如何选择适合您的ethosbiosciences细胞学染色的苏木精

对于细胞学染色，您实际上是在三种苏木精染色之一之间进行选择：Gill 1X 苏木精、Gill 2X 苏木精和Harris 苏木精，酸化。以下是您如何为细胞学染色选择最佳苏木精，以及实验室技术人员选择的两种最常见染色的方案。

识别细胞学标本中的癌细胞、感染、炎症或其他细胞异常

一般来说，渐进式吉尔苏木精适合评估细胞学标本。最常见的是，我们推荐 Gill 1X，因为它被认为是 Gill 苏木精染色剂中最浅的染色剂。它可以补充 OG 和 EA 染色，而不会过度染色标本。有时，我们发现 Gill 2X 苏木精（例如当您分析细胞学样本中的癌细胞、感染或其他细胞异常时）是正确的选择。这很大程度上取决于病理学家的偏好；如果她或他喜欢深紫色染色，Gill 2X 苏木精会更合适。 

Harris 酸化苏木精也常用于细胞学染色，并且可以逐步使用以产生可接受的结果。与 Gill's 1X 苏木精相比，这会产生更深的染色。

在我们的帖子“如何设置和进行 H&E 染色”中查找这些苏木精染色方案。

妇科巴氏涂片和非妇科细胞学标本

细胞学标本，例如巴氏涂片或支气管清洗/刷子，通常适合使用 Gill 1X 苏木精染色。这种渐进染色剂呈浅紫色，可补充方案中的 OG 和 EA 染色剂，而不会过度染色样本。对于这种样本类型，很少有比 1X Gill Hematoxylin 更强烈的染色。

Gill's 1X 和 2X 苏木精细胞学染色方案

1. 在 95% 乙醇中固定细胞涂片：15 分钟

2. 用去离子水轻轻冲洗：30 秒

3. 在苏木精溶液中染色，Gill 1X 或 Gill 2X：1½ 至 3 分钟 

4. 用去离子水轻轻冲洗：1 分钟

5. 上蓝试剂：15 至 60 秒 

6. 用去离子水轻轻冲洗：30 秒

7. 95% 乙醇：浸 10 次

8. 巴氏染色 OG-6：1 至 2 分钟 

9. 试剂酒精，95%：浸 10 次

10. 巴氏染色 EA 50 或巴氏染色 EA 65 EA：2½ 至 3 分钟 

注：数字表示染料的比例。妇科样本使用 EA 50； EA 65 用于非妇科样本。

11. 95% 乙醇，两次更换：每次浸泡 10 次

12. 100% 乙醇，两次更换：每次 1 分钟

13. 二甲苯或二甲苯替代品，两次更换：每次 1 分钟 

14. 使用丙烯酸封片剂盖玻片，并在显微镜下检查

先进的哈里斯苏木精、细胞学酸化方案以及其他几个方案可在我们的《常见实验室生物染色快速参考指南》中找到。今天就下载吧！

如果您在处理细胞学和组织学标本的实验室工作，那么您可能需要考虑使用不止一种染色剂：例如，Gill 1X 苏木精（用于细胞学）和 Gill's 3X 苏木精或 Harris（用于组织学）。确定病理学家的偏好，并根据这些指南选择适合需要的染色剂。 

抗酸杆菌染色方案

分枝杆菌细胞壁含有由分枝菌酸组成的蜡状物质。这些是链长最多 90 个碳原子的 ß-羟基羧酸。耐酸牢度的特性与任何特定物种中发现的分枝菌酸的碳链长度有关（Lyon H 1991）。

碱性品红与细菌中带负电的基团结合。分枝菌酸（和其他细胞壁脂质）对染料进入和洗脱（用溶剂洗掉）构成障碍，通过在碱性品红浓水溶液中添加亲脂剂和部分加热可以部分克服这一障碍。

技术要点： 包括一个控件

方法

1. 将工作溶液放入科普林罐中，并在 58 -60 ℃水浴中预热10 分钟。

2. 将切片脱蜡，放入水中。

3. 在水浴中预热的工作溶液中染色 15 分钟。

4. 将装有载玻片的 COPLIN JAR放入流动的冷自来水中 2 分钟。

5. 从科普林罐中取出载玻片并用流水清洗 1 分钟。

6. 在酸性酒精中进行分化，直到载玻片上不再有颜色流出。

7. 用水短暂清洗以除去酸性酒精

8. 用亚甲蓝复染 15 至 30 秒。

9. 水洗、脱水、澄清并封固在 DPX 中。

结果

• 抗酸杆菌…………………………………………红色

• 细胞核…………………………………………蓝色

• 其他组织成分…………………………..蓝色

试剂配方

1、染色液：

库存溶液 A（稳定 6 个月）

                        LOC 高泡沫（安利）……. 0.6 毫升

                        蒸馏水………………………. 100 毫升

            库存溶液B       

                        碱性品红……………………………….. 1克

                        无水乙醇…………………. 10 毫升

            这两种溶液可以作为储备溶液保存并在使用前混合。

2. 工作液（稳定1个月）

                    将 50ml A 与 5ml B 混合。

3.酸性醇——3%盐酸溶于95%乙醇

                        无水乙醇……………………. 95ml

                        蒸馏水………………….2毫升

                        浓盐酸…3毫升

            配制酒精溶液，然后加入浓酸。当

            处理浓酸。

4. 1%乙酸中的0.25%亚甲蓝

亚甲基蓝……………………0.25克

蒸馏水…………………………..99毫升

乙酸……………………………….. 1 毫升

苏木精和伊红染色试剂盒

详细介绍

产品咨询

vectorlabs复染剂和特殊染色剂组织学染色可改善目标可视化和定位，组织学染色剂和复染剂将颜色引入特定的细胞结构，以提供与有色酶底物的对比。这使得目标更容易看到，从而更容易解释组织形态和细胞结构。

苏木精和曙红染色试剂盒旨在用于组织学和细胞学应用。该套件中包含一种改良的曙红，它具有传统酒精配方的优点，并显着提高了可用性。优点包括较低的蒸发速率、更好的颜色图案以及改善的表面张力以保留在组织切片上。我们的苏木精产生清晰、深蓝色的细胞核，与伊红染色的细胞质形成最佳对比度。

规格

苏木精和伊红染色试剂盒Hematoxylin and Eosin Stain Kit

双染法免疫荧光组织化学染色步骤

如果同一标本中需要同时显示A、B两种抗原，则A抗原的抗体用FITC标记，B抗原的抗体用TRITC标记，可采用以下染色方法用过的：

免疫荧光细胞化学双染

原代培养的大鼠端脑细胞第14天胚胎：在成骨形态蛋白的诱导下，乙酰胆碱转移酶（绿色荧光）和同源结构域蛋白Islet-1（红色荧光）共存于细胞质中（激光扫描共存）。聚焦显微镜观察）

1.一步双染法，将两种荧光标记抗体按适当比例（A+B）混合，按照直接法进行染色。

2.两步双染法，先用TRITC标记的抗体A进行免疫荧光染色，然后用FITC标记的抗体B进行免疫荧光染色。根据两种抗体的动物种类，可以采用直接法或间接法。结果是A抗原呈橙红色荧光，而B抗原呈黄绿色荧光。在应用中，常用的方法是免疫荧光组织化学中的间接法与荧光染料SABC-Cy3法的结合。例如，在实验设计中，选择小鼠抗大鼠A和兔抗大鼠B作为两种不同的特异性一抗，匹配的二抗分别为FITC-抗小鼠IgG和生物素化抗兔。免疫球蛋白G。

进行双染时，由于两种一抗来源不同，可能会混合一抗。孵育后，清洗未结合的一抗。滴加二抗时，先加入人生物素化抗兔IgG（二抗）孵育。清洗后，滴下 SABC-Cy3 复合物。特异性荧光，然后与FITC-抗小鼠IgG（二抗）孵育，最后封片观察。结果，A抗原显示绿色荧光，B抗原显示红色荧光。

该方法中需要注意的是，两种一抗混合稀释时，抗体的终浓度应为每种抗体的工作浓度。也就是说，混合液要同时满足两种一抗的工作浓度。如果两个一抗来自同一物种，则必须进行两次双染，即A抗原先用第一个一抗和第一个荧光二抗染色，然后用第二个一抗和第一个荧光二抗洗涤荧光二抗。 B抗原染色需使用两种荧光二抗，否则会发生交叉反应，导致染色不特异。

酶法金相学：一种简单的新染色方法

将有机底物酶促转化为深色、不溶性反应产物被广泛用作免疫组织化学中的检测方法[1]，并且也已用于原位杂交检测[2]。尽管应用广泛，但它并不适合所有应用。产品的扩散可能会限制分辨率，并且染色的连续性可能会掩盖底层的细胞结构。与其他细胞染色剂的对比度可能低于预期，最近开发的镍基增强试剂已经解决了这个问题，该试剂与二氨基联苯胺反应产物结合，产生较暗的信号[3]。某些应用还需要比直接酶染色更高的灵敏度；这通常是通过聚合酶链式反应等扩增方法 [4] 或半抗原化底物（例如生物素化酪胺）的催化沉积来实现的[5]。然而，这大大增加了程序的长度和复杂性，并且还可能受到扩增产物的扩散的影响。

我们发现，在适当的金属源和活化剂存在的情况下，辣根过氧化物酶缀合的探针可以选择性地沉积金属，从而产生黑色的、高度局部化的染色。图 1-4 所示结果显示了新型金相基质与传统 DAB 开发在人类乳腺癌中的比较。将石蜡切片在二甲苯中脱蜡、水合并使用蒸汽热进行 HIER（抗原修复）30 分钟。用3% H ₂ O ₂封闭内源性过氧化物酶后溶液5分钟，切片与一抗孵育30分钟，随后与Envison检测试剂盒(Dako Corp)孵育30分钟。对照（图 1 和 3）用 DAB 显色剂染色 5 分钟，并用苏木精复染 2 分钟；实验切片（图 2 和 4）用金相基质处理 7-8 分钟，并用甲基绿复染。与 DAB 相比，染色的点状性质和非常低的背景结合程度是显而易见的。该方法还被发现对原位杂交检测高度敏感（图 5），并且在平行免疫印迹中产生的染色比 DAB 染色深得多（图 6）。

图 1 和图 2：对乳腺浸润性导管癌进行黄体酮受体（单克隆抗体 PR-88）染色，然后进行 (1) DAB 或 (2) 酶金相分析（条 = 50 微米）。

图 3 和 4：乳腺导管内粉刺癌，使用多克隆 c-erb-B2 一抗对 Her 2/neu 进行染色，然后进行 (3) DAB 或 (4) 酶金相分析（条 = 25 m）。

图5：中等扩增对照细胞系（4-6个拷贝）中Her-2/neu的原位杂交检测；每个点对应于该基因的一次出现。使用链霉亲和素、辣根过氧化物酶和金属沉积混合物检测的生物素化探针（放大倍数 x 1,000）。

图 6：（上）使用辣根过氧化物酶的新金相底物开发的免疫印迹。将2微克HRP沉积到硝化纤维素上，用4％BSA封闭，然后用金相基质处理； （底部）使用标准 DAB 开发的相同目标。