cell biolabs腺相关病毒(AAV)载体

腺相关病毒AAV具有表达滴度高、宿主免疫反应轻微、感染谱广、安全性高等优势,成为近年来在基因治疗领域应用广泛的病毒载体之一。上海金畔生物科技有限公司代理的Cell Biolabs (AAV Helper Free Expression System)的AAV三质粒表达系统也是目前常用的一类AAV载体系统。

cell biolabs腺相关病毒(AAV)载体

如下图所示,该套AAV系统包含表达载体(Expression vector)、包装质粒(Rep-Cap plasmid)和辅助质粒(pHelper plasmid)。其中表达载体是AAV病毒的核心,包含了ITR序列、CMV启动子、多克隆位点等,用于携带外源基因;包装质粒负责表达AAV病毒的结构蛋白,决定AAV的血清型和组织嗜性。由于野生型AAV是复制缺陷型的,必须依赖辅助病毒(如腺病毒)才可以感染靶细胞。AAV Helper Free Expression System利用在不同质粒上提供这些必要的辅助基因来确保重组AAV病毒具有感染性,消除AAV对辅助病毒的依赖,解决了AAV生产过程中要去除腺病毒污染的难题。

cell biolabs腺相关病毒(AAV)载体

      Expression vector包含ITR序列,多克隆位点,携带目的基因;

      Rep-Cap plasmid包含Rep和Cap基因,决定了重组AAV的血清型和组织嗜性;

      pHelper plasmid 包含腺病毒的VA、E2A和E4基因,使重组AAV具有感染性。

  1. AAV表达载体

AAV基因组为4.7kb,能够携带的外源基因上限在4kb左右。Cell Biolabs提供了8种AAV的表达载体,兼容常用的各种AAV包装系统,表达载体都携带有2个ITR序列,使AAV基因组能正确形成T-形二级结构,进而保证了病毒的有效复制和包装。载体上有氨苄抗性基因、多克隆位点,还可以根据实验需要选择带标签、无标签、不含启动子或自身互补型(self-complementary)AAV表达载体(产品详情如下表)。

货号

质粒名称

载体容量(kb)

特征

VPK-415

pAAV-IRES-Puro

1.8

Puro标签

VPK-416

pAAV-IRES-Neo

1.6

Neo标签

VPK-417

pAAV-IRES-Hygro

1.4

Hygro标签

VPK-418

pAAV-IRES-GFP

1.7

GFP标签

VPK-419

pAAV-IRES-Bsd

2

BSD标签

VPK-410

pAAV-MCS

3

无标签

VPK-411

pAAV-MCS Promoterless

4

无启动子

VPK-430

pscAAV-MCS

1.5

self-complementary

  1. AAV包装质粒

AAV共有12个血清型,其中AAV1-6是从人类组织中分离获得,并且具有明确的的抗体反应性,是目前常用的经典AAV载体。尽管不同血清型AAV都具有正二十面体结构,但其衣壳蛋白在序列与空间构象上的多样性,使得AAV与不同细胞表面受体亲和力及组织嗜性存在显著差异。在感染嗜性方面,AAV-2的感染谱较广应用较多,AAV-1在骨骼肌中的转导效率较高,AAV-3易于转导巨核细胞,AAV-5和AAV-6感染呼吸道上皮细胞的优势较为显著。因此,根据AAV不同血清型在组织感染性的相对特异性,可以用于在针对不同靶向组织的基因治疗中寻求最佳的AAV载体类型与组合。除了常见的六个血清型AAV之外,Cell Biolabs还提供两种重组型AAV包装质粒即AAV-DJ与AAV-DJ-8,如下图所示,这两种AAV的Rep-Cap基因是由多个野生型AAV的结构基因重组而来,与其他野生型相比,AAV-DJ在体外细胞转导效率更高,AAV-DJ-8则更适用于体内感染实验。

cell biolabs腺相关病毒(AAV)载体

以常用的AAV-2为参照,下表比较不同血清型AAV对种属、组织细胞的感染率。值得一提的是,AAV-DJ对不同物种的肝细胞、黑色素瘤细胞以及胚胎干细胞的感染能力都有绝对优势,甚至高于常用的AAV-2。

辅助质粒pHelper plasmid是确保重组AAV具有感染性的重要质粒,pHelper载体中包含了腺病毒的E2A、E4基因和VA RNA,由于我们常用的AAV包装细胞系293和293T都含有E1基因,因此该系统中的pHelper质粒上没有再提供E1基因。

AAV包装质粒货号(Rep-Cap&pHelper plasmids)

VPK-401

VPK-402

VPK-403

VPK-404

VPK-405

VPK-406

VPK-400-DJ

VPK-400-DJ-8

细胞系

组织类型

AAV-1

AAV-2

AAV-3

AAV-4

AAV-5

AAV-6

AAV-DJ

AAV-DJ/8

Huh-7

人肝脏

13

100

2.5

0.0

0.1

10

500

0.2

HEK293

人肾脏

25

100

2.5

0.1

0.1

5

500

0.3

HeLa

人子宫

3

100

2.0

0.1

6.7

1

667

0.2

HepG2

人肝脏

3

100

16.7

0.3

1.7

5

1250

0.5

Hep1A

小鼠肝脏

20

100

0.2

1.0

0.1

1

400

0.1

911

人视网膜

17

100

11

0.2

0.1

17

500

0.0

CHO

仓鼠卵巢

100

100

14

1.4

333

50

25000

5.0

COS

非洲绿猴肾脏

33

100

33

3.3

5.0

14

500

0.3

MeWo

人皮肤

10

100

20

0.3

6.7

10

2857

1.0

NIH3T3

小鼠成纤维

10

100

2.9

2.9

0.3

10

500

0.1

A549

人肺脏

14

100

20

ND

0.5

10

1000

0.1

HT1180

人成纤维

20

100

10

0.1

0.3

33

333

0.2

Monocytes

人原代单核细胞

1111

100

ND

ND

125

1429

100

ND

Immature DC

人树突细胞

2500

100

ND

ND

222

2857

200

ND

Mature DC

人树突细胞

2222

100

ND

ND

333

3333

100

ND

ND = Not Determined

上海金畔生物科技有限公司代理的Cell Biolabs品牌除了提供AAV病毒的全套载体系统外,还有腺病毒(Adenovirus),慢病毒(Lentivirus)和逆转录病毒(Retrovirus)载体系统,为广大科研用户提供了高效、便捷的病毒载体产品库,小编之后还会一一为大家介绍这些病毒载体,敬请期待!

上海金畔生物科技有限公司作为Cell Biolabs中国区代理,始终秉承着专业、严谨的态度为广大生物科技领域科研与企业客户提供高品质产品与优质服务,如果您对上述产品感兴趣,欢迎随时拨打全国客服热线021-50837765或登录上海金畔生物科技有限公司官方网站www.jinpanbio.cn查询订购!

StabyExpress T7蛋白表达系统

在蛋白表达中质粒的不稳定性是一个不得不面对而又亟需解决的问题。一般情况下,蛋白表达过程需要携带目的基因的载体的菌体质粒过表达。由于蛋白表达产物(即过表达的目的蛋白)对于菌体的代谢来说是一个沉重的负担,因此携带表达载体质粒的菌体数量会逐渐减少。抗生素抗性基因是为避免不携带质粒的菌体存活并在菌群中占主导地位而使用的最常见的选择性标记。然而,从医疗及环保的角度,蛋白表达产物中的抗生素污染(包括编码抗生素抗性基因的DNA)是不可接受的。

Delphi Genetics提供的创新型产品和服务都使用了基于细菌制毒-解毒基因这一独特的Staby™技术,极大的提高了StabyExpress T7蛋白表达系统DNA克隆的稳定性和高效率,促进不含抗生素的重组蛋白的成功生产。其相应的产品是由一系列新颖独特的细菌菌株以及相应的克隆和表达载体体现出来,并以Kit的形式提供给客户使用。其产品领域可分为用于PCR克隆的StabyCloning™,用于原核表达的StabyExpress™、Staby™Codon、Cherry™ Express等表达系统,以及相应的感受态细胞核培养基等产品。

其中StabyExpress™ T7蛋白表达系统 (Genetics StabyExpress™ T7 Kit) 是基于在质粒、染色体以及噬菌体中发现的天然解毒/毒性基因的基础上研制的。ccdB毒性基因编码一组稳定的短链蛋白(约100个氨基酸),而ccdA解毒基因则编码一组不稳定的短链蛋白(约90个氨基酸),此蛋白可以中和ccdB蛋白的毒性。在StabyExpress™ T7蛋白表达系统中,ccdB毒性基因则被引入到菌体的染色体中,而解毒基因ccdA则引入到了质粒DNA中。这样当质粒存在于细菌中,就不产生毒性了。而当质粒丢失后,解毒基因降解,即产生毒性,导致细胞死亡。StabyExpress T7蛋白表达系统

在E.coli中检测此系统,结果显示完美的质粒稳定性,而一些无此技术的载体则不稳定。StabyExpress™ T7技术应用于T7启动子启动的蛋白表达。图标比较了在使用和不使用此系统的条件下69kDa蛋白表达的情况。由结果可见,使用StabyExpress质粒在诱导表达前后都能保持完美的稳定性。反之,若采用传统的BL21(DE3菌系)则质粒不能够保持稳定性。结果目的蛋白的表达量高于不采用该系统的的3-5倍,并且解毒蛋白没有表达。

StabyExpress™ T7蛋白表达系统含有表达质粒DNA、感受态细菌(克隆及表达)、菌体生长的培养液、测序引物、蛋白表达对照以及产品说明书:

产品名称 货号
StabyExpress T7 expression kit(electrocompetent 5RXN) GE-SET7-0505
StabyExpress T7 expression kit(chemically-competent 5RXN) GE-SET7-0707
StabyExpress T7 expression kit(electrocompetent 10RXN) GE-SET7-1010
10×50ul cloning and 10×50ul expression bacteria(electrocompetent) GE-SET7-1111
StabyExpress T7 expression kit(chemically-competent 10RXN) GE-SET7-1212
10×50ul cloning and 10×50ul expression bacteria(chemicallycompetent) GE-SET7-1313 
StabyExpress T7 expression kit(electrocompetent 20RXN) GE-SET7-2020
StabyExpress T7 expression kit(chemically-competent 20RXN) GE-SET7-2222
20×50ul StabyExpress T7 expression bacteria SE1(electrocompetent) GE-SET7-0020
20×100ul StabyExpress T7 expression bacteria SE1(chemicallycompetent) GE-SET7-0022
更详细信息请点击查看:https://www.delphigenetics.com/product-details-48.html

StabyExpress™ T7蛋白表达系统(StabyExpress™ T7 Kit)高效蛋白表达系统的特点:

  • 高产量的表达蛋白产物;StabyExpress T7蛋白表达系统
  • 非目的蛋白的背景降低;
  • 无需每次表达之前改造质粒;
  • 蛋白生产流程的标准化;
  • 无需使用抗生素;
  • 该系统适合于任何常规培养基

使用StabyExpress™ T7蛋白表达系统,可以在无抗生素的情况下有完美的质粒稳定性和高效的蛋白产量。StabyExpress™ 质粒在诱导表达前后都能保持完美的稳定性,蛋白表达量也是传统系统的3-5倍。

上海金畔生物科技有限公司公司作为Delphi包括澳门、香港在内的中国地区独家一级代理商。将其优秀的表达系统推荐给国内的科研以及生物制药生产用户。如果您对Delphi Genetics的Staby® 技术以及其独特的StabyCloning™、StabyExpress™、Staby™Codon、Cherry™ Express等系统感兴趣,请致电021-50837765到上海金畔生物科技有限公司垂询这一新颖的Staby® 基因克隆及蛋白表达实验解决方案,或索取最新的Delphi Genetics产品资料。