人粒细胞集落刺激因子(G-CSF)酶联免疫检测试剂盒说明
用 途:用于人血清、血浆及相关液体样本中粒细胞集落刺激因子(G-CSF)测定。
工作原理
本试剂盒采用的是生物素双抗体夹心酶联免疫吸附法(ELISA)测定样品中人粒细胞集落刺激因子(G-CSF)水平。向预先包被了人粒细胞集落刺激因子(G-CSF)单克隆抗体的酶标孔中加入人粒细胞集落刺激因子(G-CSF),温育;温育后,加入生物素标记的抗粒细胞集落刺激因子(G-CSF)抗体。再与链霉亲和素-HRP结合,形成免疫复合物,再经过温育和洗涤,去除未结合的酶,然后加入底物A、B,产生蓝色,并在酸的作用下转化成最终的黄色。颜色的深浅与样品中人粒细胞集落刺激因子(G-CSF)的浓度呈正相关。
试剂盒组成
试剂盒组成 |
48孔配置 |
96孔配置 |
保存 |
说明书 |
1份 |
1份 |
|
封板膜 |
2片(48) |
2片(96) |
|
密封袋 |
1个 |
1个 |
|
酶标包被板 |
1×48 |
1×96 |
2-8℃保存 |
标准品1200 ng/L |
0.5ml×1瓶 |
0.5ml×1瓶 |
2-8℃保存 |
标准品稀释液 |
3ml×1瓶 |
6ml×1瓶 |
2-8℃保存 |
链霉亲和素-HRP |
3 ml×1瓶 |
6 ml×1瓶 |
2-8℃保存 |
生物素标记的抗G-CSF抗体 |
0.5ml×1瓶 |
1 ml×1瓶 |
2-8℃保存 |
显色剂A液 |
3 ml×1瓶 |
6 ml×1瓶 |
2-8℃保存 |
显色剂B液 |
3 ml×1瓶 |
6 ml×1瓶 |
2-8℃保存 |
终止液 |
3ml×1瓶 |
6ml×1瓶 |
2-8℃保存 |
浓缩洗涤液 |
(20ml×20倍)×1瓶 |
(20ml×30倍)×1瓶 |
2-8℃保存 |
需要而未提供的试剂和器材
1. 37℃恒温箱。
2. 标准规格酶标仪。
3. 精密移液器及一次性吸头
4. 蒸馏水,
5. 一次性试管
6. 吸水纸
注意事项
1. 从2-8℃取出的试剂盒,在开启试剂盒之前要室温平衡至少30分钟。酶标包被板开封后如未用完,板条应装入密封袋中保存。
2. 各步加样均应使用加样器,并经常校对其准确性,以避免试验误差
3. 严格按照说明书的操作进行,试验结果判定必须以酶标仪读数为准.
4. 为避免交叉污染,要避免重复使用手中的吸头和封板膜。
5. 不用的其它试剂应包装好或盖好。不同批号的试剂不要混用。保质前使用。
6. 底物B对光敏感,避免长时间暴露于光下。
洗板方法
手工洗板方法:甩掉酶标板内的液体;在实验台上铺垫几层吸水纸,酶标板朝下用力拍几次;将稀释后的洗涤液至少0.35ml注入孔内,浸泡1-2分钟。根据需要,重复此过程数次。
自动洗板:如果有自动洗板机,应在熟练使用后再用到正式实验过程中
标本要求
1.不能检测含NaN3的样品,因NaN3抑制辣根过氧化物酶的(HRP)活性。
2.标本采集后尽早进行提取,提取按相关文献进行,提取后应尽快进行实验。若不能马上进行试验,可将标本放于-20℃保存,但应避免反复冻融。
操作程序
1. 标准品的稀释:(本试剂盒提供原倍标准品一支,用户可按照下列图表在小试管中进行稀释。)
600ng/L |
5号标准品 |
120μl的原倍标准品加入120μl标准品稀释液 |
300ng/L |
4号标准品 |
120μl的5号标准品加入120μl标准品稀释液 |
150ng/L |
3号标准品 |
120μl的4号标准品加入120μl标准品稀释液 |
75ng/L |
2号标准品 |
120μl的3号标准品加入120μl标准品稀释液 |
37.5ng/L |
1号标准品 |
120μl的2号标准品加入120μl标准品稀释液 |
2. 根据代测样品数量加上标准品的数量决定所需的板条数。每个标准品和空白孔建议做复孔。每个样品根据自己的数量来定,能使用复孔的尽量做复孔。
3. 加样:1)空白孔,空白对照孔不加样品,生物素标记的抗G-CSF抗体,链霉亲和素-HRP,只加显色剂A&B和终止液,其余各步操作相同;2)标准品孔:加入标准品50ul,链霉亲和素-HRP50ul(标准品中已事先整合好生物素抗体,故不加);3)代测样品孔:加入样本40ul,然后各加入抗G-CSF抗体10ul、链霉亲和素-HRP50ul,盖上封板膜,轻轻震荡混匀,37℃温育60分钟。
4. 配液:将30倍浓缩洗涤液用蒸馏水30倍稀释后备用。
5. 洗涤:小心揭掉封板膜,弃去液体,甩干,每孔加满洗涤液,静置30秒后弃去,如此重复5次,拍干。
6. 显色:每孔先加入显色剂A50ul,再加入显色剂B50μl,轻轻震荡混匀,37℃避光显色15分钟.
7. 终止:每孔加终止液50μl,终止反应(此时蓝色立转黄色)。
8. 测定:以空白空调零,450nm波长依序测量各孔的吸光度(OD值)。 测定应在加终止液后10分钟以内进行。
9. 根据标准品的浓度及对应的OD值计算出标准曲线的直线回归方程,再根据样品的OD值在回归方程上计算出对应的样品浓度。也可以使用各种应用软件来计算。
操作程序总结:
1.准备试剂,样品和标准品
2.加入准备好的样品和标准品,生物素标记的二抗和酶标试剂,37℃反应60分钟
3.洗板5次,加入显色液A、B,37℃显色15分钟
4.加入终止液
5.10分钟内读OD值
6.计算
试剂盒性能:
1.样品线性回归与预期浓度相关系数R值为0.92以上。
2.批内与批间应分别小于9%和15%
检测范围:
检测范围:20ng/L – 600ng/L
保存条件及有效期:
保存:2-8℃。
有效期:6个月(2-8℃)。