TMB/辣根过氧化物酶底物/四甲基联苯胺
DAB/辣根过氧化物酶底物/二氨基联苯胺
酶免技术常应用的酶有辣根过氧化酶和碱性磷酸酶，针对不同的酶，所作用的底物是不同的。
常用的HRP的底物有邻苯二胺（OPD）、四甲基联苯胺（TMB）和ABTS等。其中OPD主要用于ELISA试验，灵敏度高，比色方便。其缺点是配成应用液后稳定性差，而且具有致癌性。TMB是常用HRP酶的显色底物 western blot、Elisa等实验的显色试剂，是一种优于OPD的新型HRP色原底物，经酶作用后由无色变蓝色，目测对比鲜明；加酸停止酶反应后变黄色，可在比色计中定量；因此应用日见增多。
DAB可用于检测过氧化物酶(peroxidase)活性，是辣根过氧化物酶等过氧化物酶的显色底物。经过氧化物酶催化后可产生不溶性棕色产物。可以用于基于过氧化物酶检测的免疫组化、Western等的显色检测。
ABTS是一种水溶性HRP底物，在过氧化物酶的作用下产生绿色终产物。该绿色产物在410nm及650nm具有两个主要吸收峰。在ELISA应用中，ABTS的灵敏度比OPD和TMB稍差。它会被缓慢氧化并显色。相对于OPD或TMB底物高灵敏度造成的不可接受的高背景，虽然灵敏度不如OPD和TMB，但空白值很低。
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