蛋白低吸附容器系列 Proteosave™ SS

Proteosave™是一种采用 S-BIO 创新开发的光交联超亲水性聚合物，固定在塑料容器内部使其形成高密度亲水基团，能够有效抑制蛋白和肽的非特异性吸附的产品。

◆特点

●　减少样品损失，防止从容器中析出溶出物

在塑料容器内部均匀地涂抹光交联超亲水性聚合物、並风干以及通过 UV 照射，使涂膜硬化，并制造高密度亲水基团表面，从而抑制蛋白和肽的非特异性吸附，减少样品损失，并进一步防止从容器中析出溶出物

●　耐有机溶剂性与耐热性也大幅度提升

通过光交联与基体之间产生共价键，使得传统的涂抹难以实现的耐有机溶剂性和耐热性也得以保持。

◆用途

●　蛋白提取样品的制备和保存容器

理想情况下是尽量在native的状态下处理提取蛋白，并短时间内完成实验。

通过使用Proteosave™ SS可尽可能抑制提取蛋白的变性，提高回收率。

当必须延长实验时间的时候，亦可在-80°C下长期保存，并且仍能保持回收率。

●　蛋白纯化的纯化容器和色谱馏分收集器

由于吸附时瞬间发生的，即使高效地完成了一系列操作，回收率还是很低，在极端的案例中，也有在提高纯度时，目标蛋白消失的例子。

Proteosave™ SS在纯化时可作为馏分收集器，防止蛋白变性、失活和损失，并且还能作为高纯度贵重样品的保存容器。

●　蛋白定量样品的制备和反应容器

对于在痕量区域中的定量来说，吸附引起的样品本身的浓度变化也是一个问题，但也需要注意标准曲线的标准浓度变化。

由于没有办法验证其可靠性，所以可能会在没有意识的情况下相信错误的结果。

Proteosave™ SS可防止这类样品的浓度变化，提高定量结果的信赖性。

●　蛋白分析的样品制备、反应容器和色谱馏分收集器

在检测生物活性时，表面活性剂等的蛋白稳定或吸附防止剂的混入可能会抑制反应。

通过使用Proteosave™ SS，无需添加此类添加物，可在native的状态下分析样品。

此外，使用Proteosave™ SS保存的酶可以维持良好的活性，还能有效地用作蛋白酶等的酶保存、制备和反应容器。

◆应用实例

蛋白组学中的使用示例

■与其他公司低吸附产品比较LC-MS中肽的鉴定值

实验条件 容器：Proteosave™ SS 1.5 mL微管、其他公司5种 样品：肝癌细胞Hep3B来源肽 容量：300 ng 机种：nanoLC-Ultra 2D with TripleTOF® 5600 色谱柱：75 μm×150 mm, ChromXP C18-CL, 3 μm 120 Å 洗脱液：A溶液：0.1% FA and 1% CAN 洗脱液：B溶液：0.1% FA and 99% CAN 肽鉴定软件：Mascot Server 数据提供：国立研究开发法人国立癌症研究中心研究所 创药临床研究邻域 纸田正博

小分子化合物的使用案例

■比较各容器中小分子化合物的吸附

实验条件 容器：Proteosave™ SS 1.5 mL微管、无涂层1.5 mL微管 浓度：0.1 μg/mL 样品：易吸附于容器的非离子性小分子化合物 1. Digoxin（心绞痛药） 2. Paclitaxel（抗癌药） 检测方法：将样品放置于管内1 h，使用LC-MS/MS确认 Adsorption (%) = 100 – Concentration in the 0 and 1h sample / Concentration in the initial sample x 100 · 据Sekisui Medical Co., Ltd. 药物研发支持中心评估

耐有机溶剂性与耐热性/耐寒性

●　对应产品：材质为聚丙烯的产品

●　使用微管1.5 mL进行实验

■有机溶剂

	1H			5H
	10%	50%	100%	10%	50%	100%
甲醇	○	○	○	○	○	○
乙醇	○	○	○	○	○	○
2-丙醇	○	○	○	○	○	○
甘油	○	－	－	○	－	－
乙腈	○	○	○	○	○	○
丙酮	○	○	○	－	－	－
DMSO	○	－	－	－	－	－
2-巯基乙醇	○	－	－	○	－	－

○：没问题；－：未确认；×：劣化

■耐热性/耐寒性

	10 min	30 min	24 h	6 month
120℃（高温灭菌）	－	×	－	－
100℃（煮沸）	○	－	－	－
60℃	○	－	○	－
40℃	○	－	○	－
-4℃	－	－	－	○
-80℃	－	－	－	○

 ○：没问题；－：未确认；×：劣化

■表面活性剂

	0.10%	1.00%
CHAPS	○	－
TritonX	○	－
Tween20	○	－
SDS	－	○

○：没问题；－：未确认；×：劣化

◆产品列表

Proteosave™ SS（耐有机溶剂；耐热型）

产品编号	产品名称	材质	规格	包装
MS-4205MZ	Proteosave™ SS 微管0.5 mL	聚丙烯	未灭菌	500 pcs/case
MS-4255MZ	Proteosave™ SS 微管0.5 mL R		辐射灭菌	500 pcs/case
MS-4215MZ	Proteosave™ SS 微管1.5 mL		未灭菌	500 pcs/case
MS-4265MZ	Proteosave™ SS 微管1.5 mL R		辐射灭菌	500 pcs/case
MS-4201XZ	Proteosave™ SS 离心管0.5 mL		未灭菌	500 pcs/case
MS-4202XZ	Proteosave™ SS 离心管1.5 mL		未灭菌	500 pcs/case

储存温度：室温   保质期：生产后两年

Proteosave™ SS

产品编号	产品名称	材质	规格	包装
MS-52150Z※1	Proteosave™ SS 离心管15 mL	PET	未灭菌	100 pcs/case
MS-52550Z	Proteosave™ SS 离心管50 mL R	聚丙烯	辐射灭菌	100 pcs/case
MS-8296FZ	Proteosave™ SS孔板96F	聚苯乙烯	无盖，未灭菌	50 pcs/case
MS-8296VZ	Proteosave™ SS孔板96V	聚丙烯	无盖，未灭菌	20 pcs/case
MS-3296UZ	Proteosave™ SS孔板96U	聚苯乙烯	无盖，未灭菌	50 pcs/case

储存温度：室温   保质期：生产后两年

※1 规格可能温度：-80°C~40°C

※以上产品仅供实验研究用

试剂怎么用——蛋白定量

即使是为同一目的所用的试剂种类繁多，同一物质也会有不同的浓度、纯度、规格。 因此，经常有研究人员向我们问到“不知道哪一种适合自己的实验”等。 为了解决这样的问题，小光老师将介绍一些正确区分使用FUJIFILM Wako品牌试剂的方法。

◆蛋白定量试剂

在Western blotting或ELISA中，比较样品之间的蛋白表达水平时，需要评估总蛋白量。蛋白的定量方法有许多种，但需要从检测灵敏度、检测时间以及在表面活性剂和还原剂等条件下是否可检测等角度来选择合适的定量试剂和方法。

● Bradford法（Bradford assay）

CBB G-250能与蛋白质的碱性氨基酸残基、N末端氨基酸以及芳香族氨基酸形成非共价键，最大吸收波长由465 nm变为595 nm。可通过测定595 nm处的吸光度变化来定量蛋白。

● Lowry法（Lowry protein assay）

在碱性条件下，向蛋白溶液中加入双缩脲（Biuret ）试剂后，双缩脲试剂中存在的Cu（II）与蛋白形成络合物。随后添加Folin-Ciocalteu试剂，通过色氨酸、酪氨酸和半胱氨酸，使磷钨酸和磷钼酸被还原，蛋白溶液呈现蓝色。可通过测定750 nm处的吸光度来定量蛋白。

● BCA法（Bicinchoninic acid assay）

Lowry法的改良方法。在碱性条件下，Cu（II）与蛋白形成络合物，色氨酸、酪氨酸、半胱氨酸将Cu（II）还原为Cu（I）。向Cu（I）中添加二辛可宁酸（Bicinchoninic Acid），形成在562 nm处呈现出强波长吸收性的深紫色络合物。通过测定此时的吸光度来定量蛋白。

● 邻苯三酚红·钼络合物法（Pyrogallol red-molybdenum assay）

邻苯三酚红和钼（VI）结合，形成最大吸收波长为470 nm的络合物。在酸性条件下，络合物与蛋白的结合使其最大吸收波长变成约600 nm¹⁾。可通过测定600 nm处的吸光度来定量蛋白。

方法	优点	缺点
Bradford法	操作简单。 不易受还原剂和螯合剂的抑制。	受表面活性剂的抑制。
Lowry法	检测灵敏度高。	检测花费的时间长。 受还原剂（硫醇等）的抑制。
BCA法	相对灵敏度高，线性范围广。 不易受表面活性剂和变性剂的抑制。	受螯合剂和还原剂的抑制。
邻苯三酚红·钼络合物法	有效定量尿液和脑脊液中的蛋白	对小分子蛋白的反应性低。

【参考文献】

1）渡辺信⼦，⻲井幸⼦，⼤久保昭⾏，⼭中學: 臨床検査， 30（7）, 778（1986）．

2）鈴⽊祥夫: ぶんせき，1，1（2018）.

◆产品列表

产品编号	产品名称	包装
Bradford法
168-25911	Protein Assay Bradford Reagent	1 L
BCA法
297-73101	Protein Assay BCA Kit	250 tests
邻苯三酚红·钼络合物法
295-78401	Protein Assay Rapid Kit wako II	100次