Nuclear and Cytoplasmic Protein Extraction Kit 细胞核/细胞浆蛋白抽提试剂盒

Nuclear and Cytoplasmic Protein Extraction Kit 细胞核/细胞浆蛋白抽提试剂盒

货号: MP1551-120T 品牌: Jinpan 标签: 蛋白研究

描述

Nuclear and Cytoplasmic Protein Extraction Kit

细胞核/细胞浆蛋白抽提试剂盒

 

订购信息: 更大包装或产品技术问题,请来电/在线咨询。

产品名称 产品编号 规格 价格(元)
Nuclear and Cytoplasmic Protein Extraction Kit 细胞核/细胞浆蛋白抽提试剂盒 MP1551-60T 60T 680
MP1551-120T 120T 1100

 

基本描述:

细胞核/细胞浆蛋白抽提试剂盒(Nuclear and Cytoplasmic Protein Extraction Kit)提供了一种高效的细胞裂解和抽提方法,可在90分钟内对培养细胞或新鲜组织完成细胞核蛋白与细胞浆蛋白的分离。试剂盒兼容性好,抽提得到的蛋白适合多种下游应用,包括免疫印迹(Western Blot)、凝胶迁移分析(EJPA)、蛋白分析、报告基因检测和酶活力分析。

本试剂盒使用基于试剂的分离方案:先用细胞浆蛋白抽提试剂,在低渗透压下使细胞充分膨胀,然后破坏细胞膜,促使胞浆蛋白释放;然后通过离心得到细胞核沉淀,再用高盐的细胞核蛋白抽提试剂得到核蛋白。一般情况下,细胞浆蛋白与核蛋白之间的交叉污染约10%左右,gDNA/mRNA的干扰均降到最低水平。

本试剂盒适用于培养细胞和新鲜组织细胞核/细胞浆蛋白的抽提。按照每个细胞样本(湿体积为50μl)和每个组织样本(重量50mg)来换算,试剂盒(MP1551-60T)可以抽提60个样本,试剂盒(MP1551-120T)可以抽提120个样本。本试剂盒不适合冻存组织的蛋白抽提。

产品组分

组分编号 组分名称 货号(规格)
MP1551-60T MP1551-120T
MP1551-A Cytoplasmic Extraction Reagent A 细胞浆蛋白抽提试剂A 30ml 2×30ml
MP1551-B Cytoplasmic Extraction Reagent B 细胞浆蛋白抽提试剂B 1.5ml 2×1.5ml
MP1551-C Nuclear Extraction Reagent C 细胞核蛋白抽提试剂C 15ml 2×15ml

保存与运输方法

保存:2-8℃冻存,1年稳定。

运输:冰袋运输。

注意事项

1) 建议使用广谱蛋白酶抑制剂混合物(比如:MP1610-1ML)或广谱磷酸酶抑制剂混合物(比如:MP1612-1ML)来维持提取蛋白的完整性,也可使用单一蛋白抑制剂比如:PJPF(MP1601-1ML),需根据实际的研究目的来加。

2) 抽提蛋白的所有步骤需在冰上或4℃进行。

3) 本试剂盒仅适合新鲜组织,对冻存组织的抽提效果非常差。

4) 本试剂盒抽提得到的细胞浆蛋白/细胞核蛋白都可用BCA蛋白浓度测定试剂盒进行浓度测定,但不适合Bradford蛋白浓度测定试剂盒。

5) 如果需要更浓缩更高浓度的核蛋白,提取过程中加入的胞核蛋白提取试剂C的体积可以降低2~4倍,此步不会对蛋白回收产生不利影响。

6) 为了您的安全和健康,请穿实验服并戴一次性手套操作。

使用方法

  1. 试剂准备

从冰箱取出细胞浆蛋白抽提试剂A、B和细胞核蛋白抽提试剂C,使用前根据需要加入酶抑制剂。

  1. 培养细胞的蛋白抽提

2.1 对于贴壁细胞:用细胞刮子刮下细胞,或用EDTA溶液处理细胞使得细胞贴壁不再很紧,并用移液器吹打细胞。600×g离心5min收集细胞,尽量吸尽上清,留下细胞沉淀备用。

【注意】:尽量避免用胰酶消化细胞,以免胰酶降解抽提的目的蛋白。

2.2 对于悬浮细胞:600×g离心5min收集细胞,尽量吸尽上清,留下细胞沉淀备用。

2.3 加入适量预冷的PBS重悬细胞,600×g离心5min收集细胞,尽量吸尽上清,留下细胞沉淀备用。

2.4 按照下表加入各试剂的量(规格:μl)

细胞湿体积 细胞浆蛋白抽提试剂A 细胞浆蛋白抽提试剂B 细胞核蛋白抽提试剂C
10 100 5 50
20 200 10 100
50 500 25 250
100 1000 50 500

2.5 加入细胞浆蛋白抽提试剂A,振荡混匀数秒,使细胞完全悬浮并分散开,放置在冰上孵育10~15min。

2.6 加入细胞浆蛋白提取试剂B,振荡混匀5s,冰上孵育1min。

【注意】:若胞核蛋白中掺杂胞浆蛋白,可适当延长此步的孵育时间,一般可以延长1~5min。

2.7 振荡混匀5s,16000×g离心5min。

2.8 立即吸取上清至一个预冷的离心管中,即为抽提得到的细胞浆蛋白,或置于冰上保存立即用于后续实验,或置于-80℃保存用于后续实验。

【注意】:此步千万不要触及沉淀,可以在沉淀上方保留极小体积的上清,以免触及沉淀。

2.9 对于沉淀,完全吸尽残余上清【注意:此处需完全吸尽上清,否则会引入细胞浆蛋白的污染】。加入细胞核蛋白提取试剂C,振荡混匀数秒,使沉淀完全悬浮并分散开,放回冰浴中孵育40min,期间每隔10min拿出来振荡混匀15s,16000×g离心5min。

2.10 立即吸取上清至一个预冷的离心管中,即为抽提得到的细胞核蛋白,或置于冰上保存立即用于后续实验,或置于-80℃保存用于后续实验。

  1. 新鲜组织的蛋白抽提

3.1 手术切除组织块,迅速置于预冷的PBS中,漂洗数次,滤纸吸干水分。将组织尽量切成非常细小的碎片,称重取适量组织,按照下表加入各试剂的量(规格:μl)

组织重量(mg) 细胞浆蛋白抽提试剂A 细胞浆蛋白抽提试剂B 细胞核蛋白抽提试剂C
20 200 10 100
50 500 25 250
80 800 40 400
100 1000 50 500

3.2 加入细胞浆蛋白抽提试剂A,在匀浆器内匀浆,冰上操作,直至获得均匀的悬浮液。匀浆后将匀浆液转移至一个预冷的离心管内,冰浴放置10~15min。

3.3 加入细胞浆蛋白抽提试剂B,振荡混匀5s,冰上孵育1min。

3.4 振荡混匀5s,16000×g离心5min。

3.5 立即吸取上清至一个预冷的离心管中,即为抽提得到的细胞浆蛋白,或置于冰上保存立即用于后续实验,或置于-80℃保存用于后续实验。

【注意】:此步千万不要触及沉淀,可以在沉淀上方保留极小体积的上清,以免触及沉淀。

3.6 对于沉淀,完全吸尽残余上清【注意:此处需完全吸尽上清,否则会引入细胞浆蛋白的污染】。加入细胞核蛋白提取试剂C,振荡混匀数秒,使沉淀完全悬浮并分散开,放回冰浴中孵育40min,期间每隔10min拿出来振荡混匀15s,16000×g离心5min。

3.7 立即吸取上清至一个预冷的离心管中,即为抽提得到的细胞核蛋白,或置于冰上保存立即用于后续实验,或置于-80℃保存用于后续实验。

 

相关产品

货号 名称 规格
MP1610-1ML 广谱型蛋白酶抑制剂混合物(不含EDTA,100× DJPO储液) 1ml
MP1612-1ML 广谱型磷酸酶抑制剂混合物(100×储液) 1ml
MP1613-1Pack 改进型广谱磷酸酶抑制剂混合物(100×储液) 1包
MP1601-1ML PJPF (100mM) 1ml
MP1902-500T Enhanced BCA Protein Quantification Kit BCA蛋白浓度测定试剂盒(增强型) 500T
MP1903-500T Bradford Protein Quantification Kit Bradford 蛋白浓度测定试剂盒 500T

可能遇到的问题解答

常见问题 引起原因 解决方法
提取的细胞浆蛋白量少 细胞没裂解完全 增加胞浆蛋白抽提试剂的量
细胞没完全分散开 剧烈震荡完全混匀细胞
组织没充分匀浆 匀浆充分
提取的细胞核蛋白量少 细胞核沉淀没分散开 剧烈震荡完全混匀细胞核沉淀
细胞核量少 增加离心时间
蛋白活性低或没有活性 样品没低温保存 低温处理样品
样品中蛋白酶的存在 加入酶抑制剂
细胞浆与核蛋白交叉 细胞浆蛋白裂解时间过长 减少加入细胞浆蛋白抽提试剂A和 B 后的孵育时间
细胞浆蛋白溶液没有完全吸干净 小心吸干净细胞浆蛋白溶液
取上清时吸入少量的胞核沉淀 小心吸干净细胞浆蛋白溶液

 

 

 

规格信息

品牌:

Jinpan

CAS:

N/A

规格:

120T

货期:

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Nuclear and Cytoplasmic Protein Extraction Kit 细胞核/细胞浆蛋白抽提试剂盒

Nuclear and Cytoplasmic Protein Extraction Kit 细胞核/细胞浆蛋白抽提试剂盒

货号: MP1551-60T 品牌: Jinpan 标签: 蛋白研究

描述

Nuclear and Cytoplasmic Protein Extraction Kit

细胞核/细胞浆蛋白抽提试剂盒

 

订购信息: 更大包装或产品技术问题,请来电/在线咨询。

产品名称 产品编号 规格 价格(元)
Nuclear and Cytoplasmic Protein Extraction Kit 细胞核/细胞浆蛋白抽提试剂盒 MP1551-60T 60T 680
MP1551-120T 120T 1100

 

基本描述:

细胞核/细胞浆蛋白抽提试剂盒(Nuclear and Cytoplasmic Protein Extraction Kit)提供了一种高效的细胞裂解和抽提方法,可在90分钟内对培养细胞或新鲜组织完成细胞核蛋白与细胞浆蛋白的分离。试剂盒兼容性好,抽提得到的蛋白适合多种下游应用,包括免疫印迹(Western Blot)、凝胶迁移分析(EJPA)、蛋白分析、报告基因检测和酶活力分析。

本试剂盒使用基于试剂的分离方案:先用细胞浆蛋白抽提试剂,在低渗透压下使细胞充分膨胀,然后破坏细胞膜,促使胞浆蛋白释放;然后通过离心得到细胞核沉淀,再用高盐的细胞核蛋白抽提试剂得到核蛋白。一般情况下,细胞浆蛋白与核蛋白之间的交叉污染约10%左右,gDNA/mRNA的干扰均降到最低水平。

本试剂盒适用于培养细胞和新鲜组织细胞核/细胞浆蛋白的抽提。按照每个细胞样本(湿体积为50μl)和每个组织样本(重量50mg)来换算,试剂盒(MP1551-60T)可以抽提60个样本,试剂盒(MP1551-120T)可以抽提120个样本。本试剂盒不适合冻存组织的蛋白抽提。

产品组分

组分编号 组分名称 货号(规格)
MP1551-60T MP1551-120T
MP1551-A Cytoplasmic Extraction Reagent A 细胞浆蛋白抽提试剂A 30ml 2×30ml
MP1551-B Cytoplasmic Extraction Reagent B 细胞浆蛋白抽提试剂B 1.5ml 2×1.5ml
MP1551-C Nuclear Extraction Reagent C 细胞核蛋白抽提试剂C 15ml 2×15ml

保存与运输方法

保存:2-8℃冻存,1年稳定。

运输:冰袋运输。

注意事项

1) 建议使用广谱蛋白酶抑制剂混合物(比如:MP1610-1ML)或广谱磷酸酶抑制剂混合物(比如:MP1612-1ML)来维持提取蛋白的完整性,也可使用单一蛋白抑制剂比如:PJPF(MP1601-1ML),需根据实际的研究目的来加。

2) 抽提蛋白的所有步骤需在冰上或4℃进行。

3) 本试剂盒仅适合新鲜组织,对冻存组织的抽提效果非常差。

4) 本试剂盒抽提得到的细胞浆蛋白/细胞核蛋白都可用BCA蛋白浓度测定试剂盒进行浓度测定,但不适合Bradford蛋白浓度测定试剂盒。

5) 如果需要更浓缩更高浓度的核蛋白,提取过程中加入的胞核蛋白提取试剂C的体积可以降低2~4倍,此步不会对蛋白回收产生不利影响。

6) 为了您的安全和健康,请穿实验服并戴一次性手套操作。

使用方法

  1. 试剂准备

从冰箱取出细胞浆蛋白抽提试剂A、B和细胞核蛋白抽提试剂C,使用前根据需要加入酶抑制剂。

  1. 培养细胞的蛋白抽提

2.1 对于贴壁细胞:用细胞刮子刮下细胞,或用EDTA溶液处理细胞使得细胞贴壁不再很紧,并用移液器吹打细胞。600×g离心5min收集细胞,尽量吸尽上清,留下细胞沉淀备用。

【注意】:尽量避免用胰酶消化细胞,以免胰酶降解抽提的目的蛋白。

2.2 对于悬浮细胞:600×g离心5min收集细胞,尽量吸尽上清,留下细胞沉淀备用。

2.3 加入适量预冷的PBS重悬细胞,600×g离心5min收集细胞,尽量吸尽上清,留下细胞沉淀备用。

2.4 按照下表加入各试剂的量(规格:μl)

细胞湿体积 细胞浆蛋白抽提试剂A 细胞浆蛋白抽提试剂B 细胞核蛋白抽提试剂C
10 100 5 50
20 200 10 100
50 500 25 250
100 1000 50 500

2.5 加入细胞浆蛋白抽提试剂A,振荡混匀数秒,使细胞完全悬浮并分散开,放置在冰上孵育10~15min。

2.6 加入细胞浆蛋白提取试剂B,振荡混匀5s,冰上孵育1min。

【注意】:若胞核蛋白中掺杂胞浆蛋白,可适当延长此步的孵育时间,一般可以延长1~5min。

2.7 振荡混匀5s,16000×g离心5min。

2.8 立即吸取上清至一个预冷的离心管中,即为抽提得到的细胞浆蛋白,或置于冰上保存立即用于后续实验,或置于-80℃保存用于后续实验。

【注意】:此步千万不要触及沉淀,可以在沉淀上方保留极小体积的上清,以免触及沉淀。

2.9 对于沉淀,完全吸尽残余上清【注意:此处需完全吸尽上清,否则会引入细胞浆蛋白的污染】。加入细胞核蛋白提取试剂C,振荡混匀数秒,使沉淀完全悬浮并分散开,放回冰浴中孵育40min,期间每隔10min拿出来振荡混匀15s,16000×g离心5min。

2.10 立即吸取上清至一个预冷的离心管中,即为抽提得到的细胞核蛋白,或置于冰上保存立即用于后续实验,或置于-80℃保存用于后续实验。

  1. 新鲜组织的蛋白抽提

3.1 手术切除组织块,迅速置于预冷的PBS中,漂洗数次,滤纸吸干水分。将组织尽量切成非常细小的碎片,称重取适量组织,按照下表加入各试剂的量(规格:μl)

组织重量(mg) 细胞浆蛋白抽提试剂A 细胞浆蛋白抽提试剂B 细胞核蛋白抽提试剂C
20 200 10 100
50 500 25 250
80 800 40 400
100 1000 50 500

3.2 加入细胞浆蛋白抽提试剂A,在匀浆器内匀浆,冰上操作,直至获得均匀的悬浮液。匀浆后将匀浆液转移至一个预冷的离心管内,冰浴放置10~15min。

3.3 加入细胞浆蛋白抽提试剂B,振荡混匀5s,冰上孵育1min。

3.4 振荡混匀5s,16000×g离心5min。

3.5 立即吸取上清至一个预冷的离心管中,即为抽提得到的细胞浆蛋白,或置于冰上保存立即用于后续实验,或置于-80℃保存用于后续实验。

【注意】:此步千万不要触及沉淀,可以在沉淀上方保留极小体积的上清,以免触及沉淀。

3.6 对于沉淀,完全吸尽残余上清【注意:此处需完全吸尽上清,否则会引入细胞浆蛋白的污染】。加入细胞核蛋白提取试剂C,振荡混匀数秒,使沉淀完全悬浮并分散开,放回冰浴中孵育40min,期间每隔10min拿出来振荡混匀15s,16000×g离心5min。

3.7 立即吸取上清至一个预冷的离心管中,即为抽提得到的细胞核蛋白,或置于冰上保存立即用于后续实验,或置于-80℃保存用于后续实验。

 

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货号 名称 规格
MP1610-1ML 广谱型蛋白酶抑制剂混合物(不含EDTA,100× DJPO储液) 1ml
MP1612-1ML 广谱型磷酸酶抑制剂混合物(100×储液) 1ml
MP1613-1Pack 改进型广谱磷酸酶抑制剂混合物(100×储液) 1包
MP1601-1ML PJPF (100mM) 1ml
MP1902-500T Enhanced BCA Protein Quantification Kit BCA蛋白浓度测定试剂盒(增强型) 500T
MP1903-500T Bradford Protein Quantification Kit Bradford 蛋白浓度测定试剂盒 500T

可能遇到的问题解答

常见问题 引起原因 解决方法
提取的细胞浆蛋白量少 细胞没裂解完全 增加胞浆蛋白抽提试剂的量
细胞没完全分散开 剧烈震荡完全混匀细胞
组织没充分匀浆 匀浆充分
提取的细胞核蛋白量少 细胞核沉淀没分散开 剧烈震荡完全混匀细胞核沉淀
细胞核量少 增加离心时间
蛋白活性低或没有活性 样品没低温保存 低温处理样品
样品中蛋白酶的存在 加入酶抑制剂
细胞浆与核蛋白交叉 细胞浆蛋白裂解时间过长 减少加入细胞浆蛋白抽提试剂A和 B 后的孵育时间
细胞浆蛋白溶液没有完全吸干净 小心吸干净细胞浆蛋白溶液
取上清时吸入少量的胞核沉淀 小心吸干净细胞浆蛋白溶液

 

 

 

规格信息

品牌:

Jinpan

CAS:

N/A

规格:

60T

货期:

2天