人粒细胞集落刺激因子(G-CSF)酶联免疫检测试剂盒说明

人粒细胞集落刺激因子(G-CSF)酶联免疫检测试剂盒说明

   用于人血清、血浆及相关液体样本中粒细胞集落刺激因子(G-CSF)测定。

工作原理

本试剂盒采用的生物素双抗体夹心酶联免疫吸附法ELISA)测定样品中人粒细胞集落刺激因子(G-CSF)水平。向预先包被了人粒细胞集落刺激因子(G-CSF)单克隆抗体的酶标孔中加入人粒细胞集落刺激因子(G-CSF),温育;温育后,加入生物素标记的抗粒细胞集落刺激因子(G-CSF)抗体。再与链霉亲和素-HRP结合,形成免疫复合物,再经过温育和洗涤,去除未结合的酶,然后加入底物A、B,产生蓝色,并在酸的作用下转化成最终的黄色。颜色的深浅与样品中人粒细胞集落刺激因子(G-CSF)的浓度呈正相关。

试剂盒组成

试剂盒组成

48孔配置

96孔配置

保存

说明书

1

1

封板膜

2片(48

2片(96

密封袋

1

1

酶标包被板

1×48

1×96

2-8℃保存

标准品1200 ng/L

0.5ml×1

0.5ml×1

2-8℃保存

标准品稀释液

3ml×1

6ml×1

2-8℃保存

链霉亲和素-HRP

3 ml×1

6 ml×1

2-8℃保存

生物素标记的抗G-CSF抗体

0.5ml×1

1 ml×1

2-8℃保存

显色剂A

3 ml×1

6 ml×1

2-8℃保存

显色剂B

3 ml×1

6 ml×1

2-8℃保存

终止液

3ml×1

6ml×1

2-8℃保存

浓缩洗涤液

20ml×20倍)×1

20ml×30倍)×1

2-8℃保存

需要而未提供的试剂和器材

1. 37恒温箱。

2. 标准规格酶标仪。

3. 精密移液器及一次性吸头

4. 蒸馏水,

5. 一次性试管

6. 吸水纸

注意事项

1. 2-8℃取出的试剂盒,在开启试剂盒之前要室温平衡至少30分钟。酶标包被板开封后如未用完,板条应装入密封袋中保存。

2. 各步加样均应使用加样器,并经常校对其准确性,以避免试验误差

3. 严格按照说明书的操作进行,试验结果判定必须以酶标仪读数为准.

4. 免交叉污染,要避免重复使用手中的吸头和封板膜

5. 不用的其它试剂应包装好或盖好。不同批号的试剂不要混用。保质前使用。

6. 底物B对光敏感,避免长时间暴露于光下。

洗板方法

手工洗板方法:甩掉酶标板内的液体;在实验台上铺垫几层吸水纸,酶标板朝下用力拍几次;将稀释后的洗涤液至少0.35ml注入孔内,浸泡1-2分钟。根据需要,重复此过程数次。

自动洗板:如果有自动洗板机,应在熟练使用后再用到正式实验过程中

标本要求

1.不能检测含NaN3的样品,因NaN3抑制辣根过氧化物酶的(HRP)活性。

2.标本采集后尽早进行提取,提取按相关文献进行,提取后应尽快进行实验。若不能马上进行试验,可将标本放于-20℃保存,但避免反复冻融

操作程序

1. 标准品的稀释:(本试剂盒提供原倍标准品一支,用户可按照下列图表在小试管中进行稀释。)

600ng/L

5号标准品

120μl的原倍标准品加入120μl标准品稀释液

300ng/L

4号标准品

120μl的5号标准品加入120μl标准品稀释液

150ng/L

3号标准品

120μl的4号标准品加入120μl标准品稀释液

75ng/L

2号标准品

120μl的3号标准品加入120μl标准品稀释液

37.5ng/L

1号标准品

120μl的2号标准品加入120μl标准品稀释液

2. 根据代测样品数量加上标准品的数量决定所需的板条数。每个标准品和空白孔建议做复孔。每个样品根据自己的数量来定,能使用复孔的尽量做复孔。

3. 加样:1)空白孔,空白对照孔不加样品,生物素标记的抗G-CSF抗体,链霉亲和素-HRP,只加显色剂A&B和终止液,其余各步操作相同2)标准品孔:加入标准品50ul,链霉亲和素-HRP50ul(标准品中已事先整合好生物素抗体,故不加);3)代测样品孔:加入样本40ul,然后各加入G-CSF抗体10ul、链霉亲和素-HRP50ul,盖上封板膜,轻轻震荡混匀,37℃温育60分钟

4. 配液:将30倍浓缩洗涤液用蒸馏水30倍稀释后备用。

5. 洗涤:小心揭掉封板膜,弃去液体,甩干,每孔加满洗涤液,静置30秒后弃去,如此重复5次,拍干。

6. 显色:每孔先加入显色剂A50ul,再加入显色剂B50μl,轻轻震荡混匀,37℃避光显色15分钟.

7. 终止:每孔加终止50μl,终止反应(此时蓝色立转黄色)

8. 测定:以空白空调零,450nm波长依序测量各孔的吸光度(OD值) 测定应在加终止液后10分钟以内进行。

9. 根据标准品的浓度及对应的OD值计算出标准曲线的直线回归方程,再根据样品的OD值在回归方程上计算出对应的样品浓度。也可以使用各种应用软件来计算。

操作程序总结:

1.准备试剂,样品和标准品

2.加入准备好的样品和标准品,生物素标记的二抗和酶标试剂,37℃反应60分钟

3.洗板5次,加入显色液A、B,37℃显色15分钟

4.加入终止液

5.10分钟内读OD值

6.计算

试剂盒性能:

1.样品线性回归与预期浓度相关系数R值为0.92以上。

2.批内与批间应分别小于9%和15%

检测范围:

检测范围:20ng/L 600ng/L

保存条件及有效期:

保存:2-8

有效期:6个月(2-8℃)。

聚焦蛋白质氧化:二溴酪氨酸

聚焦蛋白质氧化:二溴酪氨酸

什么是二溴酪氨酸? 二溴酪氨酸是一种相对较新的生物标志物,表明氧化应激介导的蛋白质增强。当中性粒细胞中的髓过氧化物酶 (MPO)和嗜酸性粒细胞中的嗜酸性粒细胞过氧化物酶 (EPO) 催化过氧化氢(H2O2)和溴离子 (BR-) 离子形成次溴酸 (HOBr) 时,就会形成最终的生物标志物。生成的 HOBr 导致酪氨酸 3 和 5 位被 Br 取代。

二溴酪氨酸研究兴趣

二溴酪氨酸被认为是哮喘和类似疾病的可能的诊断生物标志物。(1-3)
最近,研究人员研究了二溴酪氨酸在心肌梗塞和中风动物模型中研究缺血再灌注相关组织损伤问题的有用性。

二溴酪氨酸 (DiBrY) 抗体:克隆 3A5 (20 µg)


中性粒细胞和嗜酸性粒细胞在抵抗微生物感染的防御系统中发挥着重要作用。已知髓过氧化物酶(MPO)和嗜酸性粒细胞过氧化物酶(EPO)可催化次氯酸(HOCl)和次溴酸(HOBr)的形成。这些反应中间体可能与蛋白质、脂质和核苷酸发生反应,据报道会形成酪氨酸卤化物,例如二溴酪氨酸(DiBrY)。 DiBrY 是 3- 和 5- 位 Br 修饰的酪氨酸,是中性粒细胞髓过氧化物酶衍生的主要氧化产物之一。

聚焦蛋白质氧化:二溴酪氨酸

大鼠外周血中性粒细胞完全培养基


大鼠外周血中性粒细胞完全培养基

货号:CM-R186

价格:¥550¥2480¥

规格:

100mL

  • 100mL
  • 125mL×4

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产品概述

产品简介

大鼠外周血中性粒细胞完全培养基由普诺赛技术团队精心优化,经过长期测试,本产品可保持大鼠外周血中性粒细胞最佳的生长状态。本产品中已包含大鼠外周血中性粒细胞生长所需的各种成分,无需添加任何成分,可直接用于大鼠外周血中性粒细胞的体外培养。本产品仅供进一步科研使用,不得用于诊断、治疗、临床、家庭及其它用途。

产品说明

产品形态 液体
产品浓度
产品规格 100mL/125mL×4
细菌检测 阴性
真菌检测 阴性
支原体检测 阴性
细胞生长实验 细胞生长良好,形态正常
内毒素含量(EU/mL) ≤3
储存条件 2℃-8℃,避光储存
运输条件 冰袋冷藏运输
有效期 3个月

注意事项

1、使用产品时应注意无菌操作,避免污染。
2、本产品含有血清和双抗,如无特别需要不用额外再添加血清和双抗,可以直接使用。
3、为保持本产品的最佳使用效果,不宜将其长时间放置于室温或较高的温度环境中。
4、所有产品请于保质期内使用,超出保质期,必须放弃使用。
5、本产品只供进一步科研使用,不可应用于临床等其他方面。
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大鼠外周血中性粒细胞


大鼠外周血中性粒细胞

货号:CP-R186

规格:5×10⁵Cells/T25培养瓶

价格: ¥4380

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产品概述

大鼠外周血中性粒细胞

Cat NO.: CP-R186

1.产品名称:大鼠外周血中性粒细胞

2.组织来源:外周血

3.产品规格:5×105cells/T25细胞培养瓶

4.细胞简介:

大鼠外周血中性粒细胞分离自外周血;外周血是除骨髓之外的血液,临床上常用一些方法把骨髓中的造血干细胞释放到血液中,再在从血液中提取分离得到造血干细胞,我们把这样得到的干细胞称为外周血干细胞,在二十一世纪初人类开始的生命方舟计划中首次提出外周血这一新概念。白细胞是一类无色、球形、有核的血细胞。白细胞不是一个均一的细胞群,根据其形态、功能和来源部位可以分为三大类:粒细胞、单核细胞和淋巴细胞,其中粒细胞又可根据胞质中颗粒的染色性质不同,分为中性粒细胞、嗜酸粒细胞和嗜碱粒细胞三种。中性粒细胞是在瑞氏(Wright)染色血涂片中,胞质呈无色或极浅的淡红色,有许多弥散分布的细小的(0.2~0.4微米)浅红或浅紫色的特有颗粒。细胞核呈杆状或2~5分叶状,叶与叶间有细丝相连。中性粒细胞具趋化作用、吞噬作用和杀菌作用。中性粒细胞来源于骨髓,具有分叶形或杆状的核,胞浆内含有大量既不嗜碱也不嗜酸的中性细颗粒。这些颗粒多是溶酶体,内含髓过氧化酶、溶菌酶、碱性磷酸酶和酸性水解酶等丰富的酶类,与细胞的吞噬和消化功能有关。中性粒细胞在血液的非特异性免疫中起着十分重要的作用,它处于机体抵御微生物病原体,特别是在化脓性细菌入侵的第一线,具有很强的吞噬活性,可吞噬细菌、衰老的红细胞、抗原一抗体复合物和坏死的细胞等。中性粒细胞内含有大量溶酶体酶,因此能将吞噬入细胞内的细菌和组织碎片彻底分解。当中性粒细胞吞噬数十个细菌后,自身发生解体,所释出的各种溶酶体酶类能溶解周围组织而形成脓液。中性粒细胞是人体内寿命最短的细胞,一般体外培养12-24h内活性稳定,48h活性下降,96h基本死亡。

5.方法简介:

普诺赛实验室分离的大鼠外周血中性粒细胞采用取外周血、通过密度梯度离心法制备而来,细胞总量约为5×10⁵cells/瓶。

6.质量检测:

普诺赛实验室分离的大鼠外周血中性粒细胞经瑞氏染色法,纯度可达90%以上,且不含有HIV-1、HBV、HCV、支原体、细菌、酵母和真菌等。

7.培养信息:

包被条件
培养基 含FBS、生长添加剂、Penicillin、Streptomycin等
产品货号 CM-R186
换液频率 每2-3天换液一次
生长特性 悬浮
细胞形态 圆形
传代特性 不增殖;不传代
消化液 0.25%胰蛋白酶
培养条件 气相:空气,95%;CO2,5%

大鼠外周血中性粒细胞体外培养周期有限;建议使用普诺赛配套的专用生长培养基及正确的操作方法来培养,以此保证该细胞的最佳培养状态。

产品手册

大鼠外周血中性粒细胞.pdf

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人外周血中性粒细胞完全培养基


人外周血中性粒细胞完全培养基

货号:CM-H197

价格:¥450¥2000¥

规格:

100mL

  • 100mL
  • 125mL×4

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产品概述

产品简介

人外周血中性粒细胞完全培养基由普诺赛技术团队精心优化,经过长期测试,本产品可保持人外周血中性粒细胞最佳的生长状态。本产品中已包含人外周血中性粒细胞生长所需的各种成分,无需添加任何成分,可直接用于人外周血中性粒细胞的体外培养。本产品仅供进一步科研使用,不得用于诊断、治疗、临床、家庭及其它用途。

产品说明

产品形态 液体
产品浓度
产品规格 100mL/125mL×4
细菌检测 阴性
真菌检测 阴性
支原体检测 阴性
细胞生长实验 细胞生长良好,形态正常
内毒素含量(EU/mL) ≤3
储存条件 2℃-8℃,避光储存
运输条件 冰袋冷藏运输
有效期 3个月

注意事项

1、使用产品时应注意无菌操作,避免污染。
2、本产品含有血清和双抗,如无特别需要不用额外再添加血清和双抗,可以直接使用。
3、为保持本产品的最佳使用效果,不宜将其长时间放置于室温或较高的温度环境中。
4、所有产品请于保质期内使用,超出保质期,必须放弃使用。
5、本产品只供进一步科研使用,不可应用于临床等其他方面。
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