大鼠γ谷氨酰转肽酶(GGT)酶联免疫检测试剂盒介绍
用 途：用于大鼠血清、血浆及相关液体样本中γ谷氨酰转肽酶(GGT)测定。
工作原理
本试剂盒采用的是生物素双抗体夹心酶联免疫吸附法（ELISA）测定样品中大鼠γ谷氨酰转肽酶(GGT)水平。向预先包被了大鼠γ谷氨酰转肽酶(GGT)单克隆抗体的酶标孔中加入大鼠γ谷氨酰转肽酶(GGT)，温育；温育后，加入生物素标记的抗γ谷氨酰转肽酶(GGT)抗体。再与链霉亲和素-HRP结合，形成免疫复合物，再经过温育和洗涤，去除未结合的酶，然后加入底物A、B，产生蓝色，并在酸的作用下转化成最终的黄色。颜色的深浅与样品中大鼠γ谷氨酰转肽酶(GGT)的浓度呈正相关。
试剂盒组成
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试剂盒组成
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48孔配置
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96孔配置
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保存
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说明书
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1份
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1份
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封板膜
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2片（48）
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2片（96）
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密封袋
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1个
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1个
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酶标包被板
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1×48
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1×96
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2-8℃保存
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标准品800ng/L
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0.5ml×1瓶
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0.5ml×1瓶
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2-8℃保存
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标准品稀释液
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3ml×1瓶
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6ml×1瓶
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2-8℃保存
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链霉亲和素-HRP
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3 ml×1瓶
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6 ml×1瓶
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2-8℃保存
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生物素标记的抗GGT抗体
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0.5ml×1瓶
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1 ml×1瓶
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2-8℃保存
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显色剂A液
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3 ml×1瓶
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6 ml×1瓶
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2-8℃保存
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显色剂B液
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3 ml×1瓶
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6 ml×1瓶
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2-8℃保存
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终止液
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3ml×1瓶
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6ml×1瓶
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2-8℃保存
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浓缩洗涤液
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（20ml×20倍）×1瓶
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（20ml×30倍）×1瓶
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2-8℃保存
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需要而未提供的试剂和器材
1． 37℃恒温箱。
2． 标准规格酶标仪。
3． 精密移液器及一次性吸头
4． 蒸馏水，
5． 一次性试管
6． 吸水纸
注意事项
1． 从2-8℃取出的试剂盒，在开启试剂盒之前要室温平衡至少30分钟。酶标包被板开封后如未用完，板条应装入密封袋中保存。
2． 各步加样均应使用加样器，并经常校对其准确性，以避免试验误差
3． 严格按照说明书的操作进行，试验结果判定必须以酶标仪读数为准.
4． 为避免交叉污染，要避免重复使用手中的吸头和封板膜。
5． 不用的其它试剂应包装好或盖好。不同批号的试剂不要混用。保质前使用。
6． 底物B对光敏感，避免长时间暴露于光下。
洗板方法
手工洗板方法：甩掉酶标板内的液体；在实验台上铺垫几层吸水纸，酶标板朝下用力拍几次；将稀释后的洗涤液至少0.35ml注入孔内，浸泡1-2分钟。根据需要，重复此过程数次。
自动洗板：如果有自动洗板机，应在熟练使用后再用到正式实验过程中
标本要求
1．不能检测含NaN3的样品，因NaN3抑制辣根过氧化物酶的（HRP）活性。
2．标本采集后尽早进行提取，提取按相关文献进行，提取后应尽快进行实验。若不能马上进行试验，可将标本放于-20℃保存，但应避免反复冻融。
操作程序
1. 标准品的稀释：(本试剂盒提供原倍标准品一支，用户可按照下列图表在小试管中进行稀释。)
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400ng/L
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5号标准品
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120μl的原倍标准品加入120μl标准品稀释液
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200ng/L
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4号标准品
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120μl的5号标准品加入120μl标准品稀释液
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100ng/L
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3号标准品
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120μl的4号标准品加入120μl标准品稀释液
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50ng/L
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2号标准品
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120μl的3号标准品加入120μl标准品稀释液
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25ng/L
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1号标准品
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120μl的2号标准品加入120μl标准品稀释液
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2. 根据待测样品数量加上标准品的数量决定所需的板条数。每个标准品和空白孔建议做复孔。每个样品根据自己的数量来定，能使用复孔的尽量做复孔。
3. 加样：1）空白孔，空白对照孔不加样品，生物素标记的抗GGT抗体，链霉亲和素-HRP，只加显色剂A&B和终止液，其余各步操作相同；2）标准品孔：加入标准品50ul，链霉亲和素-HRP50ul(标准品中已事先整合好生物素抗体，故不加)；3）待测样品孔：加入样本40ul，然后各加入抗GGT抗体10ul、链霉亲和素-HRP50ul，盖上封板膜，轻轻震荡混匀，37℃温育60分钟。
4. 配液：将30倍浓缩洗涤液用蒸馏水30倍稀释后备用。
5. 洗涤：小心揭掉封板膜，弃去液体，甩干，每孔加满洗涤液，静置30秒后弃去，如此重复5次，拍干。
6. 显色：每孔先加入显色剂A50ul，再加入显色剂B50μl，轻轻震荡混匀，37℃避光显色15分钟.
7. 终止：每孔加终止液50μl，终止反应（此时蓝色立转黄色）。
8. 测定：以空白空调零，450nm波长依序测量各孔的吸光度（OD值）。 测定应在加终止液后10分钟以内进行。
9. 根据标准品的浓度及对应的OD值计算出标准曲线的直线回归方程，再根据样品的OD值在回归方程上计算出对应的样品浓度。也可以使用各种应用软件来计算。
操作程序总结：
1.准备试剂，样品和标准品
2.加入准备好的样品和标准品，生物素标记的二抗和酶标试剂，37℃反应60分钟
3.洗板5次，加入显色液A、B，37℃显色15分钟
4.加入终止液
5.10分钟内读OD值
6.计算
试剂盒性能：
1.样品线性回归与预期浓度相关系数R值为0.92以上。
2.批内与批间应分别小于9%和15%
检测范围：
检测范围：10 ng/L -450 ng/L
保存条件及有效期：
保存：2-8℃。
有效期：6个月(2-8℃)。
