α-1-抗胰蛋白酶缺乏症和自身免疫性疾病关联介绍
α-1-抗胰蛋白酶治疗1型糖尿病(T1D)
α-1-抗胰蛋白酶治疗类风湿性关节炎(RA)
α-1-抗胰蛋白酶治疗系统性红斑狼疮
结论
蛋白酶抑制 与炎症介质的相互作用 基因表达的改变 抑制自身抗体的产生 树突细胞成熟和功能的抑制
α-1-抗胰蛋白酶缺乏症和自身免疫性疾病关联介绍
protean重组蛋白——Pro3C HRV-3C 蛋白酶介绍
Pro3C (HRV-3C, Prescission) 蛋白酶是一种来自人鼻病毒 3C (HRV3C) 的转基因序列特异性半胱氨酸蛋白酶。由于其高序列特异性,它经常用于融合蛋白的切割以及体外和体内重组蛋白的标签去除。
这种重组蛋白酶是人鼻病毒 3C 的基因改良版本。它包含位于蛋白质 N 末端的 His6 标签,使其能够固定在 Ni 基亲和树脂上并从裂解反应中去除。它在很宽的温度范围内(4-34°C)都具有活性。最佳温度为 30°C,但对于温度敏感目标,它在 4°C 时也能发挥作用。优选的识别序列是Leu-Glu-Val-Leu-Phe-Gln|Gly-Pro (LEVLFQ|GP)。请使用我们的3C 底物 #1409或FRET 底物作为阳性对照。
蛋白质纯化后从融合蛋白中切割亲和标签。直接在溶液中或固定在亲和树脂上切割融合蛋白。 Protean Ltd. 提供的酶是在符合 ISO 9001 和 ISO 13485 国际标准的认证环境中生产的,符合下游 GMP 认证流程的使用条件。
亲和层析
50 mM Tris pH 7.0、150 mM NaCl、1 mM EDTA、1 mM DTT、50% 甘油
其八氨基酸序列具有高度特异性和活性,且脱靶效应最小。活性取决于靶蛋白的类型。应针对每种目标蛋白测试最佳酶用量。
-20°C,请勿储存在-80°C
简要描述:Proteinase K,产品类型:56-0002。蛋白酶 K 是一种蛋白水解酶。该酶使用Ca 2+离子来保持结构稳定性。由于酶的高总活性,可以在 EDTA 存在下进行裂解。因此,蛋白酶 K 在消化污染蛋白质和改进从各种生物样品中提取核酸方面非常有用。
详细介绍
产品咨询
品牌 | 其他品牌 | 供货周期 | 一个月 |
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应用领域 | 医疗卫生,环保,化工,生物产业,综合 |
Proteinase K,产品类型:56-0002。
蛋白酶 K 是一种蛋白水解酶。该酶使用Ca 2+离子来保持结构稳定性。由于酶的高总活性,可以在 EDTA 存在下进行裂解。因此,蛋白酶 K 在消化污染蛋白质和改进从各种生物样品中提取核酸方面非常有用。
推荐使用
Minerva Biolabs 的 Venor®GeM 样品制备试剂盒设计用于从标准样品中高效提取支原体 DNA,例如含有多达 10 6 个细胞的细胞培养上清液。然而,其他样品基质如细胞团块、血清或发酵产物可能含有浓度高于 10 mg/ml 的蛋白质。这些样品可能需要用蛋白酶 K 进行额外处理,以增加总 DNA 产量并达到最高灵敏度。
可选与 Venor®GeM 样品制备试剂盒 (Minerva Biolabs) 或 Microsart® AMP 提取试剂盒 (Sartorius) 结合使用:
在添加调节剂后立即使用 10 µl 再水合蛋白酶 K 处理每个样品(Venor®GeM 样品制备试剂盒)或缓冲液 A(Microsart® AMP 提取物)。按照相应手册中的说明继续操作。
Proteinase K内容
蛋白酶 K:1 瓶,冻干
再水化缓冲液:1 瓶
将冻干的蛋白酶 K 溶解在 550 µl 随附的补液缓冲液中。
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蛋白质印迹实验方案
为了准备在凝胶上运行的样品,需要裂解细胞和组织以释放感兴趣的蛋白质。这会溶解蛋白质,使它们可以单独迁移通过分离凝胶。我们使用 RIPA 缓冲液 (beyotime P0013B) 来提取全细胞提取物和膜结合蛋白。
一旦发生裂解,蛋白水解、去磷酸化和变性就开始。如果样品始终保存在冰上或 4°C 下,并且将适当的抑制剂新鲜添加到裂解缓冲液中,这些事件可以大大减慢。 Pmsf是我们经常使用的蛋白酶抑制剂。
用干净的工具解剖感兴趣的组织,最好在冰上,并尽可能快地防止蛋白酶降解。均质化前应将 RIPA(含 1mM pmsf)冰冷。
将组织切成小片,对于约 20 mg 的组织,将约 250 μl 裂解缓冲液快速加入管中,用电动匀浆器(或玻璃匀浆器)匀浆直至全裂解。
在微量离心机中于 4°C 下以 10000~14000g 离心 5 分钟。轻轻地从离心机中取出管子并置于冰上,吸出上清液并置于冰上保存的新管中;丢弃颗粒。
使用 PAGE 凝胶、Bradford 测定、Lowry 测定或 BCA 测定。牛血清白蛋白(BSA)是一种常用的蛋白质标准品。
要变性,请使用带有阴离子变性去污剂十二烷基硫酸钠 (SDS) 的上样缓冲液,并将混合物在 95-100°C 下煮沸 5 分钟。
清洁玻璃并设置电泳系统。
制备PAGE胶,根据蛋白质的分子量选择不同浓度的分离胶:
蛋白质大小 (kDa) | 凝胶百分比(%) |
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4-40 | 20 |
12-45 | 15 |
10-70 | 12 |
30-100 | 10 |
50-200 | 8 |
4%堆积胶,选择预染色的蛋白质Marker Proteins的大小,以帮助区分蛋白质大小和电泳示踪剂。
上样跑胶,每孔加样量20-40μg蛋白,加样时注意不要溢出到相邻孔中,造成胶戳孔和交叉污染。
按照电泳方法推荐的说明进行电泳,当溴酚蓝将凝胶耗尽时终止凝胶电泳。
将蛋白质从凝胶转移到膜上。 (根据trans-blot系统推荐的说明。)
查看膜中的蛋白质:丽春红。转印后,用丽春红染料染色约2~5min,检查转印是否成功。然后用蒸馏水冲洗掉染料。
封闭膜一般用5%脱脂牛奶,或3%~5% BSA。 4 ℃摇床振荡封闭过夜,或37 ℃封闭2小时。封闭后TBS洗涤5-10秒。
与一抗一起孵育。按照推荐的抗体稀释度,用TBST(或1%~3%脱脂牛奶)稀释抗体。然后将膜装入自封袋和固定层压机中,将抗体溶液添加到自封袋中,并确保膜与足够体积的抗体一起孵育。
37℃振荡孵育1~3 h(根据抗体效价和亲和力),或4℃过夜孵育,TBST室温摇床上洗3次,每次5~10 min。
与二抗孵育,同步骤(4),用TBST稀释,37℃振荡孵育1~3 h。
在暗室中,将显影剂和固定剂分别装入塑料托盘中,在离心管中混合两种试剂(A 和 B 的体积)。确保膜表面蛋白与混合物充分接触。 1~2分钟后去除残留物。
红灯处取出胶片,打开胶片夹,将胶片放在胶片上,取下胶片夹,根据信号强度调整曝光时间,记住曝光过度的胶片不适合分析。
曝光完成后,取出胶片,迅速浸入显影液中,终止显影。显影后,应立即将胶片浸入定影液中成透明膜。用自来水清洗除去残留的固定剂后,在室温下干燥。
简要描述:胱天蛋白酶家族荧光测定试剂盒(Caspase-Family Fluorometric Assay Kit)细胞凋亡在许多正常生物过程以及几种疾病状态中起着重要作用。细胞凋亡可以由各种刺激诱导,这些刺激都产生相同的最终结果:系统和有序的细胞死亡。炎症小体是一个大的多蛋白复合物,其组装导致caspase-1的激活,caspase-1促进促炎细胞因子白介素-1β(IL-1β)和IL-18的成熟。
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品牌 | 其他品牌 | 货号 | TBS2055 |
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