Puromycin 嘌呤霉素PS610


Puromycin 嘌呤霉素

简要描述:Puromycin 嘌呤霉素,产品编码:PS610。
它有两种规格:5ML、1ML。
是无菌的盐酸盐溶液,经过滤除菌,可以直接用于细胞培养。

详细介绍

产品咨询

品牌 其他品牌 供货周期 一个月
应用领域 医疗卫生,环保,化工,生物产业,综合

Puromycin 嘌呤霉素,产品编码:PS610。

Puromycin 嘌呤霉素描述

嘌呤霉素是氨酰-tRNA分子3ˊ末端的类似物,能够与核糖体的A位点结合并掺入到延伸的肽链中。嘌呤霉素同A位点结合后,不会参与随后的任何反应,从而导致蛋白质合成的提前终止并释放出C-末端含有嘌呤霉素的不成熟多肽,从而杀死革兰氏阳性菌、各种动物和昆虫细胞。

上海金畔生物科技有限公司

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Puromycin Dihydrochloride 嘌呤霉素盐酸盐

Puromycin Dihydrochloride 嘌呤霉素盐酸盐

货号: JP0011-500MG 品牌: Jinpan 标签: 生化试剂

描述

Puromycin Dihydrochloride 嘌呤霉素盐酸盐

产品标签

Puromycin 嘌呤霉素;G418 Sulfate G418硫酸盐;Geneticin遗传霉素;Puromycin resistance gene (Pac);Blasticidin S 杀稻瘟菌素(灭瘟散);Zeocin博莱霉素;CAS:58-58-2

产品信息

产品名称 产品编号 规格 价格(元)    促销价(元)
Puromycin Dihydrochloride 嘌呤霉素盐酸盐      JP0011-25MG        25mg            540 432
Puromycin Dihydrochloride 嘌呤霉素盐酸盐 JP0011-100MG 100mg 1800 1440
Puromycin Dihydrochloride 嘌呤霉素盐酸盐 JP0011-500MG 500mg 8500 6800

产品描述

嘌呤霉素(Puromycin),来源于白黑链霉菌(Streptomyces alboniger)代谢产物的一种氨基糖苷类抗生素,

有效抑制革兰氏阳性菌生长,对抗酸杆菌的抑制活性相对较弱,但对革兰氏阴性菌的抑制活性更弱。还能抑制原生生物、藻类、哺乳动物和昆虫细胞的生长,一般2天内能杀死99%的细胞。作用机制在于:嘌呤霉素是氨酰-tRNA分子3’末端的结构类似物,能够与核糖体的A位点结合并掺入到延伸肽链中,导致肽链合成的永久终止,进而阻止蛋白质合成。嘌呤霉素还具有抗肿瘤活性。作为蛋白合成抑制剂,用来研究细胞分化中控制基因顺序表达和协同表达的转录调控机制。

对嘌呤霉素的抗性来自嘌呤霉素产生菌内发现的pac基因,其表达产物嘌呤霉素N-乙酰转移酶(puromycin N-acetyl-transferase)可通过乙酰化嘌呤霉素使其失活。这一特性使得嘌呤霉素常用来筛选和维持培养携带pac基因的哺乳动物细胞株,特别是慢病毒感染的细胞株。现在商业化的慢病毒载体多数都携带pac基因。某些情况下,也能用来筛选携带pac基因的大肠杆菌菌株。嘌呤霉素在CRISPR/Cas9基因编辑系统中也发挥重要作用。

本品为嘌呤霉素的二盐酸盐形式,CAS NO:58-58-2,粉末形式,可溶于水配制成50mg/ml储存液,0.22µm滤膜过滤除菌后,-20℃冻存。真核细胞常用的筛选浓度为1-10µg/ml。

产品特性

1)   化学名:3′-[α-Amino-p-methoxyhydrocinnamamido]-3′-deoxy-N,N-dimethyladenosine dihydrochloride

2)   同义名:Stylomycin hydrochloride; CL 13900 dihydrochloride; P638 dihydrochloride; CL16536; NSC 3055;

3)   CAS NO:58-58-2

4)   分子式:C22H29N7O5·2HCl

5)   分子量:544.43 g/mol

6)   外观:白色至灰白色粉末

7)   纯度:>98% (HPLC)

8)   熔点:175-177 °C

9)   溶解性:溶于水(50mg/ml),乙醇(~1mg/ml),DJPO(~10mg/ml),PBS,pH 7.2(~10mg/ml)

10)化学结构:Puromycin Dihydrochloride 嘌呤霉素盐酸盐 

保存与运输方法

保存:-20℃干燥保存,4年有效。

运输:冰袋运输。

使用方法

1、  储存液制备

用蒸馏水溶解嘌呤霉素配制成50 mg/ml的储存液,经0.22 μm滤膜过滤除菌,按照单次用量分装,于-20℃冻存,避免反复冻融。也可溶于甲醇,配制成10 mg/ml的储存液。

2、  建议工作浓度

哺乳动物细胞:1-10 μg/ml,最佳浓度使用宿主细胞杀灭实验(杀灭曲线)来确定;

大肠杆菌:LB琼脂培养基筛选敏感转化菌株,使用浓度为100-125μg/ml。

【注意】:使用嘌呤霉素筛选大肠杆菌阳性转化子不仅需精确的pH值调节,而且受宿主细胞本身状态影响。

3、杀灭曲线的建立

嘌呤霉素合适的筛选浓度与细胞类型、生长状态、细胞密度、代谢情况,以及细胞所处周期等因素有关。为了筛选到稳定表达的细胞株,确定杀死未转染或感染细胞所需的最低浓度嘌呤霉素至关重要。建议初次实验一定要建立杀灭曲线(kill curve),筛选到适合自身实验体系的最优筛选浓度。

1)   于24孔板加入500 μl/孔制备好的细胞悬液,铺足够的孔以保证后续的梯度实验。37℃细胞孵育过夜。理想情况开始抗生素筛选时,细胞达到较高的密度(~60-80%),常用的细胞密度如下:

贴壁细胞:0.8 – 3.0 x 105cells/ml

悬浮细胞:2.5 – 5.0 x 105cells/ml

2)   准备筛选培养基:含梯度浓度嘌呤霉素的新鲜培养基(比如,设置0,1,2,3,4,5,6,7,8,9,10μg/ml,这11个筛选浓度,每个浓度2个复孔);

3)   将孵育过夜的细胞清洗后,更换新鲜制备的梯度筛选培养基;之后置于37℃,5%CO2培养箱内孵育;

4)   根据细胞的生长状态,约2-3天更换新鲜的筛选培养基;

5)   每日监测细胞,观察存活细胞率,从而确定抗生素筛选开始4-6天内有效杀死非转染或者所有非感染细胞的抗生素最低浓度,也就是将用到的最优筛选浓度。

【注意】:如果发现细胞开始变圆但没有从平板表面脱落可能是以下情况,

a)变圆但是未脱落是细胞开始死亡的一个信号,这些需要更长的筛选时间;

b)若在建议浓度1-10μg/ml范围内还不能完全处死细胞,此时需要检测药物是否有效,避免药物的反复冻融(<5)。

注意事项

1)   嘌呤霉素为有毒化合物,操作时需注意防护,切勿与身体或皮肤直接接触。

2)   为了您的安全和健康,请穿实验服并戴一次性手套操作。

常用筛选抗生素及其使用浓度

名称 抗性基因 有效筛选浓度(µg/mL)
潮霉素B(Hygromycin B) 大肠杆菌潮霉素抗性基因(hyg,hph) 哺乳动物细胞:200-500

细菌/植物细胞:100-300

真菌:300-1000

杀稻瘟菌素S(Blasticidin S) 蜡样芽孢杆菌的bsr基因

土曲霉的BSD基因

哺乳动物细胞:1-10

大肠杆菌:25-100

博莱霉素(Zeocin) Sh ble基因(Streptoalloteichus hindustanus bleomycin gene) 哺乳动物细胞:50-1000

大肠杆菌:25-50

酵母菌:50-300

腐草霉素(Phleomycin) Sh ble基因(Streptoalloteichus hindustanus bleomycin gene) 酵母菌:10

丝状真菌:25-150

遗传霉素(Geneticin,G418) Tn601 (903)或Tn5来源的新霉素抗性基因(neo) 哺乳动物细胞:200-2000

植物细胞:10-100

酵母细胞:500-1000

网柄菌属:10-100

嘌呤霉素(Puromycin) 链霉菌来源的嘌呤霉素N-乙酰转移酶基因(pac) 哺乳动物细胞:1-10

大肠杆菌:100-125

相关产品

货号 名称 规格           
JP0003-1G Hygromycin B潮霉素B(冻干粉) 1g
JP0003-20ML        Hygromycin B (50 mg/ml)潮霉素B(50 mg/ml) 20ml
JP0007-1ML Blasticidin S (10 mg/ml)杀稻瘟菌素S(灭瘟素)(10 mg/ml)    1ml
JP0008-1ML Phleomycin (20mg/ml)腐草霉素(20 mg/ml) 1ml
JP0009-125MG Zeocin (100mg/ml) 博莱霉素(100 mg/ml) 125mg
JP0010-1G G418 Sulfate (Geneticin) 遗传霉素 1g
JP0010-20ML G418 Sulfate (Geneticin) (50mg/mL) 遗传霉素(50mg/mL) 20ml
JP0011-25MG Puromycin Dihydrochloride 嘌呤霉素盐酸盐 25mg
 JP0124-10MG Puromycin 嘌呤霉素氨基核苷  10mg

 

 

 

规格信息

品牌:

Jinpan

CAS:

58-58-2

规格:

500mg

货期:

咨询客服

Puromycin Dihydrochloride 嘌呤霉素盐酸盐

Puromycin Dihydrochloride 嘌呤霉素盐酸盐

货号: JP0011-100MG 品牌: Jinpan 标签: 生化试剂

描述

Puromycin Dihydrochloride 嘌呤霉素盐酸盐

产品标签

Puromycin 嘌呤霉素;G418 Sulfate G418硫酸盐;Geneticin遗传霉素;Puromycin resistance gene (Pac);Blasticidin S 杀稻瘟菌素(灭瘟散);Zeocin博莱霉素;CAS:58-58-2

产品信息

产品名称 产品编号 规格 价格(元)    促销价(元)
Puromycin Dihydrochloride 嘌呤霉素盐酸盐      JP0011-25MG        25mg            540 432
Puromycin Dihydrochloride 嘌呤霉素盐酸盐 JP0011-100MG 100mg 1800 1440
Puromycin Dihydrochloride 嘌呤霉素盐酸盐 JP0011-500MG 500mg 8500 6800

产品描述

嘌呤霉素(Puromycin),来源于白黑链霉菌(Streptomyces alboniger)代谢产物的一种氨基糖苷类抗生素,

有效抑制革兰氏阳性菌生长,对抗酸杆菌的抑制活性相对较弱,但对革兰氏阴性菌的抑制活性更弱。还能抑制原生生物、藻类、哺乳动物和昆虫细胞的生长,一般2天内能杀死99%的细胞。作用机制在于:嘌呤霉素是氨酰-tRNA分子3’末端的结构类似物,能够与核糖体的A位点结合并掺入到延伸肽链中,导致肽链合成的永久终止,进而阻止蛋白质合成。嘌呤霉素还具有抗肿瘤活性。作为蛋白合成抑制剂,用来研究细胞分化中控制基因顺序表达和协同表达的转录调控机制。

对嘌呤霉素的抗性来自嘌呤霉素产生菌内发现的pac基因,其表达产物嘌呤霉素N-乙酰转移酶(puromycin N-acetyl-transferase)可通过乙酰化嘌呤霉素使其失活。这一特性使得嘌呤霉素常用来筛选和维持培养携带pac基因的哺乳动物细胞株,特别是慢病毒感染的细胞株。现在商业化的慢病毒载体多数都携带pac基因。某些情况下,也能用来筛选携带pac基因的大肠杆菌菌株。嘌呤霉素在CRISPR/Cas9基因编辑系统中也发挥重要作用。

本品为嘌呤霉素的二盐酸盐形式,CAS NO:58-58-2,粉末形式,可溶于水配制成50mg/ml储存液,0.22µm滤膜过滤除菌后,-20℃冻存。真核细胞常用的筛选浓度为1-10µg/ml。

产品特性

1)   化学名:3′-[α-Amino-p-methoxyhydrocinnamamido]-3′-deoxy-N,N-dimethyladenosine dihydrochloride

2)   同义名:Stylomycin hydrochloride; CL 13900 dihydrochloride; P638 dihydrochloride; CL16536; NSC 3055;

3)   CAS NO:58-58-2

4)   分子式:C22H29N7O5·2HCl

5)   分子量:544.43 g/mol

6)   外观:白色至灰白色粉末

7)   纯度:>98% (HPLC)

8)   熔点:175-177 °C

9)   溶解性:溶于水(50mg/ml),乙醇(~1mg/ml),DJPO(~10mg/ml),PBS,pH 7.2(~10mg/ml)

10)化学结构:Puromycin Dihydrochloride 嘌呤霉素盐酸盐 

保存与运输方法

保存:-20℃干燥保存,4年有效。

运输:冰袋运输。

使用方法

1、  储存液制备

用蒸馏水溶解嘌呤霉素配制成50 mg/ml的储存液,经0.22 μm滤膜过滤除菌,按照单次用量分装,于-20℃冻存,避免反复冻融。也可溶于甲醇,配制成10 mg/ml的储存液。

2、  建议工作浓度

哺乳动物细胞:1-10 μg/ml,最佳浓度使用宿主细胞杀灭实验(杀灭曲线)来确定;

大肠杆菌:LB琼脂培养基筛选敏感转化菌株,使用浓度为100-125μg/ml。

【注意】:使用嘌呤霉素筛选大肠杆菌阳性转化子不仅需精确的pH值调节,而且受宿主细胞本身状态影响。

3、杀灭曲线的建立

嘌呤霉素合适的筛选浓度与细胞类型、生长状态、细胞密度、代谢情况,以及细胞所处周期等因素有关。为了筛选到稳定表达的细胞株,确定杀死未转染或感染细胞所需的最低浓度嘌呤霉素至关重要。建议初次实验一定要建立杀灭曲线(kill curve),筛选到适合自身实验体系的最优筛选浓度。

1)   于24孔板加入500 μl/孔制备好的细胞悬液,铺足够的孔以保证后续的梯度实验。37℃细胞孵育过夜。理想情况开始抗生素筛选时,细胞达到较高的密度(~60-80%),常用的细胞密度如下:

贴壁细胞:0.8 – 3.0 x 105cells/ml

悬浮细胞:2.5 – 5.0 x 105cells/ml

2)   准备筛选培养基:含梯度浓度嘌呤霉素的新鲜培养基(比如,设置0,1,2,3,4,5,6,7,8,9,10μg/ml,这11个筛选浓度,每个浓度2个复孔);

3)   将孵育过夜的细胞清洗后,更换新鲜制备的梯度筛选培养基;之后置于37℃,5%CO2培养箱内孵育;

4)   根据细胞的生长状态,约2-3天更换新鲜的筛选培养基;

5)   每日监测细胞,观察存活细胞率,从而确定抗生素筛选开始4-6天内有效杀死非转染或者所有非感染细胞的抗生素最低浓度,也就是将用到的最优筛选浓度。

【注意】:如果发现细胞开始变圆但没有从平板表面脱落可能是以下情况,

a)变圆但是未脱落是细胞开始死亡的一个信号,这些需要更长的筛选时间;

b)若在建议浓度1-10μg/ml范围内还不能完全处死细胞,此时需要检测药物是否有效,避免药物的反复冻融(<5)。

注意事项

1)   嘌呤霉素为有毒化合物,操作时需注意防护,切勿与身体或皮肤直接接触。

2)   为了您的安全和健康,请穿实验服并戴一次性手套操作。

常用筛选抗生素及其使用浓度

名称 抗性基因 有效筛选浓度(µg/mL)
潮霉素B(Hygromycin B) 大肠杆菌潮霉素抗性基因(hyg,hph) 哺乳动物细胞:200-500

细菌/植物细胞:100-300

真菌:300-1000

杀稻瘟菌素S(Blasticidin S) 蜡样芽孢杆菌的bsr基因

土曲霉的BSD基因

哺乳动物细胞:1-10

大肠杆菌:25-100

博莱霉素(Zeocin) Sh ble基因(Streptoalloteichus hindustanus bleomycin gene) 哺乳动物细胞:50-1000

大肠杆菌:25-50

酵母菌:50-300

腐草霉素(Phleomycin) Sh ble基因(Streptoalloteichus hindustanus bleomycin gene) 酵母菌:10

丝状真菌:25-150

遗传霉素(Geneticin,G418) Tn601 (903)或Tn5来源的新霉素抗性基因(neo) 哺乳动物细胞:200-2000

植物细胞:10-100

酵母细胞:500-1000

网柄菌属:10-100

嘌呤霉素(Puromycin) 链霉菌来源的嘌呤霉素N-乙酰转移酶基因(pac) 哺乳动物细胞:1-10

大肠杆菌:100-125

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货号 名称 规格           
JP0003-1G Hygromycin B潮霉素B(冻干粉) 1g
JP0003-20ML        Hygromycin B (50 mg/ml)潮霉素B(50 mg/ml) 20ml
JP0007-1ML Blasticidin S (10 mg/ml)杀稻瘟菌素S(灭瘟素)(10 mg/ml)    1ml
JP0008-1ML Phleomycin (20mg/ml)腐草霉素(20 mg/ml) 1ml
JP0009-125MG Zeocin (100mg/ml) 博莱霉素(100 mg/ml) 125mg
JP0010-1G G418 Sulfate (Geneticin) 遗传霉素 1g
JP0010-20ML G418 Sulfate (Geneticin) (50mg/mL) 遗传霉素(50mg/mL) 20ml
JP0011-25MG Puromycin Dihydrochloride 嘌呤霉素盐酸盐 25mg
 JP0124-10MG Puromycin 嘌呤霉素氨基核苷  10mg

 

 

 

规格信息

品牌:

Jinpan

CAS:

58-58-2

规格:

100mg

货期:

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