LDH Cytotoxicity Assay乳酸脱氢酶细胞毒性试验
简要描述：LDH细胞毒性分析试剂盒使用刃天青作为荧光指示剂来测量受损细胞释放的LDH的活性。LDH Cytotoxicity Assay乳酸脱氢酶细胞毒性试验
详细介绍
产品咨询
| 品牌 | 其他品牌 | 货号 | TBS2002 |
|---|---|---|---|
| 供货周期 | 一个月 |
应用程序
细胞增殖。 细胞和组织中的细胞毒性和LDH活性。
贮藏条件
图1:乳酸脱氢酶检测原理
图2:乳酸脱氢酶标准曲线
LDH Cytotoxicity Assay乳酸脱氢酶细胞毒性试验
标签归档：ldh
小鼠乳酸脱氢酶(LDH)ELISA kitJYM0033Mo
小鼠乳酸脱氢酶(LDH)ELISA kit
简要描述：小鼠乳酸脱氢酶(LDH)ELISA kit，产品编码：JYM0033MoMouse Lactate Dehydrogenase (LDH)ELISA Kit有效期：6个月保存条件：2-8℃
详细介绍
产品咨询
| 品牌 | 基因美 | 供货周期 | 现货 |
|---|---|---|---|
| 应用领域 | 医疗卫生,化工,生物产业,制药,综合 |
小鼠乳酸脱氢酶(LDH)ELISA kit，产品编码：JYM0033Mo
小鼠乳酸脱氢酶(LDH)ELISA kit，Mouse Lactate Dehydrogenase (LDH)ELISA Kit
【实验方法】双抗体夹心法
【种属】小鼠
【检测范围】 见说明书
【检测波长】450 nm
【样本类型】血清、血浆、组织、细胞上清及相关液体样本
【反应时间】 1.5~2h
小鼠乳酸脱氢酶（LDH）酶联免疫分析(ELISA)试剂盒使用说明书
本试剂盒仅供科研使用。
本试剂盒用于体外定量检测小鼠血清、血浆、组织、细胞上清及相关液体样本中乳酸脱氢酶（LDH）的含量.
有效期：6个月
保存条件：2-8℃
实验原理
本试剂盒应用双抗体夹心法测定标本中小鼠乳酸脱氢酶（LDH）水平。用纯化的小鼠乳酸脱氢酶（LDH）抗体包被微孔板，制成固相抗体，往包被单抗的微孔中依次加入乳酸脱氢酶（LDH），再与HRP标记的乳酸脱氢酶（LDH）抗体结合，形成抗体-抗原-酶标抗体复合物，经过洗涤后加底物TMB显色。TMB在HRP酶的催化下转化成蓝色，并在酸的作用下转化成最终的黄色。颜色的深浅和样品中的乳酸脱氢酶（LDH）呈正相关。用酶标仪在450nm波长下测定吸光度（OD值），通过标准曲线计算样品中小鼠乳酸脱氢酶（LDH）浓度.
试剂盒组成
样本处理及要求
1.血清：室温血液自然凝固 10-20 分钟，离心 20 分钟左右（2000-3000 转/分）。仔细收集上清，保存过程中如出现沉淀，应再次离心。
2. 血浆：应根据标本的要求选择 EDTA 或柠檬酸钠作为抗凝剂，混合 10-20 分钟后，离心 20 分钟左右（2000-3000 转/分）。仔细收集上清，保存过程中如有沉淀形成，应该再次离心。
3. 尿液：用无菌管收集，离心 20 分钟左右（2000-3000 转/分）。仔细收集上清，保存过程中如有沉淀形成，应再次离心。胸腹水、脑脊液参照实行。
4. 细胞培养上清：检测分泌性的成份时，用无菌管收集。离心 20 分钟左右（2000-3000转/分）。仔细收集上清。检测细胞内的成份时，用 PBS（PH7.2-7.4）稀释细胞悬液，细胞浓度达到 100 万/ml 左右。通过反复冻融，以使细胞破坏并放出细胞内成份。离心 20 分钟左右（2000-3000 转/分）。仔细收集上清。保存过程中如有沉淀形成，应再次离心.
5. 组织标本：切割标本后，称取重量。加入一定量的 PBS，PH7.4。用液氮迅速冷冻保存备用。标本融化后仍然保持 2-8℃的温度。加入一定量的 PBS（PH7.4），用手工或匀浆器将标本匀浆充分。离心 20 分钟左右（2000-3000 转/分）。仔细收集上清。分装后一份待检测，其余冷冻备用。
6. 标本采集后尽早进行提取，提取按相关文献进行，提取后应尽快进行实验。若不能马上进行试验，可将标本放于-20℃保存，但应避免反复冻融.
7. 不能检测含 NaN3 的样品，因 NaN3 抑制辣根过氧化物酶的（HRP）活性.
操作步骤
1.标准品的稀释与加样：在酶标包被板上设标准品孔 10 孔，在第一、第二孔中分别加标准品 100μl，然后在第一、第二孔中加标准品稀释液 50μl，混匀；然后从第一孔、第二孔中各取 100μl 分别加到第三孔和第四孔，再在第三、第四孔分别加标准品稀释液 50μl，混匀；然后在第三孔和第四孔中先各取 50μl 弃掉，再各取 50μl分别加到第五、第六孔中，再在第五、第六孔中分别加标准品稀释液 50ul，混匀；混匀后从第五、第六孔中各取 50μl 分别加到第七、第八孔中，再在第七、第八孔中分别加标准品稀释液 50μl，混匀后从第七、第八孔中分别取 50μl 加到第九、第十孔中，再在第九第十孔分别加标准品稀释液 50μl，混匀后从第九第十孔中各取 50μl 弃掉。（稀释后各孔加样量都为 50μl，浓度分别为 1800pg/ml, 1200pg/ml, 600pg/ml, 300pg/ml， 150pg/ml）
2. 加样：分别设空白孔（空白对照孔不加样品及酶标试剂，其余各步操作相同）、待测样品孔。在酶标包被板上待测样品孔中先加样品稀释液 40μl，然后再加待测样品 10μl（样品最终稀释度为 5 倍）。加样将样品加于酶标板孔底部，尽量不触及孔壁，轻轻晃动混匀。
3. 加酶：每孔加入酶标试剂 50ul，空白孔除外。
4. 温育：用封板膜封板后置 37℃温育 30 分钟。
5. 配液：将 30(48T 的 20 倍)倍浓缩洗涤液用蒸馏水 30(48T 的 20 倍)倍稀释后备用。
6. 洗涤：小心揭掉封板膜，弃去液体，甩干，每孔加满洗涤液，静置 30 秒后弃去，如此重复 5 次，拍干。
7. 显色：每孔先加入显色剂 A50ul，再加入显色剂 B50ul，轻轻震荡混匀，37℃避光显色 10 分钟.
8. 终止：每孔加终止液 50ul，终止反应（此时蓝色立转黄色）。
9. 测定：以空白孔调零，450nm 波长依序测量各孔的吸光度（OD 值）。 测定应在加终止液后 15分钟以内进行。
注意事项
1. 试剂盒从冷藏环境中取出应在室温平衡 15-30 分钟后方可使用，酶标包被板开封后如未用完，板条应装入密封袋中保存。
2. 浓洗涤液可能会有结晶析出，稀释时可在水浴中加温助溶，洗涤时不影响结果。
3. 各步加样均应使用加样器，并经常校对其准确性，以避免试验误差。一次加样时间最好控制在 5 分钟内，如标本数量多，推荐使用排枪加样。
4. 请每次测定的同时做标准曲线，最好做复孔。如标本中待测物质含量过高（样本 OD值大于标准品孔第一孔的 OD 值），请先用样品稀释液稀释一定倍数（n 倍）后再测定，计算时请最后乘以总稀释倍数（×n×5）。
5. 封板膜只限一次性使用，以避免交叉污染。
6. 底物请避光保存。
7. 严格按照说明书的操作进行，试验结果判定必须以酶标仪读数为准.
8. 所有样品，洗涤液和各种废弃物都应按传染物处理。
9. 本试剂不同批号组分不得混用。
10. 如与英文说明书有异，以英文说明书为准.
计算
以标准物的浓度为横坐标，OD 值为纵坐标，在坐标纸上绘出标准曲线，根据样品的 OD值由标准曲线查出相应的浓度；再乘以稀释倍数；或用标准物的浓度与 OD 值计算出标准曲线的直线回归方程式，将样品的 OD 值代入方程式，计算出样品浓度，再乘以稀释倍数，即为样品的实际浓度.
试剂盒性能
1.样品线性回归与预期浓度相关系数 R 值为 0.92 以上。
2.批内与批间应分别小于 9%和 15%.
检测范围
30pg/ml -2000pg/ml
上海金畔生物科技有限公司
-
国内试剂耗材经销代理。
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国外试剂的订购。可提供欧美实验室品牌的采购方案。
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提供加急物流处理，进口货物，最快交期1-2周。
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进出口货物代理服务。
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公司代理众多有名生命科学领域的研究试剂、仪器和实验室消耗品品牌：CELL DATA,Alamanda Polymers， cstti，Click Chemistry tools，Nanoprobes，Ancell，NANOCS，Ambeed, Inc，SPEED BioSystems, LLC，Tulip Biolabs, Inc，Torrey Pines Biolabs，magsphere ,FabGennix International ,paratechs，Medicago,Oraflow,CWE,Wasatch Photonics, alphananote, It4ip, proteoform, Caprico等,重点合作品牌 Lee Biosolutions,chematech,Nanopartz,denovix,Atto tec,macrocyclics等。
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质量保证，所有产品都提供售后服务。付款方式灵活。公司坚持“一站式”服务模式，为客户全面解决实验、生产、开发需求。公司整合国际与国内资源，加强网络建设，提高公司内部运作效率，为客户提供方便、快捷的服务。
LDH Cytotoxicity Assay Kit 乳酸脱氢酶细胞毒性检测试剂盒
LDH Cytotoxicity Assay Kit 乳酸脱氢酶细胞毒性检测试剂盒 货号： JP3235-500T 品牌： Jinpan 标签： 细胞生物学研究
描述
LDH Cytotoxicity Assay Kit
乳酸脱氢酶细胞毒性检测试剂盒
产品信息
|
产品名称 |
产品编号 | 规格 | 目录价（元） | 促销价（元） |
| 乳酸脱氢酶细胞毒性检测试剂盒 | JP3235-500T | 500T |
970 |
产品描述
乳酸脱氢酶细胞毒性检测试剂盒(LDH Cytotoxicity Assay Kit)，也称乳酸脱氢酶检测试剂盒(LDH Assay Kit)或乳酸脱氢酶释放检测试剂盒(LDH Release Assay Kit)，是一种基于diaphorase催化的INT显色反应，通过比色法检测细胞毒性时释放的乳酸脱氢酶活性或检测其它样品中的乳酸脱氢酶活性的试剂盒。
本试剂盒可以用于常规的乳酸脱氢酶活性的检测，更常用于以LDH释放为指标的细胞毒性检测。同时，基于细胞总乳酸脱氢酶活性的检测，本试剂盒也可以用于检测细胞增殖和细胞毒性检测。
细胞凋亡或坏死而造成的细胞膜结构的破坏会导致细胞浆内的酶释放到培养液里，其中包括酶活性较为稳定的乳酸脱氢酶(lactate dehydrogenase, LDH)。通过检测从质膜破裂的细胞中释放到培养液中的LDH的活性，就可以实现对细胞毒性的定量分析。LDH释放被看做细胞膜完整性的重要指标，并被广泛用于细胞毒性检测。LDH释放被认为是以前使用放射性的51Cr标记细胞，随后通过51Cr释放进行细胞膜完整性检测的安全有效的替代方法。
本试剂盒的基本原理是，在乳酸脱氢酶的作用下，NAD+被还原生成NADH，NADH和INT (2-p-iodophenyl-3-nitrophenyl tetrazolium chloride)被硫辛酰胺脱氢酶(diaphorase)催化反应生成NAD+和强生色物甲臜(formazan)，在490nm波长下产生吸收峰，从而通过比色来定量检测细胞培养液、细胞裂解液等样品中乳酸脱氢酶的活性。吸光度与乳酸脱氢酶活性成线性正相关。该酶联反应原理的示意图如下：
产品组分
|
组分编号 |
组分名称 | 规格 | 保存方法 |
|
JP3235-A |
LDH释放试剂 | 7.5ml | -20℃保存 |
|
JP3235-B |
乳酸溶液 | 10ml |
-20℃保存 |
| JP3235-C | 酶溶液 | 5ml×2 |
-20℃保存，降低反复冻融次数 |
| JP3235-D | INT溶液(10X) | 1ml |
-20℃避光保存 |
| JP3235-E | INT稀释液 | 10ml |
-20℃保存 |
保存与运输方法
保存：-20℃避光保存，1年有效。
运输：冰袋运输。
注意事项
1） 冷冻会使样品中部分乳酸脱氢酶失活，4℃可放置2-3天。建议样品准备好后尽量当天完成测定。
2） 如果检测细胞培养液中的乳酸脱氢酶，由于血清含有乳酸脱氢酶，建议血清的使用浓度不要超过1%，并最好使用热灭活血清。如果一定需要使用10%血清，在检测时一定要设置没有细胞，但加入了相同体积培养液的对照孔，以用于消除背景。
3） 细胞过度生长、密度过高、离心速度过大、培养箱内外温差过大，都会造成细胞释放乳酸脱氢酶增加。
4） 如果希望进行乳酸脱氢酶活性的绝对定量，用户需自备乳酸脱氢酶标准品。
5） 为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。
使用方法
一、样本的准备
1. LDH释放检测
1.1) 根据细胞的大小和生长速度将适量细胞接种到96孔细胞培养板中，使待检测时细胞密度不超过80-90%满。
1.2)吸去培养液，用PBS液洗涤一次。换新鲜培养液(推荐使用含1%血清的低血清培养液或适当的无血清培养液)，将各培养孔分成如下几组：包括无细胞的培养 液孔(背景空白对照孔)，未经药物处理的对照细胞孔(样品对照孔)，未经药物处理的用于后续裂解的细胞孔(样品最大酶活性对照孔)，以及药物处理的细胞 孔(药物处理样品孔)，并做好标记。按照实验需要给予适当药物处理(如加入0-10μl左右特定的药物刺激，可设置不同浓度，不同处理时间，对照孔中需加 入适当的药物溶剂对照)，继续按常规培养。到预定的检测时间点前1小时，从细胞培养箱里取出细胞培养板，在“样品最大酶活性对照孔”中加入试剂盒提供 的LDH释放试剂，加入量为原有培养液体积的10%。加入LDH释放试剂后，反复吹打数次混匀，然后继续在细胞培养箱中孵育。
1.3)到达预定时间后，将细胞培养板用多孔板离心机400g离心5min。分别取各孔的上清液120μl，加入到一新的96孔板相应孔中，随即进行样品测定。
2. 细胞内总LDH的检测
2.1) 细胞毒性检测：根据细胞的大小和生长速度将适量细胞接种到96孔细胞培养孔板中，使待检测时细胞密度不超过80-90%满。加入不同药物进行处理，并设 置适当对照。药物刺激完毕后，将细胞培养板用多孔板离心机400g离心5min。尽量吸除上清，加入150μl用PBS稀释了10倍的试剂盒提供的LDH释放试剂(10体积PBS中加入1体积LDH释放试剂并混匀)，适当摇晃培养板混匀，然后继续在细胞培养箱中孵育1小时。随后将细胞培养板用多孔板离心机400g离心5min。分 别取各孔的上清液120μl，加入到一新的96孔板相应孔中，随即进行样品测定。
2.2) .细胞增殖检测：根据细胞的大小和生长速度将适量细胞接种到96孔细胞培养孔板中，使促进细胞增殖的药物刺激后细胞不超过80-90%满为宜。使用不同的 药物刺激细胞，并设置适当对照。药物刺激完毕后，将细胞培养板用多孔板离心机400g离心5min。尽量吸除上清，加入150μl用PBS稀释了10倍的试剂盒提供 的LDH释放试剂(10体积PBS中加入1体积LDH释放试剂并混匀)，适当摇晃混匀胞，然后继续在细培养箱中孵育1小时。随后将细胞培养板用多孔板离心机400g离 心5min。分别取各孔上清液120μl，加入到一新的96孔板相应孔中，随即进行样品测定。
注：LDH释放检测更加常用一些，细胞内总LDH检测通常可以使用MTT、WST-1或CCK-8等方法替代。
二、试剂盒的准备
1) INT溶液(1X)的配置：根据所需的INT溶液(1X)的量，取适量INT溶液(10X)用INT稀释液稀释至1X。例如，取20μl INT溶液(10X)，加入180μl INT稀释液 ，混匀后即配置为200μl INT溶液(1X)。INT溶液(1X)宜现配现用，配置后4℃保存可于当天使用，不宜配置后冻存。
2) LDH检测工作液的配制:根据待测定的样品数(含对照)，参考下表在临检测前新鲜配制适量的检测工作液。
注意：LDH检测工作液必须现配现用，配制和使用过程中均要注意适当避光。
| 检测次数 | 1次 | 10次 | 20次 | 50次 |
| 乳酸溶液 | 20μl | 200μl | 400μl | 1ml |
| INT溶液(1X) | 20μl | 200μl | 400μl | 1ml |
| 酶溶液 | 20μl | 200μl | 400μl | 1ml |
| 总体积 | 60μl | 600μl | 1.2 ml | 3ml |
3) (选做)如果希望进行LDH酶活性的绝对定量，需自备LDH标准品，并新鲜配制不同浓度LDH标准品，如10mU/ml、5mU/ml、2.5mU/ml、1.25mU/ml、0.65mU/ml、0 mU/ml。
三、样品的测定
1) 各孔分别加入60μl LDH检测工作液。
2)混匀，室温(约25℃)避光孵育30min(可用铝箔包裹后置于水平摇床或侧摆摇床上缓慢摇动)。然后在490nm处测定吸光度。使用600nm或大于600nm的任一 波长作为参考波长进行双波长测定。
3)计算(测得的各组吸光度均应减去背景空白对照孔吸光度)
4)细胞毒性或死亡率(%)=(处理样品吸光度－样品对照孔吸光度) / (细胞最大酶活性的吸光度－样品对照孔吸光度)×100
5)可绘制细胞毒性曲线：纵坐标为实际吸光度，横坐标为药物浓度；据此可计算该药物作用特定时间的半致死剂量LD50。
附录I：
可同时测定一已知浓度的LDH酶标准品对应的吸光度值，参考以下公式粗略计算出样品中LDH酶活力：
待测样品中LDH活力单位(mU/ml)＝
(样品孔吸光度－背景空白对照孔吸光度) / (标准管吸光度－标准空白管吸光度)×标准品浓度(mU/ml)；
根据计算结果可以比较不同样品处理组间有无统计学差异等。
附录II：
若需准确计算出LDH酶活性的绝对活性，可通过一系列LDH标准品及相应测得的吸光度值绘制标准曲线，通过标准曲线相应公式计算出样品中LDH的酶活性。
各孔数值减去空白对照后，以检测的吸光度(OD490)为纵坐标，LDH酶活力(mU)为横坐标，绘制LDH标准曲线。同时计算出该趋势线的公式。
A490nm＝k×LDH酶活力单位(mU)＋b，通过Excel等软件计算出趋势线的斜率k和截距b。
根据上述公式计算样品中LDH活力。
样品实际吸光度(OD490)＝样品孔测得的吸光度－背景空白对照孔吸光度
检测体系中LDH酶活力单位(mU)=(OD490-b)/k
样品中LDH酶活力(mU/ml)＝检测体系中LDH酶活力单位(mU )/检测样品体积
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其他信息
| CAS: |
N/A |
|---|---|
| 规格： |
500T |
| 货期： |
咨询客服 |
LDH Cytotoxicity Assay Kit 乳酸脱氢酶细胞毒性检测试剂盒
LDH Cytotoxicity Assay Kit 乳酸脱氢酶细胞毒性检测试剂盒 货号： JP3235-500T 品牌： Jinpan 标签： 细胞生物学研究
描述
LDH Cytotoxicity Assay Kit
乳酸脱氢酶细胞毒性检测试剂盒
产品信息
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产品名称 |
产品编号 | 规格 | 目录价（元） | 促销价（元） |
| 乳酸脱氢酶细胞毒性检测试剂盒 | JP3235-500T | 500T |
970 |
产品描述
乳酸脱氢酶细胞毒性检测试剂盒(LDH Cytotoxicity Assay Kit)，也称乳酸脱氢酶检测试剂盒(LDH Assay Kit)或乳酸脱氢酶释放检测试剂盒(LDH Release Assay Kit)，是一种基于diaphorase催化的INT显色反应，通过比色法检测细胞毒性时释放的乳酸脱氢酶活性或检测其它样品中的乳酸脱氢酶活性的试剂盒。
本试剂盒可以用于常规的乳酸脱氢酶活性的检测，更常用于以LDH释放为指标的细胞毒性检测。同时，基于细胞总乳酸脱氢酶活性的检测，本试剂盒也可以用于检测细胞增殖和细胞毒性检测。
细胞凋亡或坏死而造成的细胞膜结构的破坏会导致细胞浆内的酶释放到培养液里，其中包括酶活性较为稳定的乳酸脱氢酶(lactate dehydrogenase, LDH)。通过检测从质膜破裂的细胞中释放到培养液中的LDH的活性，就可以实现对细胞毒性的定量分析。LDH释放被看做细胞膜完整性的重要指标，并被广泛用于细胞毒性检测。LDH释放被认为是以前使用放射性的51Cr标记细胞，随后通过51Cr释放进行细胞膜完整性检测的安全有效的替代方法。
本试剂盒的基本原理是，在乳酸脱氢酶的作用下，NAD+被还原生成NADH，NADH和INT (2-p-iodophenyl-3-nitrophenyl tetrazolium chloride)被硫辛酰胺脱氢酶(diaphorase)催化反应生成NAD+和强生色物甲臜(formazan)，在490nm波长下产生吸收峰，从而通过比色来定量检测细胞培养液、细胞裂解液等样品中乳酸脱氢酶的活性。吸光度与乳酸脱氢酶活性成线性正相关。该酶联反应原理的示意图如下：
产品组分
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组分编号 |
组分名称 | 规格 | 保存方法 |
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JP3235-A |
LDH释放试剂 | 7.5ml | -20℃保存 |
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JP3235-B |
乳酸溶液 | 10ml |
-20℃保存 |
| JP3235-C | 酶溶液 | 5ml×2 |
-20℃保存，降低反复冻融次数 |
| JP3235-D | INT溶液(10X) | 1ml |
-20℃避光保存 |
| JP3235-E | INT稀释液 | 10ml |
-20℃保存 |
保存与运输方法
保存：-20℃避光保存，1年有效。
运输：冰袋运输。
注意事项
1） 冷冻会使样品中部分乳酸脱氢酶失活，4℃可放置2-3天。建议样品准备好后尽量当天完成测定。
2） 如果检测细胞培养液中的乳酸脱氢酶，由于血清含有乳酸脱氢酶，建议血清的使用浓度不要超过1%，并最好使用热灭活血清。如果一定需要使用10%血清，在检测时一定要设置没有细胞，但加入了相同体积培养液的对照孔，以用于消除背景。
3） 细胞过度生长、密度过高、离心速度过大、培养箱内外温差过大，都会造成细胞释放乳酸脱氢酶增加。
4） 如果希望进行乳酸脱氢酶活性的绝对定量，用户需自备乳酸脱氢酶标准品。
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使用方法
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1.1) 根据细胞的大小和生长速度将适量细胞接种到96孔细胞培养板中，使待检测时细胞密度不超过80-90%满。
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1.3)到达预定时间后，将细胞培养板用多孔板离心机400g离心5min。分别取各孔的上清液120μl，加入到一新的96孔板相应孔中，随即进行样品测定。
2. 细胞内总LDH的检测
2.1) 细胞毒性检测：根据细胞的大小和生长速度将适量细胞接种到96孔细胞培养孔板中，使待检测时细胞密度不超过80-90%满。加入不同药物进行处理，并设 置适当对照。药物刺激完毕后，将细胞培养板用多孔板离心机400g离心5min。尽量吸除上清，加入150μl用PBS稀释了10倍的试剂盒提供的LDH释放试剂(10体积PBS中加入1体积LDH释放试剂并混匀)，适当摇晃培养板混匀，然后继续在细胞培养箱中孵育1小时。随后将细胞培养板用多孔板离心机400g离心5min。分 别取各孔的上清液120μl，加入到一新的96孔板相应孔中，随即进行样品测定。
2.2) .细胞增殖检测：根据细胞的大小和生长速度将适量细胞接种到96孔细胞培养孔板中，使促进细胞增殖的药物刺激后细胞不超过80-90%满为宜。使用不同的 药物刺激细胞，并设置适当对照。药物刺激完毕后，将细胞培养板用多孔板离心机400g离心5min。尽量吸除上清，加入150μl用PBS稀释了10倍的试剂盒提供 的LDH释放试剂(10体积PBS中加入1体积LDH释放试剂并混匀)，适当摇晃混匀胞，然后继续在细培养箱中孵育1小时。随后将细胞培养板用多孔板离心机400g离 心5min。分别取各孔上清液120μl，加入到一新的96孔板相应孔中，随即进行样品测定。
注：LDH释放检测更加常用一些，细胞内总LDH检测通常可以使用MTT、WST-1或CCK-8等方法替代。
二、试剂盒的准备
1) INT溶液(1X)的配置：根据所需的INT溶液(1X)的量，取适量INT溶液(10X)用INT稀释液稀释至1X。例如，取20μl INT溶液(10X)，加入180μl INT稀释液 ，混匀后即配置为200μl INT溶液(1X)。INT溶液(1X)宜现配现用，配置后4℃保存可于当天使用，不宜配置后冻存。
2) LDH检测工作液的配制:根据待测定的样品数(含对照)，参考下表在临检测前新鲜配制适量的检测工作液。
注意：LDH检测工作液必须现配现用，配制和使用过程中均要注意适当避光。
| 检测次数 | 1次 | 10次 | 20次 | 50次 |
| 乳酸溶液 | 20μl | 200μl | 400μl | 1ml |
| INT溶液(1X) | 20μl | 200μl | 400μl | 1ml |
| 酶溶液 | 20μl | 200μl | 400μl | 1ml |
| 总体积 | 60μl | 600μl | 1.2 ml | 3ml |
3) (选做)如果希望进行LDH酶活性的绝对定量，需自备LDH标准品，并新鲜配制不同浓度LDH标准品，如10mU/ml、5mU/ml、2.5mU/ml、1.25mU/ml、0.65mU/ml、0 mU/ml。
三、样品的测定
1) 各孔分别加入60μl LDH检测工作液。
2)混匀，室温(约25℃)避光孵育30min(可用铝箔包裹后置于水平摇床或侧摆摇床上缓慢摇动)。然后在490nm处测定吸光度。使用600nm或大于600nm的任一 波长作为参考波长进行双波长测定。
3)计算(测得的各组吸光度均应减去背景空白对照孔吸光度)
4)细胞毒性或死亡率(%)=(处理样品吸光度－样品对照孔吸光度) / (细胞最大酶活性的吸光度－样品对照孔吸光度)×100
5)可绘制细胞毒性曲线：纵坐标为实际吸光度，横坐标为药物浓度；据此可计算该药物作用特定时间的半致死剂量LD50。
附录I：
可同时测定一已知浓度的LDH酶标准品对应的吸光度值，参考以下公式粗略计算出样品中LDH酶活力：
待测样品中LDH活力单位(mU/ml)＝
(样品孔吸光度－背景空白对照孔吸光度) / (标准管吸光度－标准空白管吸光度)×标准品浓度(mU/ml)；
根据计算结果可以比较不同样品处理组间有无统计学差异等。
附录II：
若需准确计算出LDH酶活性的绝对活性，可通过一系列LDH标准品及相应测得的吸光度值绘制标准曲线，通过标准曲线相应公式计算出样品中LDH的酶活性。
各孔数值减去空白对照后，以检测的吸光度(OD490)为纵坐标，LDH酶活力(mU)为横坐标，绘制LDH标准曲线。同时计算出该趋势线的公式。
A490nm＝k×LDH酶活力单位(mU)＋b，通过Excel等软件计算出趋势线的斜率k和截距b。
根据上述公式计算样品中LDH活力。
样品实际吸光度(OD490)＝样品孔测得的吸光度－背景空白对照孔吸光度
检测体系中LDH酶活力单位(mU)=(OD490-b)/k
样品中LDH酶活力(mU/ml)＝检测体系中LDH酶活力单位(mU )/检测样品体积
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规格信息
| CAS: |
N/A |
|---|---|
| 规格： |
500T |
| 货期： |
咨询客服 |
LDH Cytotoxicity Assay Kit 乳酸脱氢酶细胞毒性检测试剂盒
LDH Cytotoxicity Assay Kit 乳酸脱氢酶细胞毒性检测试剂盒 货号： JP3235-500T 品牌： Jinpan 标签： 细胞生物学研究
描述
LDH Cytotoxicity Assay Kit
乳酸脱氢酶细胞毒性检测试剂盒
产品信息
|
产品名称 |
产品编号 | 规格 | 目录价（元） | 促销价（元） |
| 乳酸脱氢酶细胞毒性检测试剂盒 | JP3235-500T | 500T |
970 |
产品描述
乳酸脱氢酶细胞毒性检测试剂盒(LDH Cytotoxicity Assay Kit)，也称乳酸脱氢酶检测试剂盒(LDH Assay Kit)或乳酸脱氢酶释放检测试剂盒(LDH Release Assay Kit)，是一种基于diaphorase催化的INT显色反应，通过比色法检测细胞毒性时释放的乳酸脱氢酶活性或检测其它样品中的乳酸脱氢酶活性的试剂盒。
本试剂盒可以用于常规的乳酸脱氢酶活性的检测，更常用于以LDH释放为指标的细胞毒性检测。同时，基于细胞总乳酸脱氢酶活性的检测，本试剂盒也可以用于检测细胞增殖和细胞毒性检测。
细胞凋亡或坏死而造成的细胞膜结构的破坏会导致细胞浆内的酶释放到培养液里，其中包括酶活性较为稳定的乳酸脱氢酶(lactate dehydrogenase, LDH)。通过检测从质膜破裂的细胞中释放到培养液中的LDH的活性，就可以实现对细胞毒性的定量分析。LDH释放被看做细胞膜完整性的重要指标，并被广泛用于细胞毒性检测。LDH释放被认为是以前使用放射性的51Cr标记细胞，随后通过51Cr释放进行细胞膜完整性检测的安全有效的替代方法。
本试剂盒的基本原理是，在乳酸脱氢酶的作用下，NAD+被还原生成NADH，NADH和INT (2-p-iodophenyl-3-nitrophenyl tetrazolium chloride)被硫辛酰胺脱氢酶(diaphorase)催化反应生成NAD+和强生色物甲臜(formazan)，在490nm波长下产生吸收峰，从而通过比色来定量检测细胞培养液、细胞裂解液等样品中乳酸脱氢酶的活性。吸光度与乳酸脱氢酶活性成线性正相关。该酶联反应原理的示意图如下：
产品组分
|
组分编号 |
组分名称 | 规格 | 保存方法 |
|
JP3235-A |
LDH释放试剂 | 7.5ml | -20℃保存 |
|
JP3235-B |
乳酸溶液 | 10ml |
-20℃保存 |
| JP3235-C | 酶溶液 | 5ml×2 |
-20℃保存，降低反复冻融次数 |
| JP3235-D | INT溶液(10X) | 1ml |
-20℃避光保存 |
| JP3235-E | INT稀释液 | 10ml |
-20℃保存 |
保存与运输方法
保存：-20℃避光保存，1年有效。
运输：冰袋运输。
注意事项
1） 冷冻会使样品中部分乳酸脱氢酶失活，4℃可放置2-3天。建议样品准备好后尽量当天完成测定。
2） 如果检测细胞培养液中的乳酸脱氢酶，由于血清含有乳酸脱氢酶，建议血清的使用浓度不要超过1%，并最好使用热灭活血清。如果一定需要使用10%血清，在检测时一定要设置没有细胞，但加入了相同体积培养液的对照孔，以用于消除背景。
3） 细胞过度生长、密度过高、离心速度过大、培养箱内外温差过大，都会造成细胞释放乳酸脱氢酶增加。
4） 如果希望进行乳酸脱氢酶活性的绝对定量，用户需自备乳酸脱氢酶标准品。
5） 为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。
使用方法
一、样本的准备
1. LDH释放检测
1.1) 根据细胞的大小和生长速度将适量细胞接种到96孔细胞培养板中，使待检测时细胞密度不超过80-90%满。
1.2)吸去培养液，用PBS液洗涤一次。换新鲜培养液(推荐使用含1%血清的低血清培养液或适当的无血清培养液)，将各培养孔分成如下几组：包括无细胞的培养 液孔(背景空白对照孔)，未经药物处理的对照细胞孔(样品对照孔)，未经药物处理的用于后续裂解的细胞孔(样品最大酶活性对照孔)，以及药物处理的细胞 孔(药物处理样品孔)，并做好标记。按照实验需要给予适当药物处理(如加入0-10μl左右特定的药物刺激，可设置不同浓度，不同处理时间，对照孔中需加 入适当的药物溶剂对照)，继续按常规培养。到预定的检测时间点前1小时，从细胞培养箱里取出细胞培养板，在“样品最大酶活性对照孔”中加入试剂盒提供 的LDH释放试剂，加入量为原有培养液体积的10%。加入LDH释放试剂后，反复吹打数次混匀，然后继续在细胞培养箱中孵育。
1.3)到达预定时间后，将细胞培养板用多孔板离心机400g离心5min。分别取各孔的上清液120μl，加入到一新的96孔板相应孔中，随即进行样品测定。
2. 细胞内总LDH的检测
2.1) 细胞毒性检测：根据细胞的大小和生长速度将适量细胞接种到96孔细胞培养孔板中，使待检测时细胞密度不超过80-90%满。加入不同药物进行处理，并设 置适当对照。药物刺激完毕后，将细胞培养板用多孔板离心机400g离心5min。尽量吸除上清，加入150μl用PBS稀释了10倍的试剂盒提供的LDH释放试剂(10体积PBS中加入1体积LDH释放试剂并混匀)，适当摇晃培养板混匀，然后继续在细胞培养箱中孵育1小时。随后将细胞培养板用多孔板离心机400g离心5min。分 别取各孔的上清液120μl，加入到一新的96孔板相应孔中，随即进行样品测定。
2.2) .细胞增殖检测：根据细胞的大小和生长速度将适量细胞接种到96孔细胞培养孔板中，使促进细胞增殖的药物刺激后细胞不超过80-90%满为宜。使用不同的 药物刺激细胞，并设置适当对照。药物刺激完毕后，将细胞培养板用多孔板离心机400g离心5min。尽量吸除上清，加入150μl用PBS稀释了10倍的试剂盒提供 的LDH释放试剂(10体积PBS中加入1体积LDH释放试剂并混匀)，适当摇晃混匀胞，然后继续在细培养箱中孵育1小时。随后将细胞培养板用多孔板离心机400g离 心5min。分别取各孔上清液120μl，加入到一新的96孔板相应孔中，随即进行样品测定。
注：LDH释放检测更加常用一些，细胞内总LDH检测通常可以使用MTT、WST-1或CCK-8等方法替代。
二、试剂盒的准备
1) INT溶液(1X)的配置：根据所需的INT溶液(1X)的量，取适量INT溶液(10X)用INT稀释液稀释至1X。例如，取20μl INT溶液(10X)，加入180μl INT稀释液 ，混匀后即配置为200μl INT溶液(1X)。INT溶液(1X)宜现配现用，配置后4℃保存可于当天使用，不宜配置后冻存。
2) LDH检测工作液的配制:根据待测定的样品数(含对照)，参考下表在临检测前新鲜配制适量的检测工作液。
注意：LDH检测工作液必须现配现用，配制和使用过程中均要注意适当避光。
| 检测次数 | 1次 | 10次 | 20次 | 50次 |
| 乳酸溶液 | 20μl | 200μl | 400μl | 1ml |
| INT溶液(1X) | 20μl | 200μl | 400μl | 1ml |
| 酶溶液 | 20μl | 200μl | 400μl | 1ml |
| 总体积 | 60μl | 600μl | 1.2 ml | 3ml |
3) (选做)如果希望进行LDH酶活性的绝对定量，需自备LDH标准品，并新鲜配制不同浓度LDH标准品，如10mU/ml、5mU/ml、2.5mU/ml、1.25mU/ml、0.65mU/ml、0 mU/ml。
三、样品的测定
1) 各孔分别加入60μl LDH检测工作液。
2)混匀，室温(约25℃)避光孵育30min(可用铝箔包裹后置于水平摇床或侧摆摇床上缓慢摇动)。然后在490nm处测定吸光度。使用600nm或大于600nm的任一 波长作为参考波长进行双波长测定。
3)计算(测得的各组吸光度均应减去背景空白对照孔吸光度)
4)细胞毒性或死亡率(%)=(处理样品吸光度－样品对照孔吸光度) / (细胞最大酶活性的吸光度－样品对照孔吸光度)×100
5)可绘制细胞毒性曲线：纵坐标为实际吸光度，横坐标为药物浓度；据此可计算该药物作用特定时间的半致死剂量LD50。
附录I：
可同时测定一已知浓度的LDH酶标准品对应的吸光度值，参考以下公式粗略计算出样品中LDH酶活力：
待测样品中LDH活力单位(mU/ml)＝
(样品孔吸光度－背景空白对照孔吸光度) / (标准管吸光度－标准空白管吸光度)×标准品浓度(mU/ml)；
根据计算结果可以比较不同样品处理组间有无统计学差异等。
附录II：
若需准确计算出LDH酶活性的绝对活性，可通过一系列LDH标准品及相应测得的吸光度值绘制标准曲线，通过标准曲线相应公式计算出样品中LDH的酶活性。
各孔数值减去空白对照后，以检测的吸光度(OD490)为纵坐标，LDH酶活力(mU)为横坐标，绘制LDH标准曲线。同时计算出该趋势线的公式。
A490nm＝k×LDH酶活力单位(mU)＋b，通过Excel等软件计算出趋势线的斜率k和截距b。
根据上述公式计算样品中LDH活力。
样品实际吸光度(OD490)＝样品孔测得的吸光度－背景空白对照孔吸光度
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规格信息
| CAS: |
N/A |
|---|---|
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500T |
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