Millipore手持式细胞计数器 传感器 实验室耗材PHCC40050

Millipore手持式细胞计数器 传感器 实验室耗材

简要描述:

Millipore手持式细胞计数器 传感器,Sescriptionscepter电池计数器传感器,40μm-qty:50。

目录编号PHCC40050

商品名称

权杖

Sescriptionscepter电池计数器传感器,40μm-qty:50

OverviewSkepter传感器设计有一个微型制造的细胞传感区,能够通过细胞大小和细胞体积进行区分,分辨率可达亚微米和亚微米。

结合精密的液体处理通道和电子设备,权杖传感器准确可靠地提供细胞数量统计数据

应用程序

应用40um的权杖传感器用于在权杖2.0细胞计数器上计数6微米至36微米之间的颗粒。包括50个细胞计数器传感器。

关键应用

细胞计数

生物信息

采样容量50μL

物化信息

操作范围:10,000个颗粒/毫升-500,000个颗粒/毫升

尺寸

粒径6微米-36微米

电池尺寸范围为8.0-25.0μm

Millipore手持式细胞计数器 传感器

包装信息

材料尺寸50/pk

同仁化学BCECF试剂货号:B031 CAS号:85138-49-4| 日本DOJINDO

上海金畔社生物科技有限公司日本同仁化学dojindo全线产品代理 中国代理商

BCECF试剂货号:B031
2′,7′-Bis(carboxyethyl)-4 or 5-carboxyfluorescein
CAS号:85138-49-4
商品信息
储存条件:室温
运输条件:室温

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5mg

期货 

 
荧光探针检测方案

性质
注意事项
溶解例
参考文献
规格性状

性质

  5-羧基荧光素是一种通过将染料掺入细胞来研究细胞内pH变化的方法,但是当用于pKa = 7.0的细胞(如淋巴细胞)中时,染料会从细胞中洗脱出来,很难快速测定。 BCECF引入了两个羧乙基基团以减少从细胞中的洗脱。 适用于研究细胞内pH变化(λex= 490 nm,λem= 526 nm)。

注意事项

  ・如果将本产品以粉末形式取出并使用,由于其性质,静电等因素,它可能会粘附在容器内部,从而难以完全取出。

・对于粘附在容器上且无法取出的粉末,请在使用前将要使用的溶剂倒入容器中并溶解。

溶解例

2 mg / ml(甲醇)

参考文献

1) R. A. Steinhardt and D. Mazia, “Development of K+-conductance and Membrane Potentials in Unfertilized Sea Urchin Eggs After Exposure to NH4OH”, Nature1973241, 400.
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3) A. M. Paradiso, R. Y. Tsien and T. E. Machen, “Na+ -H+ Exchange in Gastric Glands as Measured with a Cytoplasmic-trapped, Fluorescent pH Indicator”, Proc. Natl. Acad. Sci. USA198481, 7436.
4) S. Grinstein, B. Elder and W. Furuya, “Phorbol Ester-induces Changes of Cytoplasmic pH in Neutrophils: Role of Exocytosis in Na+ – H+ Exchange”, Am. J. Physiol.1985248, C379.
5) G. B. Zavoico, E. J. Cragoe and M. B. Feinstein, “Regulation of Intracellular pH in Human Platelets”, J. Biol. Chem.1986261(28), 13160.
6) G. R. Bright, W. Fisher, J. Rogowska and L. Taylor, “Fluorescence Ratio Imaging Microscopy: Temporal and Spatial Measurements of Cytoplasmic pH”, J. Cell Biol.1987104, 1019.
7) C. Aalkjaer and E. J. Gragoe Jr, “Intracellular pH Regulation in Resting and Contracting Segments of Rat Mesenteric Resistance Vessels”, J. Physiol.1988402, 391.
8) K. Tsujimoto, M. Semadeni, M. Huflejt and L. Packer, “Intracellular pH of Halobacteria Can Be Determined by the Fluorescent Dye 2′,7′-bis(carboxyethyl)-5(6)-carboxyfluorescein”, Biochem. Biophys. Res. Commun.1988155, 123.
9) M. A. Kolber, R. R. Quinones, R. E. Gress and P. A. Henkart, “Measurament of Cytotoxicity by Target Cell Release and Retention of the Fluorescent Dye Bis-carboxyethyl-carboxyfluorescein(BCECF)”, J. Immunol. Methods, 1988108, 255.
10) H. Harada, Y. Kanai, M. Anzai and Y. Suketa, “cAMP Activates Cl/HCO3 Exchange for Regulation of Intracellular pH in Renal Epithelial Cells”, Biochim. Biophys. Acta, 1991, 1092, 404.
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13) G. Boyarsky, C. Hanssen and L. A. Clyne, “Superiority of in vitro Over in vivo Calibrations of BCECF in Vascular Smooth Muscle Cells”, FASEB J., 1996, 10, 1205.
14) S. A. Weston and C. R. Parish, “New Fluorescent Dyes for Lymphocyte Migration Studies Analysis by Flow Cytometry and Fluorescent Microscopy”, J. Immunol. Methods, 1990, 133, 87.
15) L. S. D. Clerck, C. H. Bridts, A. M. Mertens, M. M. Moens and W. J. Stevens, “Use of Fluorescent Dyes in the Determination of Adherence of Human Leucocytes to Endothelial Cells and the Effects of Fluorochromes on Cellular Function”, J. Immunol. Methods, 1994, 172, 115.

规格性状

规格性状:

该产品为橙色至红棕色粉末,可溶于甲醇。

纯度(HPLC):85.0%以上

溶于甲醇:测试合格

荧光光谱:测试合格

红外光谱:测试合格

NMR光谱:测试一致

处理条件:

1.储存方法:避光

关联产品

BCECF试剂货号:B031 CAS号:85138-49-4
Fluo 4-AM special packaging试剂
1-[2-Amino-5-(2,7-difluoro-6-acetoxymethoxy-3-oxo-9-xanthenyl)phenoxy]-2-(2-amino-5-methylphenoxy)ethane-N,N,N’,N’-tetraacetic acid, tetra(acetoxymethyl)ester

Fluo 4-AM试剂
1-[2-Amino-5-(2,7-difluoro-6-acetoxymethoxy-3-oxo-9-xanthenyl)phenoxy]-2-(2-amino-5-methylphenoxy)ethane-N,N,N’,N’-tetraacetic acid, tetra(acetoxymethyl)ester

BCECF试剂货号:B031 CAS号:85138-49-4
Rhod 2-AM试剂
1-[2-Amino-5-(3-dimethylamino-6-dimethylammonio-9-xanthenyl)phenoxy]-2-(2-amino-5-methylphenoxy)ethane-N,N,N’,N’-tetraacetic acid, tetraacetoxymethyl ester, chloride

BCECF试剂货号:B031 CAS号:85138-49-4
Fluo 3-AM试剂
Fluo3-AM1-[2-Amino-5-(2,7-dichloro-6-acetoxymethoxy-3-oxo-9-xanthenyl)phenoxy]-2-(2-amino-5-methylphenoxy)ethane-N,N,N’,N’-tetraacetic acid, tetra(acetoxymethyl)ester

BCECF试剂货号:B031 CAS号:85138-49-4
Fura2-AM试剂
1-[6-Amino-2-(5-carboxy-2-oxazolyl)-5-benzofuranylo

同仁化学Calcein-AM/PI细胞双染试剂盒货号:C542 活死细胞双染试剂盒| 日本DOJINDO

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Calcein-AM/PI细胞双染试剂盒货号:C542
活死细胞双染试剂盒
Calcein-AM/PI Double Staining Kit
商品信息
储存条件:-20度保存
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500 tests
3000 tests

现货

细胞染色

Calcein-AM/PI细胞双染试剂盒货号:C542 活死细胞双染试剂盒

Calcein-AM/PI细胞双染试剂盒货号:C542 活死细胞双染试剂盒

产品解说
活动进行中
试剂盒内含
产品概述
荧光特性
染色例
最佳浓度摸索
操作步骤
注意事项
参考文献

产品解说

 

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试剂盒内含

                                                                     500 次            3000 次

・Calcein-AM Reagent                             200 μg x 1        1 mg x 1

・PI Stock Solution (1.5 mmol/l)              200 μl x 1         1 ml x 1

・DMSO                                                    200 μl x 1         1 ml x 1

产品概述

Calcein-AM/PI细胞双染试剂盒内含两种染料:Calcein-AM和Propidium Iodide (PI)。这个试剂盒可在荧光显微镜下同时观察在同一个细胞培养皿中的活细胞和死细胞。Calcein-AM可透过细胞膜,通过活细胞内的酯酶作用脱去AM基团,产生的Calcein (钙黄绿素) 发出强绿色荧光,因此活细胞在荧光显微镜下可被检测到绿色荧光。另一方面PI可以通过受损的细胞膜进入到死细胞内并嵌入细胞的DNA双螺旋从而产生红色荧光,因此死细胞会被检测到红色荧光。除了用荧光显微镜外,也有报道可以用流式细胞仪和荧光酶标仪来进行定量检测。

荧光特性

Calcein-AM : λex=490 nm , λem=515 nm

PI : λex=530 nm , λem=580 nm

染色例

                                                                           细胞染色实例

Calcein-AM/PI细胞双染试剂盒货号:C542 活死细胞双染试剂盒

(a)                                     (b)                                      (c)

a)  Calcein-AM染FTC细胞(活细胞单染)

b)  PI染HCT116细胞(死细胞单染)

c)  Calcein-AM、PI染MHD-1 细胞(活死细胞双染)

最佳浓度摸索

由于不同细胞种类、细胞浓度的染色条件不同,我们建议自行摸索一下Calcein-AM和PI的最适浓度。

Calcein-AM和PI的最佳浓度是根据不同的细胞种类而定,通过以下的操作,我们可以找到不同细胞染色试剂的最佳浓度:

1. 通过在0.1%皂苷或0.1-0.5%毛地黄皂苷中培养10 min或通过在70%乙醇中培养30 min制备死细胞。

2. 用0.1-10 μM PI溶液染死细胞,以便找到仅针对细胞核染色而不对细胞质染色的PI浓度。

3. 用0.1-10 μM Calcein-AM溶液染死细胞,以便找到不对细胞质染色的Calcein-AM浓度,再以此浓度的Calcein-AM对活细胞染色以检验活细胞是否被染色。

操作步骤

以HeLa细胞为例

制备1 mmol/l的Calcein-AM储存液

【500 次】

将200 μl DMSO加入到含200 μg Calcein-AM粉末的管中,用移液器吹打溶解。

【3000 次】

将1 ml DMSO加入到含1 mg Calcein-AM粉末的管中,用移液器吹打溶解。

※Calcein-AM储存液需要避光,在-20℃密封保存。

 

制备染色工作液

将Calcein-AM储存液和PI储存液恢复至室温后使用。

在5 ml的PBS(-)中加入10 μl Calcein-AM储存液和15 μl PI储存液,混匀制成工作液。此时Calcein-AM的浓度为2 μmol/l,而PI的浓度为4.5 μmol/l。

 

染色步骤

1、 用Trypsin-EDTA消化细胞。

2、 通过离心收集细胞(1,000 rpm,3 min)。

3、 去除上清液,加入PBS(-)制备细胞悬液(105 – 106 cells/ml为宜)。

4、 重复步骤2和步骤3数次以消除培养基中的酯酶活性。

5、 取100 μl 染色工作液与200 μl 细胞悬液混合,在37℃培养15 min。

6、 在490±10 nm激发波长下同时观察黄绿色荧光的活细胞和红色荧光的死细胞。另外用545 nm激发波长单独观察死细胞。

注意事项

1、 由于本试剂盒中的Calcein-AM Reagent 粉末和PI Stock Solution量很少,有可能会粘在盖子或管壁上,开封前请先涡旋以使其振落下来。

2、 由于Calcein-AM储存液对潮气敏感,请在使用后密闭Calcein-AM储存液的盖子。如果不能一次用完,建议分装保存,例如分装成10 μl/管,用封口膜封口,并用铝箔纸包裹,放在一个密闭性能好的塑料袋中,并放入一包干燥剂,在≤-20℃密封避光保存。

3、 配制好的染色工作液请在当天使用。

4、 PI有疑似致癌性,使用前应注意以下几点:

1) 使用时请带好手套,口罩,防护眼镜等,不要接触到或呼吸到。

2) 当PI不慎接触到皮肤时,请立刻用大量的水冲洗。

3) 处理方法

清洗容器的清洗液和废液请按照实验室的有毒有害物质的处理方法进行处理,或按照以下方法处理:

・用UV照射的方法进行分解

・用次氯酸钠氧化分解后,进行中和处理

参考文献

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2. Mitochondria-Targeted Artificial “Nano-RBCs” for Amplified Synergistic Cancer Phototherapy by a Single NIR Irradiation,

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3. 4D-Printed Biodegradable and Remotely Controllable Shape Memory Occlusion Devices,

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generation Bioactivity by 3D-Printing Composite, Advanced Functional Materials, 2019, 1907071

5. A Substitution-Dependent Light-Up Fluorescence Probe for Selectively Detecting Fe3+ Ions and Its Cell Imaging Application,

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8. Nanoenzyme-Augmented Cancer Sonodynamic Therapy by Catalytic Tumor Oxygenation,

ACS Nano, 2018, 12(4), 3780-3795

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Imaging-Guided Cancer Therapy, ACS Nano, 2017, 11(4), 3797-3805

10. Two-Dimensional Graphene Augments Nanosonosensitized Sonocatalytic Tumor, ACS Nano, 2017, 11(9), 9467-9480

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12. Molecular Responses of Human Lung Epithelial Cells to the Toxicity of Copper Oxide Nanoparticles Inferred from Whole

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18. Ultrasmall Cu2-xS nanodots as photothermal-enhanced Fenton nanocatalysts for synergistic tumor therapy at NIR-II

biowindow, Biomaterials, 2019, 206, 101-114

19. Theranostic 2D ultrathin MnO2 nanosheets with fast responsibility to endogenous tumor microenvironment and exogenous

NIR irradiation, Biomaterials, 2018, 155, 54-63

20. Cooption of heat shock regulatory system for anhydrobiosis in the sleeping chironomid Polypedilum vanderplanki,

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Antioxidants & Redox Signaling, 2011, 14(12), 2427-39

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glass scaffolds, Acta Biomaterialia, 2011, 7(10), 3638-3644

同仁化学PlasMem Bright Green细胞膜染色试剂货号:P504 细胞膜染色试剂—绿色| 日本DOJINDO

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PlasMem Bright Green细胞膜染色试剂货号:P504
细胞膜染色试剂—绿色
PlasMem Bright Green
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选择规格:
100 μl

现货

细胞染色

PlasMem Bright Green细胞膜染色试剂货号:P504 细胞膜染色试剂—绿色

PlasMem Bright Green细胞膜染色试剂货号:P504 细胞膜染色试剂—绿色

产品特性
与其他公司产品的比较
细胞膜上的停留时间
实验例
关联产品
常见问题Q&A
产品文献

产品特性

细胞膜起着分隔细胞内和细胞外的作用,并且与细胞的移动和生长、神经信号的传达等细胞功能密切相关。因此,细胞膜的异常与各种细胞状态异常所造成的疾病(如离子通道病Channelopathy)有很密切的关联,被认为是非常重要的生物标记物之一。

由于操作简便并且可用于活细胞染色,小分子荧光探针是最常用的细胞膜染色方法。但是小分子荧光探针普遍存在细胞内停留时间短、水溶性差的问题。而PlasMem Bright是一种克服了现有小分子荧光探针问题的产品。 用PlasMem Bright观察细胞膜时,可以在染色后的1天以上进行长时间的荧光观察。

PlasMem Bright Green细胞膜染色试剂货号:P504 细胞膜染色试剂—绿色

与其他公司产品的比较

PlasMem Bright系列产品克服了现有市面上的细胞膜染色试剂的诸多缺点(细胞毒性高、停留时间短、不同实验系的兼容性差)。并且分别有Green/ Red两种产品,方便多重染色时自由选择。

产品名 细胞

毒性

染色后

的清洗

含血清

培养基

停留

时间

染色后

的固定

PlasMem Bright 不需要 可使用 24 h 可以(PFA)
S公司 产品P 需要 不可使用 可以
T公司 产品D 需要 可使用 不可以
T公司 产品C 需要 可使用 1.5 h 可以(PFA)

*通过细胞核染色试剂染色后,神经细胞的形态变化(凝集)的比较得出的结论

细胞膜上的停留时间

使用各种细胞膜染色试剂进行染色HeLa细胞,经过24 h培养后对各染色试剂的荧光图像进行比较。结果发现,与其他公司的细胞膜染色试剂相比,PlasMem Bright系列产品的染色时间更长,膜上的停留时间也更长。

PlasMem Bright Green细胞膜染色试剂货号:P504 细胞膜染色试剂—绿色

实验例

实验例:ES细胞群内部的细胞膜染色

将小鼠ES细胞在涂有明胶的玻璃底皿中培养4天,并将获得的细胞群,用PlasMem Bright Green(200倍稀释)染色15分钟,并使用共聚焦显微镜(Zeiss:LSM710)中观察。

结果,细胞群内部的细胞膜也可以用PlasMem Bright Green可视化观察。

PlasMem Bright Green细胞膜染色试剂货号:P504 细胞膜染色试剂—绿色

<观察条件>

细胞膜(PlasMem Bright Green【绿】):Ex.488 nm/Em.500-560 nm.

*此实验例由庆应义塾大学医学院的石津 大嗣老师提供。

实验例:轴突神经细胞形态和线粒体定位的观察

由神经母细胞瘤细胞SH-SY5Y分化诱导的神经细胞,分别用PlasMem Bright Green (绿)、MitoBright LT Red (红)、Hoechst 33342 (蓝) 进行染色。可以鲜明的观察到细胞的形状以及轴突内的线粒体。

PlasMem Bright Green细胞膜染色试剂货号:P504 细胞膜染色试剂—绿色

(比例尺:200 μm)

<观察条件>

细胞膜(PlasMem Bright Green【绿】):Ex.488 nm/Em.500-560 nm。

线粒体(MitoBright LT Red【红】):Ex.561 nm/Em.560-620 nm。

细胞核(Hoechst33342【蓝】):Ex.405 nm/Em.400-450 nm。

<实验步骤>

(1)诱导神经芽细胞(SH-SY5Y)为神经细胞。

(2)去除上清液,添加使用培养基中稀释200倍的PlasMem Bright Green、Hoechst 33342(终浓度:5μg/ml)以及MitoBright LT Red(终浓度0.1 μmol/l)。

(3)培养30分钟。

(4)去除上清液,添加HBSS。

(5)使用荧光显微镜观察。

实验例:神经芽细胞(SH-SY5Y)中的线粒体检测

分别用PlasMem Bright Green (绿)、MitoBright LT Red (红)、Hoechst 33342 (蓝) 对神经母细胞瘤细胞SH-SY5Y进行染色,用共聚焦显微镜获得3D图像。可以鲜明的观察到细胞形态以及线粒体和细胞核的情况。

PlasMem Bright Green细胞膜染色试剂货号:P504 细胞膜染色试剂—绿色

(比例尺:10 μm)

<观察条件>

细胞膜(PlasMem Bright Green【绿】):Ex.488 nm/Em.500-560 nm。

线粒体(MitoBright LT Red【红】):Ex.561 nm/Em.560-620 nm。

细胞核(Hoechst33342【蓝】):Ex.405 nm/Em.400-450 nm。

<实验步骤>

(1)使用HBSS清洗SH-SY5Y细胞。

(2)添加使用培养基中稀释200倍的PlasMem Bright Green、Hoechst 33342(终浓度:5μg/ml)以及MitoBright LT Red(终浓度0.1 μmol/l)。

(3)培养10分钟。

(4)使用HBSS清洗细胞2次

(5)使用荧光显微镜观察。

  实验例:脑源性小鼠神经母细胞瘤的延时成像

使用培养基中稀释200倍的PlasMem Bright Green,染色N1E-115细胞30分钟并进行延时成像时,可以清楚地观察到神经细胞内树突和突起中的变化。

 

<培养条件>

・细胞:N1E-115细胞(脑源性小鼠神经母细胞瘤)

・培养基:5%FBS,1%含谷氨酰胺的D-MEM(低葡萄糖)

・培养设备:35 mm 玻璃底皿

<拍摄条件>

・成像设备:带培养箱的荧光显微镜

・拍摄时间:1小时,拍摄间隔:2分钟

*此实验例由芝浦理工大学系统科学与工程学院的涌澤 充 様、福井 浩二教授提供。


 实验例:与外泌体共染色

 

向PlasMem Bright Green染色的HeLa细胞中加入外泌体膜荧光染色试剂盒(ExoSparkler Exosome Membrane Labeling Kit-Red)染色的外泌体。可以观察到,由活细胞的细胞膜产生的内体(Endosome)中的外泌体,以及没有摄入外泌体的内体。另外,即使在固定染色的细胞之后,也可以像活细胞一样使存在于细胞膜来源的囊泡(内体)中的外泌体可视化。

PlasMem Bright Green细胞膜染色试剂货号:P504 细胞膜染色试剂—绿色

PlasMem Bright Green细胞膜染色试剂货号:P504 细胞膜染色试剂—绿色

(比例尺:5 μm)

PlasMem Bright Green细胞膜染色试剂货号:P504 细胞膜染色试剂—绿色

PlasMem Bright Green细胞膜染色试剂货号:P504 细胞膜染色试剂—绿色

(比例尺:10 μm)

<观察条件>

细胞膜 (PlasMem Bright Green, 绿)  Ex. 488 nm / Em. 500-560 nm。

外泌体 (ExoSparkler Exosome Membrane Labeling Kit-Red, 红)  Ex. 561 nm / Em. 560-620 nm。

 

<实验步骤>

(1)接种Hela细胞,24小时培养。

(2)去除上清液,添加使用培养基稀释的PlasMem Bright Green(100倍稀释)。

(3)培养10分钟。

(4)使用HBSS清洗细胞3次。

(5)添加175 μlMEM培养基与ExoSparkler Exosome Membrane Labeling Kit-Red染色过的Exosome溶液25 μl。

(6)在CO2培养箱中过夜培养。

(固定情况下)细胞使用HBSS清洗2次后添加4%PFA,培养15分钟后,使用HBSS清洗细胞2次。

(7)使用共聚焦显微镜观察

 

 实验例:烟草BY2细胞的膜染色

用PlasMemBright Green (200倍稀释)染色烟草BY2细胞5分钟,清洗后每5分钟拍摄一次并进行长时间观察。实验中可以清晰的观察到BY2细胞膜的荧光以及细胞分裂所形成的细胞板。

(数据由名古屋大学栗原大辅老师友情提供)

<检测条件>

・转盘式共聚焦显微镜观察

・Ex: 488 nm; Em: 520/35 (502.5-537.5 nm)

・图中的时间按照00:00 (小时:分钟)表示

 

 实验例:拟南芥根的染色

用PlasMemBright Green (200倍稀释)染色拟南芥根15分钟,采用Z轴景深连续拍照的方法进行荧光观察,可以清晰的观察到立体的细胞膜分布情况。

 

(数据由名古屋大学栗原大辅老师友情提供)

<检测条件>

 

・转盘式共聚焦显微镜观察,Z轴摄影

・Ex: 488 nm; Em: 520/35 (502.5-537.5 nm)

关联产品

 

PlasMem Bright Green细胞膜染色试剂货号:P504 细胞膜染色试剂—绿色PlasMem Bright Green细胞膜染色试剂货号:P504 细胞膜染色试剂—绿色

常见问题Q&A

Q1:   是否可以用固定化细胞?
A: 可以用4% 多聚甲醛(PFA)进行固定。

但是请注意不可以改变细胞膜的渗透性,否则会操造成没有荧光。

Q2:  是否可以进行动态荧光成像?
A:可以。   但是请注意将激发光保持在最低水平并提高检测灵敏度。另外,长时间的激发光照射可能会对细胞造成伤害,也更容易使荧光染料分解,请考虑采用时间间隔等方法尽量避免。
Q3:   在配制Working solution的时候是否可以用无血清培养基或Buffer进行稀释?
A: 可以。
Q1:  染色后清洗细胞时建议使用什么?
A: 无血清培养基、PBS、HBSS等各种缓冲液均可以使用。
Q4:   添加Working solution后,是否可以马上观察?
A:添加后马上观察也可以。操作手册上的步骤是加入试剂后培养5 min再观察。
Q5:   细胞膜以外的地方也有被染色的情况,请问是什么原因?
A: 感觉观察到细胞膜以外也被染色的情况,可能有如下两个原因

1) 细胞膜上的试剂,随着时间的推移,通过细胞内吞作用进入细胞内。

请参考本产品网页上“细胞膜上的停留时间”的部分,有染色后24 h的照片。

2)荧光成像时的焦点在底面(细胞底部的接触面)上,如下图A。

荧光成像时的焦点请尽量像下图B那样调整Z轴的高度。

PlasMem Bright Green细胞膜染色试剂货号:P504 细胞膜染色试剂—绿色

PlasMem Bright Green细胞膜染色试剂货号:P504 细胞膜染色试剂—绿色

产品文献

编号 文献 IF
1 The formation of migrasomes is   initiated by the assembly of sphingomyelin synthase 2 foci at the leading   edge of migrating cells,

Nature Cell Biology,2023 ,25(8):1173-1184.

2023 21

同仁化学PlasMem Bright Red细胞膜染色试剂货号:P505 细胞膜染色试剂—红色| 日本DOJINDO

上海金畔社生物科技有限公司日本同仁化学dojindo全线产品代理 中国代理商

PlasMem Bright Red细胞膜染色试剂货号:P505
细胞膜染色试剂—红色
PlasMem Bright Red
商品信息
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产品文献

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100 μl

现货

 
细胞染色

PlasMem Bright Red细胞膜染色试剂货号:P505 细胞膜染色试剂—红色

PlasMem Bright Red细胞膜染色试剂货号:P505 细胞膜染色试剂—红色

产品特性
与其他公司产品的比较
细胞膜上的停留时间
实验例
关联产品
常见问题Q&A

产品特性

细胞膜起着分隔细胞内和细胞外的作用,并且与细胞的移动和生长、神经信号的传达等细胞功能密切相关。因此,细胞膜的异常与各种细胞状态异常所造成的疾病(如离子通道病Channelopathy)有很密切的关联,被认为是非常重要的生物标记物之一。

由于操作简便并且可用于活细胞染色,小分子荧光探针是最常用的细胞膜染色方法。但是小分子荧光探针普遍存在细胞内停留时间短、水溶性差的问题。而PlasMem Bright是一种克服了现有小分子荧光探针问题的产品。 用PlasMem Bright观察细胞膜时,可以在染色后的1天以上进行长时间的荧光观察。

与其他公司产品的比较

PlasMem Bright系列产品克服了现有市面上的细胞膜染色试剂的诸多缺点(细胞毒性高、停留时间短、不同实验系的兼容性差)。并且分别有Green/ Red两种产品,方便多重染色时自由选择。

产品名 细胞

毒性

染色后

的清洗

含血清

培养基

停留时间 染色后

的固定

PlasMem Bright 不需要 可使用 24 h 可以(PFA)
S公司 产品P 需要 不可使用 可以
T公司 产品D 需要 可使用 不可以
T公司 产品C 需要 可使用 1.5 h 可以(PFA)

细胞膜上的停留时间

使用各种细胞膜染色试剂进行染色HeLa细胞,经过24 h培养后对各染色试剂的荧光图像进行比较。结果发现,与其他公司的细胞膜染色试剂相比,PlasMem Bright系列产品的染色时间更长,膜上的停留时间也更长。

PlasMem Bright Red细胞膜染色试剂货号:P505 细胞膜染色试剂—红色

实验例

 

实验例:通过悬浮细胞观察内吞作用对温度依赖性的变化

本实验使用ECGreen内吞检测试剂(产品代码:E296)和PlasMem Bright Red染色,对Jurkat细胞内吞时对温度的依赖性变化

PlasMem Bright Red细胞膜染色试剂货号:P505 细胞膜染色试剂—红色

<检测条件>

内体检测(ECGreen, 绿色): Ex. 405 nm / Em. 500 – 560 nm

细胞膜检测 (PlasMem Bright Red,红色): Ex. 561 nm / Em. 560 – 700 nm

<实验步骤>

(1)在样品管中加入Jurkat细胞悬液(10%FBS,RPMI)并在4℃或37℃孵育30min。

(2) 使用步骤(1)配置的细胞悬浮液将ECGreen溶液稀释1000倍。

(3) 4℃或37℃孵育30min。

(4) 用HBSS清洗细胞两次。

(5) 加入含有PlasMem Bright Red(100倍稀释)的培养基,悬浮细胞。

(6) 将悬浮液转移到成像板上,并使用共聚焦显微镜观察细胞。

实验例:神经细胞的形态和轴突内线粒体局部观察

由神经母细胞瘤细胞SH-SY5Y分化诱导的神经细胞,分别用PlasMem Bright Red (红)、MitoBright LT Green (绿)、Hoechst 33342 (蓝) 进行染色。可以鲜明的观察到细胞的形状以及轴突内的线粒体。

PlasMem Bright Red细胞膜染色试剂货号:P505 细胞膜染色试剂—红色

 实验例:观察巨噬细胞摄入外泌体

使用MagCapture™ Exosome Isolation Kit PS (Wako)提取人牙龈组织的间质干细胞(GMSC)产生的外泌体,并使用ExoSparkler Exosome Membrane Labeling Kit-Green (货号:EX01)进行染色。然后将其加入由人类外周血单核细胞(PBMC)分化的人类巨噬细胞中,用PlasMem Bright Red对巨噬细胞进行染色。

PlasMem Bright Red细胞膜染色试剂货号:P505 细胞膜染色试剂—红色

(数据由九州大学附属医院 口腔功能修复科 福田隆男老师友情提供)

 

<检测条件>
外泌体(Mem Dye – Green):Ex 488 nm / Em 490 – 540 nm
细胞膜(PlasMem Bright Red): Ex. 561 nm / Em. 560 – 700 nm
细胞核(DAPI):Ex. 345 nm / Em. 455 nm

<实验操作>
1. 将多聚赖氨酸包被载玻片(poly-L-lysine coated slides)放置在24 孔板中进行外周血单个核细胞(PBMC)的分化诱导(7 days)。
2. 根据ExoSparkler Exosome Membrane Labeling Kit-Green的操作说明书对10 µg的外泌体进行染色。
3. 将标记好的外泌体,按照1 µg/mL添加到24孔板中,培养3 h。

4. 用PBS清洗细胞1次。
5. 添加用培养基配置好的PlasMem Bright Red (1/100稀释),在CO2培养箱内静置15 min。
6. 用PBS清洗细胞3次。
7. 用4% PFA,室温下固定15 min。
8. 用PBS清洗细胞3次。
9. 用含DAPI的封片剂 (Invitrogen:ProLong™ Gold Antifade Mountant with DAPI)进行封片。
10. 激光共聚焦显微镜LSM 700 confocal microscope (Carl Zeiss) 观察。

 

关联产品

PlasMem Bright Red细胞膜染色试剂货号:P505 细胞膜染色试剂—红色PlasMem Bright Red细胞膜染色试剂货号:P505 细胞膜染色试剂—红色

常见问题Q&A

Q1:   是否可以用固定化细胞?
A: 可以用4% 多聚甲醛(PFA)进行固定。

但是请注意不可以改变细胞膜的渗透性,否则会操造成没有荧光。

Q2:  是否可以进行动态荧光成像?
A:可以。   但是请注意将激发光保持在最低水平并提高检测灵敏度。另外,长时间的激发光照射可能会对细胞造成伤害,也更容易使荧光染料分解,请考虑采用时间间隔等方法尽量避免。
Q3:   在配制Working solution的时候是否可以用无血清培养基或Buffer进行稀释?
A: 可以。
Q1:  染色后清洗细胞时建议使用什么?
A: 无血清培养基、PBS、HBSS等各种缓冲液均可以使用。
Q4:   添加Working solution后,是否可以马上观察?
A:添加后马上观察也可以。操作手册上的步骤是加入试剂后培养5 min再观察。
Q5:   细胞膜以外的地方也有被染色的情况,请问是什么原因?
A: 感觉观察到细胞膜以外也被染色的情况,可能有如下两个原因

1) 细胞膜上的试剂,随着时间的推移,通过细胞内吞作用进入细胞内。

请参考本产品网页上“细胞膜上的停留时间”的部分,有染色后24 h的照片。

2)荧光成像时的焦点在底面(细胞底部的接触面)上,如下图A。

荧光成像时的焦点请尽量像下图B那样调整Z轴的高度。

PlasMem Bright Red细胞膜染色试剂货号:P505 细胞膜染色试剂—红色

PlasMem Bright Red细胞膜染色试剂货号:P505 细胞膜染色试剂—红色

关联产品

PlasMem Bright Red细胞膜染色试剂货号:P505 细胞膜染色试剂—红色
Calcein-AM/PI细胞双染试剂盒
活死细胞双染试剂盒

PlasMem Bright Red细胞膜染色试剂货号:P505 细胞膜染色试剂—红色
活细胞质染色-绿色——Calcein-AM
3′,6′-Di(O-acetyl)-4′,5′-bis[N,N-bis(carboxymethyl)aminomethyl]fluorescein, tetraacetoxymethyl ester

PlasMem Bright Red细胞膜染色试剂货号:P505 细胞膜染色试剂—红色
Cellstain- Hoechst 33342 solution试剂
2′-(4-Ethoxyphenyl)-5-(4-methyl-1-piperazinyl)-2,5′-bi-1H-benzimidazole, trihydrochloride

PlasMem Bright Red细胞膜染色试剂货号:P505 细胞膜染色试剂—红色
PlasMem Bright Green细胞膜染色试剂
细胞膜染色试剂—绿色

PlasMem Bright Red细胞膜染色试剂货号:P505 细胞膜染色试剂—红色
Cellstain- CFSE试剂
5- or 6-(N-Succinimidyloxycarbonyl)fluorescein 3′,6′-diacetate

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