Taq98热启动DNA聚合酶

PCR是一种体外DNA扩增技术,其扩增原理和体内DNA复制扩增类似,都是依赖于模板DNA,特异引物和DNA聚合酶进行的。在进行PCR扩增时,我们经常会遇到很多问题,比如模板GC含量高,酶在高温下失活,引物二聚体的形成等,这一系列问题都会很大程度上影响到我们的PCR扩增结果。

美国Lucigen公司成立于1998年,主要从事于生命科学领域相关产品的研发,该公司在分子生物学领域处于领导地位。该公司主要开发出了各种分子克隆所需酶类产品以及配套的完整试剂盒。针对PCR实验过程中常遇到的三大难题:模板GC含量高和结构复杂、引物二聚体的形成及非特异性扩增条带的出现、高温下酶失活及不稳定性,Lucigen公司最新推出了一款新产品:Taq98TM Hot Start 2×Master Mix。它含有Taq98TM Hot Start DNA聚合酶,该酶具有非常好的热稳定性,可以解决以上一系列的PCR扩增难题。该产品具有四大优点:

(1)PCR由复杂变简单:GC含量高的模板或者结构复杂的模板,用普通的PCR扩增试剂是非常难得到好的结果的。Taq98TM聚合酶是解决这一难题的最好选择。Taq98热启动DNA聚合酶

(如图)。

(2)热启动形式消除了引物二聚体形成的可能。

(3)绝对的热稳定性:PCR反应增强剂大大提高了Taq98TM聚合酶的热稳定性,耐热温度高达98℃。           

产品名称

规格

货号

Taq98™ Hot Start 2X Master Mix

50 rxn

30057-0

250 rxn

30057-1

500 rxn

30057-2

(4)使用方便:配好的2×Master mix,包括了PCR反应所需的各种成分(DNA聚合酶,Mg2+,dNTP,缓冲液及PCR反应增强剂),只需要加入模板,引物,用水补足反应体系即可开始循环反应。为实验节省了大量的时间,减小了多步骤实验带来的误差。

另外,Lucigen公司的特色产品还包括CloneSmart®平端克隆试剂盒、BigEasy®线性克隆系统、pEZSeq™平端克隆试剂盒、ClonePlex™ AK文库构建试剂盒、DNA Terminator ®末端修复试剂盒、EconoTaq® DNA聚合酶及E.cloni感受态细胞等,如果你对上述相关产品或技术敢兴趣,可以直接拨打021-50837765 到上海金畔生物科技有限公司垂询相关的最优产品和解决方案,或索取相关手册和资料。我们会为您做的更多!

Nature Methods推荐PCR污染清除方法——来自德国AppliChem DNA-ExitusPlus

聚合酶链式反应(Polymerase Chain Reaction)简称PCR,是一种选择性体外扩增核酸片段的方法,经过循环复制,扩增产量是指数上升,所以具有极高的灵敏度,被广泛应用于生物和医学的科研,临床各种研究中,是目前应用最为广泛的分子生物学方法之一。

但也正是由于PCR具有极高的灵敏度,微量的核酸污染便会导致假阳性扩增结果而导致实验结果不准确,这也是广大实验者最头痛的问题,如果形成气溶胶污染扩散,则可引起整个PCR实验室的污染,处理起来非常棘手,严重的甚至要关闭实验室。环境中的核酸是主要的污染源,常见的污染源有:

1. 模板提取时真空抽干装置;
2. 超净台;
3. 电泳装置;
4. 紫外分析仪;
5. 剪刀、镊子、刀片、移液器等器械;
6. 离心机;
7. 冰箱门把手,冷冻架,门把手或实验台面等;
8. 气溶胶;
9. 高压灭菌装置;

传统的PCR污染清除方法主要有:稀酸处理法、紫外照射法、尿嘧啶糖苷酶(UNG)法、酶解变性、酒精沉淀等几种方式,但仍然存在无法彻底破坏DNA分子、试剂具有腐蚀性或者毒性、小片段核酸无法清除等不足。

方式

原理

不足

修饰

标记遗传物质,阻止聚合酶与核酸的结合,从而抑制DNA扩增。

这种标记均为可逆反应,一旦发生去修饰反应即可被聚合酶结合;试剂可能具有腐蚀性。

酶解

酶可将长链的核酸分子降解成小片段。

降解的核酸中仍有大片段存在,具有完整的遗传信息,可通过PCR扩增出完整的片段。

高压变性

高压可将核酸降解成20~30bp的小片段。

仅适用于耐高压材料,更无法应用实验操作台和大型的实验设备。

紫外照射

PCR产物中嘧啶碱基会形成二聚体,延伸终止,

仅对500bp以上长片段有效,对短片段效果不大,且并不是DNA链中所有嘧啶均能形成二聚体,且UV照射还可使二聚体断裂

德国AppliChem独家研发的DNA-ExitusPlus是一种无腐蚀、无致癌性的核酸污染清除溶液,该产品可将裸露的核酸完全降解至无法作为扩增模板的小片段,无法被扩增,且无法恢复,从而彻底消除了PCR过程中由于环境污染而导致的假阳性扩增。

DNA-ExitusPlusTM特点:

1. 产品为非酶类试剂;
2. 产品中各组分协同作用,快速、非序列特异性的降解核酸污染;
3. 所有组分可生物降解、无毒无害;
4. 不含有机溶剂或者挥发性物质,不含无机酸或者碱性物质,不会对金属形成腐蚀;
5. 使用简单,喷洒或浸泡处理15分钟即可完成清除作用;
6. 升温至50度可提高反应速度。

产品参数:

性状:无色或者浅黄色液体
保存温度:常温
运输温度:常温
效期:12个月

产品信息

货号

品名

用途

规格

A7089

DNA-ExitusPlusTM

环境中核酸污染清除

250ml/500ml/1L/2.5L

A7409

DNA-ExitusPlusTM IF (indicator free)

250ml/500ml/1L/2.5L

A8740

Derma-ExitusPlusTM

处理手,手臂,手套等

250ml

A7600

Autoclave-ExitusPlus

高压灭菌装置中核酸污染清除

6x 1 L

使用方法:

1.  实验操作台表面
直接将DNA-ExitusPlusTM喷到操作台表面作用10~15分钟,无菌湿布擦拭后即可,无需用水冲洗;

2.  仪器表面
用布或纸巾蘸取适量 DNAExitusPlusTM擦拭仪器表面,充分作用后再用干净湿布擦一遍即可。一些小的部件可在DNA-ExitusPlusTM中浸泡10min左右,然后用清水冲洗、晾干;

3.  塑料及玻璃器皿
向容器中加入足量的DNA-ExitusPlusTM,摇晃以确保器皿内壁全部接触到溶液,充分作用后弃去溶液晾干,用蒸馏水冲洗干净晾干即可;

4.  移液器
遵照移液器说明拆取移液器的管嘴连件,于DNA-ExitusPlusTM中浸泡1min,然后用清水冲洗干净晾干便可安装到移液器上;

5.  解剖刀、镊子等实验器材
先用蘸有DNA-ExitusPlusTM的布擦拭一遍,然后将镊子等器材于DNA-ExitusPlusTM中浸泡10min以上,也可通过加热到50~60℃缩短处理时间;

6.  手臂、手套等
直接将Derma-ExitusPlus(A8740对准手臂或手套进行喷雾至全部湿润,作用3~4min即可)。

此产品与方法已得到全球知名杂志与科研工作者的认可:

(1) Esser, K.-H. et al. (2006) DNA decontamination: DNA-ExitusPlus in comparison with conventional reagents. Nature Methods 3, 151

(2) Arena, A. (2010) DNA exitus plus™ versus standard bleach solution for the removal of dna contaminants on work surfaces and tools. Investigative sciences journal 2, 20-29

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