Western Blot总是狂踩坑?这份实验优化试剂总结请收好!


Western Blot总是狂踩坑?这份实验优化试剂总结请收好!

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蛋白质免疫印迹法(也称蛋白印迹、免疫印迹或Western Blot)使用抗体来识别与转印膜结合的特定蛋白质靶标,利用抗体-抗原相互作用的特异性,从复杂的蛋白质混合物(例如细胞或组织裂解液)中鉴定目的蛋白。目前广泛应用于分子生物学、生物化学和免疫遗传学实验中。

然而,Western Blot步骤多、耗时长,忽略每一个细节都可能影响最终的结果。因此我们总结了一份WB专用试剂清单,全方位助您在样品准备、凝胶电泳、转膜步骤过程中避雷,提升实验效率!


◆样品制备

RIPA(Radio Immunoprecipitation Assay)裂解缓冲液,是一种传统的可用于裂解细胞或组织的快速裂解液。通常使用RIPA buffer从组织或细胞中抽提可溶性蛋白,用于后续的WB、IP、co-IP等实验。

然而,不少细胞膜上的功能性蛋白,会形成不溶性的脂筏(Lipid Raft)结构,常规的RIPA buffer不能溶解。SDS 能溶解脂筏但具有很强的变性作用,会破坏蛋白的结构和功能。UltraRIPA buffer kit则能很好地解决这个两难,使用buffer A和buffer B的组合,实现迅速、高效地提取抗去垢剂的脂筏蛋白质,且不会使蛋白失活,后续可对脂筏中蛋白进行下游分析和活性测试。


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产品编号

产品名称

规格

182-02451

RIPA Buffer

100 mL

188-02453

250 mL

F015

UltraRIPA kit for Lipid Raft
UltraRIPA 脂筏提取缓冲液套装

1 kit

◆凝胶电泳

WIDE-VIEW™ Prestained Protein Size Marker Ⅲ是预染蛋白SDS-PAGE用分子量标记,可直接使用无需稀释,可以跑出12条偶联染料的有色条带,并且不会发生弯曲,用于指示各条带的位置、判断蛋白质转膜效率。

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产品编号

产品名称

规格

236-02463

WIDE-VIEW™ Prestained Protein Size Marker Ⅲ
WIDE-VIEW™ 预染蛋白质标记Ⅲ

25 μL

230-02461

500 μL

234-02464

500 μL×3

Phos-tag™ Magenta是最受欢迎的Phos-tag™凝胶荧光染料,无需放射性物质、化学物质标签、抗体,即可在生理pH范围内对SDS-PAGE凝胶的磷酸化蛋白进行特异性染色。另还有多种颜色供选择。

产品编号

产品名称

规格

386-15221

Phos-tag™ Magenta
Phos-tag™品红荧光染料

0.2 mg

382-15201

Phos-tag™ Aqua
Phos-tag™ 浅绿荧光染料

0.2 mg

380-15241

Phos-tag™ Yellow
Phos-tag™ 黄色荧光染料

0.2 mg

389-15211

Phos-tag™ Cyan
Phos-tag™ 蓝绿荧光染料

0.2 mg

含2-巯基乙醇的传统样品缓冲液(产品编号#196-11022)适用于Laemmli体系凝胶,是一种可广泛兼容各种应用的常规缓冲液。

产品编号

产品名称

规格

196-11022

Sample Buffer Solution(2ME+)(×2)

25 mL

然而当需要分离分子量范围宽广的蛋白时,只需将独特的大范围分离缓冲液AllView PAGE Buffer替代常规电泳buffer,即可在固定浓度凝胶上实现梯度胶电泳效果,不需要花时间配梯度胶或购买昂贵的商业化梯度胶。

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产品编号

产品名称

规格

DS520

AllView PAGE Buffer

500 mL

◆蛋白质转印

为了进一步特异性检测靶蛋白,通常需要将蛋白从电泳凝胶上转印到NC膜或PVDF膜上,因此转膜是决定WB成败的最关键因素之一,转膜效率的提升对于优化实验也至关重要。高效转膜液AquaBlot™ 10×High Efficiency Transfer Buffer均通用于湿转和半干转,比传统的Towbin buffer(Tris-甘氨酸)及Towbin SDS buffer效率高。尤其适用于分析磷酸化水平的Phos-tag™凝胶的转印。

产品编号

产品名称

规格

019-26211

AquaBlot™ 10×High Efficiency Transfer Buffer 

30 mL

015-26213

1 L

Phos-tag™ Biotin是与生物素结合的Phos-tag™,不受氨基酸种类和序列的影响,可直接灵敏检测PVDF膜上的磷酸化蛋白,无需PVDF膜的封闭处理,无需预先进行电泳分离。其中以BTL-111的灵敏度最高。

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使用Phos-tag™ Biotin检测

产品编号

产品名称

规格

308-97201

Phos-tag™ BiotinBTL-111 1mM AqueousSolution

 Phos-tagWestern Blot总是狂踩坑?这份实验优化试剂总结请收好! 生物素1mM水溶液

0.1 mL

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Immuno-enhancer是免疫印迹抗原抗体反应促进剂。当抗体的反应性不理想时,Immuno-enhancer可以作为稀释液和抗体混合,促进抗原-抗体反应,提高WB检测灵敏度,获得高信噪比的成像效果。

产品编号

产品名称

规格

290-68603

Immuno-enhancer

免疫印迹抗原抗体反应促进剂

10 tests

298-68604

40 tests

还在排队等成像系统?

Enzo的WESTERNVIEW™ Detection Kit是专用于Western Blot检测的免疫印迹显色试剂。在抗体孵育后加入,无需显影、无需专用设备,即可肉眼观测到低背景、信号持久的清晰条带。无需成像设备和显影液也可使用!


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使用抗体孵育后,再用WESTERNVIEW™ Detection Kit (Anti-Mouse)显影

产品编号

产品名称

规格

ENZ-KIT182-0001

WESTERNVIEW™ Detection Kit (Anti-Mouse)

免疫印迹显色试剂盒(抗小鼠)

1 kit

ENZ-KIT183-0001

WESTERNVIEW™ Detection Kit (Anti-Rabbit)

WESTERNVIEW™检测试剂盒(抗兔)

1 kit

ENZ-KIT163-0001

WESTERNVIEW™ Dual Detection Kit (Anti-Mouse/Anti-Rabbit) 

1 kit