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同仁化学FDA试剂货号：F209 Fluorescein diacetate| 日本DOJINDO

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FDA试剂货号：F209
Fluorescein diacetate
Fluorescein diacetate
商品信息
储存条件：0-5度保存，避光
运输条件：室温
分子式：

C24H16O7

分子量：

416.38

特点：

 

● 激发和发射波长分别为488 nm和530 nm

● 可用于流式细胞仪

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选择规格：
1mg

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细胞染色

FDA试剂货号：F209 Fluorescein diacetate

FDA试剂货号：F209 Fluorescein diacetate

规格性状
产品概述
荧光特性
参考文献
常见问题Q&A

规格性状

规格

特性：该产物为白色结晶粉末或固体，可溶于二甲基亚砜。

可溶于二甲基亚砜：试验成功

NMR光谱：试验成功

产品概述

FDA可透过细胞膜并作为荧光素积蓄在活细胞内。由于荧光素较BCECF或Calcein的亲水性低，因此荧光素从细胞中渗漏的量也高。FDA也可用于流式细胞仪。荧光素的激发和发射波长分别为488 nm和530 nm。

荧光特性

荧光特性：λex=488 nm, λem=530 nm

参考文献

1) B. Rotman and B. W. Papermaster, “Membrane Properties of Living Mammalian Cells as Studied by Enzymatic Hydrolysis of Fluorogenic Esters”, Proc. Natl. Acad. Sci. USA, 1966, 55, 134.

2) H. R. Hulett, W. A. Bonner, J. Barrett and L. A. Herzenberg, “Cell Sorting: Automated Separation of Mammalian Cells as a Function of Intercellular Fluorescence”, Science, 1969, 166, 747.

3) K. H. Jones and J. A. Senft, “An Improved Method to Determine Cell Viability by Simultaneous Staining with Fluorescein Diacetate-Propidium Iodide”,J.Histochem.Cytochem., 1985, 33, 77.

4) K. McGinnes, G. Chapman, R. Marks and R. Penny, “A Fluorescence NK Assay Using Flow Cytometry”, J. Immunol. Methods, 1986, 86, 7.

5) W. M. J. Vuist, F. V. Buitenen, M. A. De Rie, A. Hekman, P. Ruemke and C. J. M. Melief, “Potentiation by Interleukin 2 of Burkitt’s Lymphoma Therapy with Anti-Pan B (Anti-CD19) Monoclonal Antibodies in a Mouse Xenotransplantation Model”, Cancer Res., 1989, 49, 3783.

6) E. Prosperi, “Intracellular Turnover of Fluorescein Diacetate. Influence of Membrane Ionic Gradients on Fluorescein Efflux”, Histochem.J., 1990, 22, 227.

常见问题Q&A

Q1:如何使用FDA。

 
 

 

 

 

A1:下面给出一个例子。请根据细胞的种类，观察条件讨论细胞的固定和试剂浓度。

【例1】HeLa细胞的形态观察

将1mg的FDA溶解在2ml的DMSO中(储存溶液)

用PBS(-)溶液稀释，设为2μmol/L。(用5ml PBS(-)稀释8μl贮存溶液)

1)用胰蛋白酶-EDTA等回收HaLa细胞，制备细胞悬浊液。

2)离心分离细胞悬浊液(1000rpm, 3min)

3)除去上清，添加PBS(-)(此时细胞数为105 ~ 106cells /mL)

4)通过粘贴等充分分散。

*因为培养液中的血清等有使背景上升的危险重复②~④的操作充分清洗。

5)在1.5 mL微管中添加用4)得到的30μL细胞悬浊液。

6)在此加入15μL的FDA溶液。

7)盖上微管，37℃下孵育15min。

8)在玻璃罩上放上7)的溶液10μL，从上面再盖上一层玻璃，夹入染色的细胞悬浊液。

9)将盖杯置于荧光显微镜下，用490nm滤光器激发，观察发出黄绿色荧光的活细胞。

例2:C57BL/6小鼠脾脏细胞的双重染色，使用FDA和PI。

k.h.j ones, j.a. senft, J.Histochem.Cytochem.， 33, 77 (1985).

将5mg的FDA溶解在1ml的丙酮中(储备溶液)

将上述0.04 mL溶液稀释为10ml PBS(-)。

PI将1mg溶解在50ml PBS(-)中。

在0.2 mL D-PBS溶液中混浊的细胞(2×106 cells/mL)溶液中添加0.1 mL的FDA溶液和0.03 mL的PI溶液。

孵化后观察。

【例3】使用HeLa细胞的细胞膜离子梯度对Fluorescein溶出的影响

·E.Prosperi, Histochem. J.， 22, 227 (1990).

将5mg的FDA溶解在1ml的丙酮中(储备溶液)

用PBS(-)，终浓度2.4μmol/L染色。
 

Q2：细胞染料的激发波长和发射波长是多少。
A2：

FDA试剂货号：F209 Fluorescein diacetate

同仁化学Fluorescein Labeling Kit – NH2试剂盒货号：LK01 荧光素标记试剂盒-氨基| 日本DOJINDO

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Fluorescein Labeling Kit – NH2试剂盒货号：LK01
荧光素标记试剂盒-氨基
Fluorescein Labeling Kit – NH2
商品信息
储存条件：0-5度保存
运输条件：室温

特点：

● 荧光素标记的产品可以在大约2小时内制备。

● 可以标记分子量为50,000或更高的蛋白质。

● 可以标记50至200μg的蛋白质。

● 可以通过使用过滤管的分离操作以高回收率获得标记物质。

● 荧光素标记的物体可以与所附的存储溶液一起存储。

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蛋白抗体标记检测方案

Fluorescein Labeling Kit – NH2试剂盒货号：LK01 荧光素标记试剂盒-氨基

Fluorescein Labeling Kit – NH2试剂盒货号：LK01 荧光素标记试剂盒-氨基

活动进行中
试剂盒内含
产品概述
原理
产品优势
荧光特性
操作步骤
标记率计算
常见问题Q&A
参考文献

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NO.4.    Annexin V, FITC Apoptosis Detection Kit    细胞凋亡检测

NO.5.    Cytotoxicity LDH Assay Kit-WST   乳酸脱氢酶(LDH)检测

 

试剂盒内含

Fluorescein Labeling Kit – NH2试剂盒货号：LK01 荧光素标记试剂盒-氨基

产品概述

该试剂盒主要用于制备用荧光素标记的蛋白质，如免疫转染中的IgG和胞内蛋白示踪。氨基反应型荧光素是试剂盒的成分之一，它含有琥珀酰亚胺基（NHS），能与蛋白质或者其它分子的氨基反应。该试剂盒中包含了标记所需的全部试剂，包括Storage buffer。每一管荧光素最多能够标记200μg的IgG，每个IgG分子可与4-6个荧光素分子共价结合。该试剂盒还包含一个缓冲液交换系统，因此含有氨基缓冲液的样品也能用此试剂盒来标记。虽然用膜来过滤有时会导致IgG聚集，但是试剂盒中的缓冲液交换系统能够防止标记过程中聚集现象的发生。用该试剂盒标记的抗体在4℃下能够保存至少2个月。被荧光素标记后的IgG的激发和发射波长分别为495nm和520nm。

原理

Fluorescein Labeling Kit – NH2试剂盒货号：LK01 荧光素标记试剂盒-氨基

产品优势

1）荧光素标记的产品可以在大约2小时内制备。

2）可以标记分子量为50,000或更高的蛋白质。

3）可以标记50至200μg的蛋白质。

4）可以通过使用过滤管的分离操作以高回收率获得标记物质。

5）荧光素标记的物体可以与所附的存储溶液一起存储。

荧光特性

Fluorescein Labeling Kit – NH2试剂盒货号：LK01 荧光素标记试剂盒-氨基

操作步骤

使用注意事项:

1. 用该试剂盒标记的蛋白质的分子量要>50,000。

2. 在标记过程中，IgG或者Fluorescein -IgG标记物始终存在于Filtration tube的滤膜上。

3. 如果IgG溶液中含有分子量>10,000的其他蛋白质，如BSA或明胶时，在使用该试剂盒标记前，先要纯化IgG溶液。IgG溶液能够用IgG Purification Kits（不包含于本试剂盒 中）来纯化。

4. 如果IgG溶液含有小的不溶物，离心后取上清液来进行标记。

5. 如果长时间不使用，建议您把试剂盒中的标记试剂NH2-reactive fluorescein放在-20℃冰箱中保存，不需要充氮气，可以更好地保持标记试剂的活性，但请不要把其它试剂和过滤管放到-20℃冰箱中，仍请放在0-5℃冰箱中保存。

Fluorescein Labeling Kit – NH2试剂盒货号：LK01 荧光素标记试剂盒-氨基

a) 样品溶液的体积不应超过100μl。如果抗体浓度低于1mg/ml，重复步骤1和2直至总的IgG聚积量达到100 μg。如果聚积过程中滤液的体积超过400μl，则在进行后续的离心操作前应除去滤液。
b) 如果溶液在离心后仍然残留在膜上，可以再离心5 min或者适当增加转速直至膜上没有残留液体。
c) NH2-Reactive Fluorescein Dye在管子的底部，向管底加入10μl DMSO，吹打数次使其溶解，如果没有DMSO的话，可以用乙醇来替代。
d) 如果IgG的量为200μg，在步骤4时加入所有的NH2-Reactive Fluorescein Dye溶液。
e) 并不一定要使用WS Buffer来回收标记产物，可以选择任何适合于该实验的缓冲液来替代。

标记率计算

计算标记率：

1分子蛋白质上结合的荧光素的数量 (标记率) 的计算方法：将标记的蛋白质溶液用5倍的中性缓冲液稀释，分别测定在280nm和各个荧光染料的最大吸收波长处的吸光度，采用以下公式计算。

Fluorescein Labeling Kit – NH2试剂盒货号：LK01 荧光素标记试剂盒-氨基

* 如果是IgG，摩尔吸光系数ε=216,000。

* 荧光染料在WS缓冲液中的摩尔吸光系数参见下表：

Fluorescein Labeling Kit – NH2试剂盒货号：LK01 荧光素标记试剂盒-氨基

常见问题Q&A

Q1:能够用这个试剂盒标记其他蛋白质吗？
A:可以。只要标记分子的分子量>50,000。
Q2:标记蛋白之前是否必须使用过滤管？
A:如果蛋白溶液中不含有带有活性氨基的小分子且蛋白浓度在10mg/ml或者70μM左右时，可以不使用过滤管来过滤，只需要将10μl 样品溶液和90μl Reaction Buffer以及8μl NH2-reactive Fluorescein（由步骤3所得）混合并按照操作说明上的方法做从步骤4开始的后续试验。
Q3:能够使用这个试剂盒标记寡核苷酸或者寡肽吗？
A:不行。寡核苷酸或者寡肽可能因为分子量太小而不能存在于滤膜上。
Q4:用该试剂盒所能标记的IgG的最小量是多少？
A:IgG的最小量为10μg。IgG的量在10μg-100μg之间时，标记比率是相同的。
Q5:标记产物能保存多久？
A:在4℃下能够保存2个月。如果需要保存更久，可以添加等量的丙三醇，并在-20℃下存放。但是，还要注意样品自身是否稳定。

参考文献

1) M. Hiyoshi, S. Suzu, Y. Yoshidomi, R. Hassan, H. Harada, N. Sakashita, H. Akari,   K. Motoyoshi and S. Okada, “Interaction between Hck and HIV-1 Nef Negatively Regulates Cell Surface Expression of M-CSF Receptor”, Blood, 2008, 111(1), 243.
2) W. Aung, A. Tsuji, H.   Sudo, A. Sugyo, T. Furukawa, Y. Ukai, Y. Kurosawa and T. Saga,   “Immunotargeting of Integrin α6β4 for Single-Photon Emission Computed   Tomography and Near-Infrared Fluorescence Imaging in a Pancreatic Cancer   Model”, Molecular Imaging, 2016, 15, 1.
3) A. Shinya, K. Yamamoto, M.   Kurata, S. Abe-Suzuki, R. Horii, F. Akiyama and M. Kitagawa, “Targeting   MCM2 function as a novel strategy for the treatment of highly malignant   breast tumors”, Oncotarget., 2015, 6, (33), 34892.
4) K.M. Nishida, T.N. Okada,   T. Kawamura, T. Mituyama, Y. Kawamura, S. Inagaki, H. Huang, D. Chen, T.   Kodama, H. Siomi and M.C. Siomi, “Functional involvement of Tudor and   dPRMT5 in the piRNA processing pathway in Drosophila germlines”, EMBO J..,   2009, 28, (24), 3820.
5) P.G. Sreekumar, R. Kannan,   M. Kitamura, C. Spee, E. Barron, S.J. Ryan and D.R. Hinton, “αB   crystallin is apically secreted within exosomes by polarized human retinal   pigment epithelium and provides neuroprotection to adjacent cells”, PLoS   ONE., 2010, 5, (10), e12578.
6) R. Asano, T. Kumagai, K.   Nagai, S. Taki, I. Shimomura, K. Arai, H. Ogata, M. Okada, F. Hayasaka, H.   Sanada, T. Nakanishi, T. Karvonen, H. Hayashi, Y. Katayose, M. Unno, T. Kudo,   M. Umetsu and I. Kumagai, “Domain order of a bispecific diabody dramatically   enhances its antitumor activity beyond structural format conversion: the case   of the hEx3 diabody”, Protein Eng. Des. Sel.., 2013, 26, (5), 359.
7) R. Asano, I. Shimomura, S.   Konno, A. Ito, Y. Masakari, R. Orimo, S. Taki, K. Arai, H. Ogata, M. Okada,   S. Furumoto, M. Onitsuka, T. Omasa, H. Hayashi, Y. Katayose, M. Unno, T.   Kudo, M. Umetsu and I. Kumagai, “Rearranging the domain order of a diabody-based   IgG-like bispecific antibody enhances its antitumor activity and improves its   degradation resistance and pharmacokinetics”, MAbs., 2014, 6, (5), 1243.
8) R. Asano, K. Ikoma, I.   Shimomura, S. Taki, T. Nakanishi, M. Umetsu and I. Kumagai, “Cytotoxic   enhancement of a bispecific diabody by format conversion to tandem   single-chain variable fragment (taFv): the case of the hEx3 diabody”, J.   Biol. Chem.., 2011, 286, (3), 1812.
9) T. Toyotome, M. Yamaguchi,   A. Iwasaki, A. Watanabe, H. Taguchi, L. Qin, H. Watanabe and K. Kamei,   “Fetuin A, a serum component, promotes growth and biofilm formation by   Aspergillus fumigatus”, Int. J. Med. Microbiol.., 2012, 302, (2), 108.
10) W. Ma, V. Schubert, M. M.   Martis, G. Hause, Z. Liu, Y. Shen, U. Conrad, W. Shi, U. Scholz, S. Taudien,   Z. Cheng and A. Houben, “The distribution of α-kleisin during meiosis in   the holocentromeric plant Luzula elegans”, Chromosome Res.., 2016, 24,   (3), 393.
11) Y. Yokoi, K. Nakamura, T. Yoneda, M.   Kikuchi, R. Sugimoto, Y. Shimizu and T. Ayabe, “Paneth cell granule   dynamics on secretory responses to bacterial stimuli in enteroids”, Sci.   Rep.., 2019, 9, 2710.
12) Y.J. Lee, S.R. Han, N.Y.   Kim, S.H. Lee, J.S. Jeong and S.W. Lee, “An RNA aptamer that binds   carcinoembryonic antigen inhibits hepatic metastasis of colon cancer cells in   mice”, Gastroenterology., 2012, 143, (1), 155.
13) C. F.O.Hoya, K. Kushiro,   Y. Yamaoka, A. Ryo and M. Takai, ‘Rapid multiplex microfiber-based   immunoassay for anti-MERS-CoV antibody detection’, Sens Biosensing Res.,   2019,10.1016/j.sbsr.2019.100304.
14) H. Takeuchi, N Sasaki, S.   Yamaga, M. Kuboniwa, M. Matsusaki and A. Amano, “Porphyromonas   gingivalis induces penetration of lipopolysaccharide and peptidoglycan   through the gingival epithelium via degradation of junctional adhesion   molecule 1”, PLoS Pathog., 2019, 15, (11), e1008124.
15) Y. Yanase, Y. Matsuo, T.   Kawaguchi, K. Ishii, A. Tanaka , K. Iwamoto , S. Takahagi and M.Hide,   “Activation of Human Peripheral Basophils in Response to High IgE   Antibody Concentrations without Antigens”., Int J Mol Med Sci, 2019, 20,   (1), 45.
16) M. Yashiro, M. Ohya, T.   Mima, Y. Nakashima, K. Kawakami, T. Sonou, K. Tatsuta, Y. Yamano, S. Negi and   T. Shigematsu, “Excessive ADAM17 activation occurs in uremic patients   and may contribute to their immunocompromised status.”, Immun Inflamm   Dis., 2020, 10.1002/iid3.298.
17) H Fujishiro, H Yamamoto,   N Otera, N Oka, M Jinno and S. Himeno, “In vitro Evaluation of The   Effects of Cadmium on Endocytic Uptakes of Proteins into Cultured Proximal   Tubule Epithelial Cells.”, Toxics, 2020, 8,10.3390/toxics8020024
18) Y. Liu, Y. Liu, X. Zheng, L. Zhao   and X. Zhang, “Recapitulating and Deciphering Tumor Microenvironment by   Using 3D Printed Plastic Brick–Like Microfluidic Cell Patterning”, Adv   Healthc Mater, 2020, 9, (6), 1901713.

荧光素标记抗隐孢子虫抗体(Fluorescein-labeled Anti-CryptosporidTBS22111

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荧光素标记抗隐孢子虫抗体(Fluorescein-labeled Anti-Cryptosporid

简要描述：荧光素标记抗隐孢子虫抗体(Fluorescein-labeled Anti-Cryptosporidium Antibody)（货号:TBS22111) ：上海金畔生物科技有限公司专业提供一站式实验产品，欢迎咨询！

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品牌 其他品牌 货号 TBS22111
供货周期 现货

荧光素标记抗隐孢子虫抗体(Fluorescein-labeled Anti-Cryptosporidium Antibody)（货号:TBS22111)

本产品利用直接免疫荧光检测原理。该产品含有针对隐孢子虫细胞壁抗原的荧光标记单克隆抗体。卵囊。试剂为1毫升1×荧光素标记的抗隐孢子虫工作溶液。
卵囊壁单克隆抗体溶液。

荧光素标记抗隐孢子虫抗体(Fluorescein-labeled Anti-CryptosporidTBS22111

 

应用程序

  • 该试剂用于检测隐孢子虫。通过粪便、水和环境样本的直接免疫荧光分析检测卵囊。

贮藏条件

标签上标明了试剂的有效期。为保持最佳性能，试剂应储存在2°C-8°C下，并在每次使用后立即放回冰箱。注意:不要冻结。

Tribioscience是一家专注于为生命科学研究实验室和公司提供试剂的生物技术公司，是一家私人控股的生物技术公司，由斯坦福大学的一群科学家于2010年创立。公司专注于为分子生物学、生物化学、免疫学、传染病、基因治疗、神经科学、动物实验和药物开发领域的生命科学研究实验室和生物技术公司提供高质量的产品。产品涵盖抗体、生化测试、ELISA试剂盒、PCR及相关试剂等。我们还为生物技术行业和学术界提供CRO（研究合同组织）服务。我们的动物建模服务已被用于动物模型开发和活泼的高排名大学的评估。

荧光素标记抗隐孢子虫抗体(Fluorescein-labeled Anti-Cryptosporidium Antibody)（货号:TBS22111)

化学试剂Fluorescein-Biotin-Azide1247

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化学试剂Fluorescein-Biotin-Azide

简要描述：化学试剂Fluorescein-Biotin-Azide销售
上海金畔生物新代理*在中国的业务，click chemistry tools代理，click chemistry tools代理，click chemis上海代理，click chemistry tools华南代理

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品牌 Click Chemistry tools 供货周期 两周
应用领域 医疗卫生,化工,生物产业,石油,制药

化学试剂Fluorescein-Biotin-Azide销售

上海金畔生物科技有限公司　是一家专注于分子生物学、细胞生物学、细菌学、遗传学、免疫学、生物化学、蛋白质学、细胞治疗、临床应用等领域，以销售为主的生物技术公司。销售的产品涉及，细胞株和菌株、胎牛血清、生化试剂、ELISA试剂盒、抗体和抗原、细胞因子、技术服务、实验耗材和消耗品、仪器设备等。


点击化学（Click chemistry）—蛋白质组学研究和新药研发的理想技术。美国一家小众里生物公司，国内通常称呼为CCT，生产有浓缩介质，代谢标记试剂，生物su标记试剂，荧光染料以及交联剂.“点击化学”的基本思想就是利用碳-杂原子成键反应快速实现分子多样性，一般由叠氮化物（azide）和炔烃（alkyne）作用形共价键，具有稳定，高特异性等优点。反应不受PH影响，能在常温条件下的水中进行,甚至能在活细胞中进行。


一种三功能的绿色荧光生物素探针，可用于同时用生物素和荧光素标记炔烃标记的生物分子。与典型的荧光标记试剂不同，叠氮化荧光素生物素（FAM Biotin Azide）还包含一个生物素基团。这些特征一起允许炔烃标记分子的可视化和亲和纯化。

分子量
1156.44
化学成分
C53H68FN9O16S
中国科学院
不适用
溶解度
二甲基亚砜、二甲基甲酰胺
外貌
橙色固体
储藏条件
-20℃。
运输条件
环境温度


试剂click chemistry tools供应 化学试剂Fluorescein-Biotin-Azide销售

Fluorescein-5-maleimide (Thiol Dye) 荧光素-5-马来酰亚胺（巯基染料）

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Fluorescein-5-maleimide (Thiol Dye) 荧光素-5-马来酰亚胺（巯基染料）

货号： JP5317-25MG 品牌： Jinpan 标签： 细胞生物学研究

描述

Fluorescein-5-maleimide (Thiol Dye) 

荧光素-5-马来酰亚胺（巯基染料）

产品标签

Fluorescein-5-maleimide 荧光素-5-马来酰亚胺；ABD-F；Thiol Dye 巯基染料； WSP-1 (H2S Probe)；CAS：75350-46-8；

产品信息

产品名称 产品编号 CAS NO.        规格             价格（元） 
Fluorescein-5-maleimide (Thiol Dye)   

荧光素-5-马来酰亚胺（巯基染料）

 JP5317-25MG    75350-46-8 25mg 1980

产品描述

荧光素-5-马来酰亚胺（Fluorescein-5-maleimide）是一种活化的荧光分子（Ex/Em=494/518nm），能非常容易的将荧光素连接到蛋白上。马来酰亚胺基团在pH 7的最佳体系内与半胱氨酸侧链上的巯基基团反应，形成一稳定的硫醚键。马来酰亚胺基团在pH 7时与游离巯基反应活性比胺基强~1000倍。而在pH＞7.5与伯胺的反应活性提高，且会发生马来酰亚胺基团水解现象。荧光素-5-马来酰亚胺能用来标记蛋白，用于检测构象变化，多亚基复合物的组装和配基结合过程。

产品特性

1）   CAS NO：75350-46-8

2）   化学名：1-(3′,6′-Dihydroxy-3-oxospiro[isobenzofuran-1(3H),9′-[9H]xanthen]-5-yl)-1H-pyrrole-2,5-dione

3）   同义名：5-Maleimido-fluorescein; 5-MF; N-(5-Fluoresceinyl)maleimide; 5-马来酰亚胺荧光素；

4）   分子式：C24H13NO7

5）   分子量：427.37

6）   纯度：＞97%

7）   Ex/Em：494/518nm

8）   外观：浅橘色至深橘色和浅红色至深红色粉末

9）   溶解性：溶于DJPO、DMF

10）  反应基团：马来酰亚胺，与巯基反应（pH 6.5-7.5）

11）化学结构图：Fluorescein-5-maleimide (Thiol Dye) 荧光素-5-马来酰亚胺（巯基染料）

保存与运输方法

保存：-20℃避光干燥保存，二年有效。

运输：冰袋运输。

注意事项

1）  马来酰亚胺对湿度很敏感。需将本品保存在-20℃，保持干燥。开盖前一定要将本品放到室温回温，以避免产品受潮而凝结成团。

2）  使用前才配制试剂。不可将试剂保存在水溶液内。

3）  用荧光素-5-马来酰亚胺标记的分子必须含有游离的巯基（-SH）。某些含巯基分子在溶液中可能被氧化，形成二硫键，从而不能与马来酰亚胺反应。二硫键可被还原生成游离巯基。还原后，大部分的还原剂必须在偶联反应前去除。

4）  偶联反应体系内不要引入含巯基组分，因其会与马来酰亚胺反应，进而抑制和降低目的分子的连接率。

5）  为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。

标记方法【仅做参考】

需根据具体应用来优化以下标记步骤。

A、 标记蛋白

1）   于20mM 磷酸钠缓冲液，150mM NaCl，pH 7.2或其他适合的缓冲液（pH 6.5-7.5）内准备含巯基样品。为了预防金属催化生成二硫键，体系内加入终浓度5-10mM的EDTA。

2）   往样品内加入摩尔量远高的荧光素-5-马来酰亚胺。通常情况，使用25倍高的摩尔比能得到理想结果。【注意】：荧光素-5-马来酰亚胺能直接加入水溶性溶液（高达1mM浓度）或首先溶解在DMF（10mM）在加入蛋白溶液中。

3）   进行偶联反应，室温2h或4℃过夜。

4）   用截留分子量（MWCO）为10 kD的脱盐柱或透析袋来去除未结合的荧光素。

5）   将偶联好的蛋白或多肽避光保存在4℃，稳定保存高达一个月。或按照单次用量分装，保存在-20℃。

 

B、 计算标记效率

【注意】：为了得到最佳的结果和精确测定标记率（F/P值），需完全去除未反应的荧光素。有必要稀释少量脱盐或透析样本。

1）   使用1cm比色皿，测定标记蛋白在280nm和495nm处的吸光值。

2）   计算蛋白浓度。

ε=蛋白摩尔吸光系数（比如，IgG的摩尔吸光系数~210,000 M-1cm-1）

Amax=A495

CF=校正系数=A280/Amax=0.3000

×稀释倍数

3）   计算标记效率

ε´=荧光素摩尔吸光系数：68,000 M-1cm-1

摩尔荧光素/摩尔蛋白= × 稀释倍数

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JP5302-1MG WSP-5 (H2S Probe)硫化氢荧光探针 1mg
JP5305-50MG Hypotaurine亚牛磺酸 50mg
JP5306-250MG DL-Propargylglycine DL-炔丙基甘氨酸 250mg         
JP5307-1MG DL-Propargylglycine (hydrochloride) DL-炔丙基甘氨酸盐酸盐 1mg
JP5308-10MG GYY 4137 (H2S Donor)硫化氢供体 10mg
JP0458-5G N-Acetyl-L-Cysteine (NAC) N-乙酰-L-半胱氨酸 5g
JP0410-25G L-Methionine L-甲硫氨酸（L-蛋氨酸） 25g
JP5517-1G DTNB ( Ellman’s Reagent) 5,5′-二硫代双(2-硝基苯甲酸) 1g
JP5315-25MG Monobromobimane (mBBr) (Thiol Dye)单溴二胺（巯基染料） 25mg
JP5316-25MG ABD-F (Thiol Dye)巯基染料 25mg
JP5317-25MG Fluorescein-5-maleimide (Thiol Dye)荧光素-5-马来酰亚胺（巯基染料）   25mg

 

 

 

 

 

规格信息

品牌：

Jinpan
CAS:

75350-46-8
规格：

25mg
货期：

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