利用重组鲎试剂进行内毒素检测


利用重组鲎试剂进行内毒素检测

利用重组鲎试剂进行内毒素检测

富士胶片株式会社 生命科学&工程研究所

福地 大树

◆前言

内毒素是存在于革兰氏阴性菌细胞壁外膜的脂多糖(Lipopolysaccharide),进入血液后,只需极少量即可引发出发热症状,大量存在则表现出强毒性,可导致内毒素休克甚至死亡1)。由于革兰氏阴性菌广泛分布于环境中,存在混入生产过程的风险,而混入的内毒素具有耐热性,不易灭活,因此要求注射剂和医疗器械接受严密的内毒素污染管理。近年备受关注的再生医疗、疫苗、抗体和核酸医药相关的产品,内毒素管理对这类产品而言非常重要。

目前检测主流是使用一种利用了马蹄蟹血细胞提取物成分凝血系统的试剂——鲎试剂,来检测内毒素,但为了保护鲎科、稳定供应鲎试剂、减少产品批间差异、提高检测稳定性,各鲎试剂厂家开始促进使用人工原料生产的重组蛋白来研发内毒素检测试剂。

 


内毒素检查法的检测原理

       内毒素检查法是使用从马蹄蟹血细胞成分制备得到的裂解试剂进行内毒素检测或定量的方法。马蹄蟹的血细胞提取物成分具有使内毒素凝固的反应体系,这种凝固反应以多个丝氨酸蛋白酶前体依次活化的级联反应为基础(图1)。

       内毒素激活马蹄蟹血细胞提取物中含有的C因子,随后活化C因子激活B因子。活化B因子再激活凝血酶原,激活的凝血酶将凝血蛋白原底物水解,并将其转化为凝固蛋白,生成不溶性凝胶。

       另外,在马蹄蟹血细胞提取物中,级联反应还会以G因子为起点,与β-葡聚糖发生反应,由β-葡聚糖引起凝血反应(图1)。若想要特异性检测内毒素,需要通过去除G因子或抑制以G因子为起点的级联反应来检测。

利用重组鲎试剂进行内毒素检测

图1. 由内毒素、β-葡聚糖引起的凝血级联反应

内毒素的检测方法

内毒素检测大致可分为以下3种:凝胶法(以裂解物试剂的凝胶形成作为指标)、浊度法(检测伴随凝胶化变化的吸光度或透射率来测定浊度变化)、显色法(以合成底物水解产生的显色作为指标)。显色法比凝胶法、浊度法的灵敏度要高。利用重组蛋白的内毒素检测试剂中,除了使用显色合成底物的显色法之外,还有荧光合成底物的检测方法。

 


利用重组蛋白的内毒素检测试剂

       目前各公司销售的重组蛋白内毒素检测试剂可分为两种,使用C因子重组蛋白的单因子鲎试剂和使用C因子、B因子、凝血酶原重组蛋白的三因子鲎试剂(图2)。

       单因子试剂由于级联反应没有放大,产生的蛋白酶活性小,需要使用荧光底物进行荧光检测。三因子体系试剂与单因子体系试剂相比,酶活性较大,可产生显色反应,因此可以用普通的酶标仪来检测。

       另外,近年有报告称,B因子对内毒素的特异性具有重要作用2,3),相比只含有C因子的单因子鲎试剂,含C因子、B因子和凝血酶原三因子鲎试剂。富士胶片和光一直致力于研发三因子重组鲎试剂,目前最新推出的使用重组蛋白的重组鲎试剂(PYROSTAR™ Neo),有着良好的检测性能。

利用重组鲎试剂进行内毒素检测

图2. 利用重组蛋白的内毒素检测试剂种类

PYROSTAR™ Neo

本次富士胶片和光发售的重组鲎试剂PYROSTAR™ Neo,具有以下的特点:对空白值进行了控制,空白值更低,因此可检测到更低的内毒素浓度(表1)。另外,使用显色法进行检测是裂解试剂的常规分析方法之一,重组鲎试剂PYROSTAR™ Neo检测和分析时可使用能够进行动力学测定的恒温酶标仪和软件进行读数。PYROSTAR™ Neo可以定量0.001 EU/mL~50 EU/mL范围内的内毒素浓度,并能够获得线性良好的标准曲线(相关系数在0.980以上)。

 

表1. PYROSTAR™ Neo与其他公司产品的比较

PYROSTAR™ Neo

其他公司产品1

其他公司产品2

其他公司产品3

因子

三因子系统

单因子系统

定量范围

(EU/mL)

0.001~50
    (显色时间分析法)

0.005~50
(显色时间分析法)
0.002~0.1
(反应速度法)

0.005~5

0.005~50

检测方法

显色法

显色法

荧光法

荧光法

结语

目前内毒素检测试剂多为以鲎血为原料的裂解液鲎试剂,而使用人工重组蛋白的内毒素检测试剂,其历史较短,并未得到广泛应用。

在此背景下,为推进重组鲎试剂的应用,2021年欧洲药典收录了采用荧光法的重组C因子鲎试剂并作为常规检测方法。在日本药典第十八次修订的最新版本中,收录了《内毒素检测方法与使用重组鲎试剂的替代法》(「エンドトキシン試験法と測定試薬に遺伝子組換えタンパク質を用いる代替法」)作为补充参考信息,但重组鲎试剂并不属于内毒素检查法中规定的“马蹄蟹血细胞提取物成分制备的裂解试剂”。同样,美国药典也将重组鲎试剂视为替代法。据报告,使用替代法时,相比使用裂解试剂的内毒素检查法,需要对这两种方法进行对比研究,确保重组鲎试剂有相同或更高水平的真实性、准确度、灵敏度、特异性等 4)

今后富士胶片和光将会继续推进重组鲎试剂应用于内毒素检测中的研究,但需满足真实性、准确度、灵敏度、特异性这几点才能满足考虑替代法的制药公司等用户的需求。我们将继续推进鲎试剂的研究,努力实现用户需求、环境和马蹄蟹保护之间的平衡。

参考文献

1)棚元憲一:エンドトキシンと医薬品の品質管理,国立医薬品食品衛生研究所報告,126,19(2008).

2)Kobayashi, Y. et al. : J. Biol. Chem., 290, 19379 (2015).

3)Tsuchiya, M. : Int. J. Dev. Res., 10, 36751 (2020).

4)菊池裕 他:医薬品医療機器レギュラトリーサイエンス,48,252(2017).

相关产品

内毒素检测重组鲎试剂 PYROSTAR™ Neo

Cygnus CHO HCP检测试剂盒区别

Cygnus Technologies Inc.(以下简称“Cygnus”)是美国一家专注于为制药和生物技术企业工艺研发和质量管理中提供专业分析产品及解决方案的公司。作为公认的生物污染物领导企业,Cygnus产品线覆盖广泛,包括针对多种不同宿主的HCP检测试剂盒,适用不同填料的Protein A检测试剂盒,满足不同实验需求的宿主DNA残留检测试剂盒,其他生物过程中污染物残留检测试剂盒,以及针对特殊样品和工艺的专属抗体和试剂盒定制服务。

Cygnus众多产品当中,最知名要数CHO HCP残留检测试剂盒,自上市以来,这个系列的试剂盒不仅得到广大使用者的认可,更得到了各地药品监管部门,如美国FDA,中国CFDA的认可,为企业产品申报节省了大量时间与金钱。目前,Cygnus CHO HCP检测试剂盒已经发展到第三代产品。出于一定原因,Cygnus在研发新试剂盒的同时,没有停止生产销售前两代试剂盒。这给一些使用者在产品选择上带来了困扰。这三款试剂盒之间到底有什么样的区别和联系?为什么新版试剂盒的推出没有导致老板试剂盒的停产?初次进行HCP研究的人员该怎么样选择合适的试剂盒?下面将对不同试剂盒进行比较分析,并给出选择建议。

F015第一代CHO HCP检测试剂盒。F015是Cygnus在12年前开发的第一款CHO HCP检测试剂盒,洗脱后的CHO细胞经过温和裂解后,将此裂解液做免疫原,并用于抗体的亲和纯化和试剂盒标准的建立。这个温和裂解的过程产生了一系列HCP,这些HCP与收获产品时细胞培养基中的HCP极为相似。

CM015第二代CHO HCP检测试剂盒。继F015试剂盒上市2年后,Cygnus推出了CHO HCP检测第二代产品CM015。第二代试剂盒采用条件培养基(conditioned media)进行试剂盒的研发,由于大部分由CHO细胞表达的产品会分泌到条件培养基中,所以在这种培养基研发出的抗体或试剂盒比细胞裂解液特异性更强。

F550-1第三代CHO HCP检测试剂盒。直至今日,Cygnus的第三代F550-1 CHO HCP检测试剂盒已经得到了来自全球使用者的认可。与CM015类似,F550-1同样采用条件培养基进行抗体的生产。然而,这次Cygnus研发团队利用最新的技术筛选出一种新的条件培养基,这个培养基所产生的HCP的验证结果显示这些HCP在大多数CHO表达的产品中更广泛的存在。所以,对于绝大部分样品,F550-1是目前可更广泛与不同样品反应,并能提供更准确检测结果的试剂盒。

CHO HCP检测试剂盒的选择:

对于指定的产品或者样品类型,在没有前期验证的情况下,没有人能够预测哪个试剂盒最适合。因为F550-1抗体的生产和试剂盒的研发采用的是最先进的技术,并且抗体对于大部分样品能够更广泛的反应,所以建议新的使用者首先测试这个试剂盒。所选择的方法是否适用,需要使用者从灵敏性,准确性和特异性等多方面进行验证。首先,要对试剂盒的特异性进行验证,即样品中的添加物,缓冲盐,pH,或产品蛋白本身不会与试剂盒中的抗体交叉反应。不然,这种非特异性结合的增加会高估实际HCP含量。在特异性确定后,使用者要确认样品中没有能够抑制真实HCP检测的物质。这可以通过对待测样品进行加标回收实验验证。为了进一步证明这一点,同时还要进行线性稀释实验来证明样品中是否含有含量过高的通常在纯化上游中出现的HCP。以上验证实验结果结合在一起可以初步说明哪个试剂盒对特定样品更适用。

以上是对于Cygnus不同CHO HCP检测试剂盒的介绍和选择建议,希望读者能够从中获益,以便选择最适合自己样品的检测方法。上海金畔生物科技有限公司(以下简称“上海金畔生物科技有限公司”)作为Cygnus在中国一级代理商,与国内众多知名药企,CRO/CMO企业建立了长久稳定的合作关系。多年来上海金畔生物科技有限公司的产品及服务帮助许多企业加速R&D阶段,提高药物质量、纯度和安全,加速优化研发工艺,减少产品上市时间,降低QC成本。如您的产品涉及特殊样品或表达系统,上海金畔生物科技有限公司还可以为您定制专属于您的产品的解决方案和验证服务。更多信息,欢迎致电上海金畔生物科技有限公司021-50837765进行洽谈。

仪器上新 | 达普数字PCR系统

数字PCR原理及工作流程

微滴式数字PCR是一种基于PCR反应的单分子绝对定量技术。原理是将标准PCR反应体 系,用“油包水”的技术,把待检核酸靶分子分隔在几万个纳升级的液滴中,然后进行PCR反应。含有单分子模板的液滴在扩增后具有荧光信号,在读取每一个微液滴荧光信号后,根据荧光信号及泊松分布原理可以实现单分子绝对定量。

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应用领域

达普生物自主研发的数字PCR系统具有很高的灵敏度、准确性和重复性。可广泛应用于肿瘤液体活检、靶向治疗伴随诊断、无创产期检测、病原微生物检测、食品安全检测、遗传疾病诊断、移植排斥监控、肠道菌群的分析、药物基因组检测、基因表达分析、环境检测和分子生态、农业和植物检测等多个领域。

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数字PCR主要产品

1、液滴生成仪

仪器上新 | 达普数字PCR系统

仪器特点:

  1. 可同时处理1-32个样本,收集于8联排PCR管中;
  2. 3万个纳升级液滴快速生成;
  3. 液滴自动收集设计,无需手动转移,减少液滴损失。

2、便携液滴生成仪

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仪器特点:

  1. 小巧精致,手持大小;
  2. 可同时处理1-8个样本;
  3. 单管可生成20万液滴;
  4. 液滴直接自动收集到8联管,无转移无液滴损失。

3、液滴阅读仪

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仪器特点

  1. 开放式平台;
  2. FAM,CY5双色荧光通道,可做出多重PCR;
  3. 设有3/6/12万液滴阅读芯片,灵活适用各类应用;
  4. 一键简洁设计,容易操作。

4、高性能液滴数字PCR试剂

仪器上新 | 达普数字PCR系统

产品种类

  1. 预混式Taqman探针法
  2. 预混式EVAGreen染料法
  3. UDG防污染体系
  4. 一体式液滴生成及检测油

达普生物简介

达普生物科技有限公司(ThunderBio Innovation Limited)成立于 2018 年,由多位海归博士、企业家、管理团队以及香港科技大学,英国帝国理工等技术团队共同创立。公司团队拥有十余年的微流控芯片、仪器和试剂开发经验,拥有多个在微流控及分子诊断领域的专利,高壁垒技术及广阔的应用市场。

达普生物拥有多个自主研发的仪器平台、生物芯片工厂、仪器平台及试剂体系。其中包括:自主研发数字PCR系统及数字ELISA系统,恒温PCR试剂体系及核酸快速提取仪器。主攻应用领域包括癌症早期筛查,靶向治疗伴随诊断,无创产前诊断,病毒和细菌定量检测,同时可应用于基因表达分析,遗传疾病诊断,农业和动植物检测,食品安全检测,环境监测和海洋生态等领域。公司自研的技术平台打破国外公司在高端医疗诊断仪器的长期垄断。

上海金畔生物科技有限公司是达普生物中国一级代理商,如对产品感兴趣,欢迎拨打上海金畔生物科技有限公司客服热线021-50837765或者登陆网站www.xmsjci.com了解更多信息。

蛋白免疫印迹检测试剂盒

蛋白免疫印迹检测试剂盒酶联免疫分析(EIA)用亲和力抗体检测蛋白是一种很特殊的方法。用酶标亲和力抗体和敏感底物一起用免疫组化的方法来检测与膜蛋白绑定的样本。随着蛋白结合在膜上后,用一抗选择性的和蛋白结合。通过特定单抗和血清样本的筛选,相应蛋白会结合到膜上。与碱性磷酸酶相偶联的酶标二抗直接作用于此部位。AP的底物用的是5-bromo-4-chloro-3-indolyl- phosphate/nitroblue tetrazolium (BCIP/NBT)。碱性磷酸酶可以促进BCIP的去磷酸化,从而在抗体作用部位形成不溶于水的紫色沉淀物。当曝光时颜色会有些许衰退。

蛋白免疫印迹检测试剂盒包含酶标记的具有亲和性的纯化抗体来检测小鼠,兔或者血清样本。使用中,酶标二抗(试剂盒提供)还可以在没有中介抗体的情况下直接检测小鼠,兔的膜蛋白。此试剂盒无需其他缓冲液。

产品名称

货号

规格

价格

详情

PRINCIPLE OF THE PROTEIN DETECTOR‘ WESTERN BLOT KIT

55-11-50

2500cm2

欢迎咨询

说明书

随着实验进行,目的蛋白一定会被固定在检测膜上。硝化纤维素,聚乙二烯二氟化物(PDVP)和聚酰胺纤维膜都可以应于于此试剂盒。对斑点印迹实验来说,蛋白以斑点形式出现并被固定到膜上;对免疫印迹实验来说,蛋白通过SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳分来并通过电转仪转移到膜上。

以上产品来自KPL公司,它是美国最早实现亲和素纯化二抗商业化的生物公司,同时也是世界上较大的二抗和底物显色系统生产商。产品有:亲和纯化的抗体,WB、IHC、ELISA 底物及 Kit,蛋白检测和纯化试剂盒,核酸标记和检测等试剂。为全球科研与诊断试剂生产厂商持续提供最优质的产品。

另外上海金畔生物科技有限公司公司还会根据客户的实际需求提供不同类型的生化试剂产品,你所需要都能在上海金畔生物科技有限公司公司找到一个圆满的解决方案。作为一站式服务和生命科学研究解决方案提供者,上海金畔生物科技有限公司还有多种蛋白提取、蛋白电泳、细胞染料以及显色发光底物等试剂。我们能为您提供一站式的产品及实验解决方案。如果您对上述产品感兴趣,请致电021-50837765到上海金畔生物科技有限公司垂询相关的最优产品和解决方案,或索取相关手册和资料。我们会为您做的更多!

助力新型冠状病毒诊断,核酸污染清除试剂显身手

上海金畔生物科技有限公司代理德国AppliChem DNA-ExitusPlus核酸污染清除试剂

助力新型冠状病毒诊断工作

同力协契 共克时艰

近两个多月,由2019新型冠状病毒(2019-nCoV)感染的肺炎疫情牵动着每一个人的心。为了打赢这场疫情防控阻击战,及时确诊并隔离疑似病例刻不容缓。而现阶段国家药监局审核通过的新冠肺炎检测产品大都是基于新型冠状病毒核酸检测的荧光定量PCR试剂盒,虽然PCR检测方法具有操作方便、灵敏度高等优点,但也正是由于其超高的灵敏度,使得微量的核酸污染即可造成假阳性结果。尤其在这个关键时刻,医护人员与时间赛跑,每天面对着这数以千计的检测任务,大批量样本集中进行PCR检测极易出现因实验环境核酸污染导致的假阳性问题,不仅会让检测准确率降低,还会延误病例确诊进而造成大量人力、医疗资源的浪费。在抗击疫情的关键时刻,给检测人员提供一个安全、放心的检测环境十分重要。因此,如何克服核酸污染已成为PCR检测急需解决的关键问题之一!

传统的核酸污染清除多通过修饰、酶解(如DNase)或变性等几种方式。实践证明这些方式存在未降解DNA分子、试剂具有腐蚀性和毒性等不足。

助力新型冠状病毒诊断,核酸污染清除试剂显身手

德国AppliChem的DNA-ExitusPlus™是一种无腐蚀、无致癌性的核酸(包括DNA、RNA)清除溶液。该产品可断裂双链DNA并将其降解,而且已降解的核酸片段不能被恢复,从而消除PCR过程中由于非目标DNA导致的假阳性扩增。

助力新型冠状病毒诊断,核酸污染清除试剂显身手

产品信息

DNA-ExitusPlus™ 核酸污染清除试剂

货号

规格

A7089

100ML/500ML

DNA-ExitusPlus™ IF 核酸污染清除试剂

货号

规格

A7089

100ML/500ML

DNA-ExitusPlus™特点

  1. 高效性:试剂中各组分协同催化作用,能快速、非序列特异性不可逆的降解核酸污染;
  2. 使用简单:喷洒或浸泡处理10-15分钟即可完成清除作用,升温至50度可提高反应速度;
  3. 安全无毒害:产品为非酶类试剂,且仅对裸露核酸有非常好的清除效果,不会对人体造成影响和伤害;
  4. 无污染:所有组分可生物降解、不会造成环境污染和破坏;
  5. 无腐蚀性:不含有机溶剂或者挥发性物质,不含无机酸或者碱性物质,通过严格腐蚀性测试,不会对金属形成腐蚀。

助力新型冠状病毒诊断,核酸污染清除试剂显身手

DNA-ExitusPlus™使用方法

实验操作台表面

直接将DNA-ExitusPlus™喷到操作台表面作用10~15分钟,无菌湿布擦拭后即可,无需用水冲洗。

仪器表面

用布或纸巾蘸取适量 DNAExitusPlus™擦拭仪器表面,充分作用后再用干净湿布擦一遍即可。一些小的部件可在DNA-ExitusPlus™中浸泡10min左右,然后用清水冲洗、晾干。

塑料及玻璃器皿

向容器中加入足量的DNA-ExitusPlus™,摇晃以确保器皿内壁全部接触到溶液,充分作用后弃去溶液晾干,用蒸馏水冲洗干净晾干即可。

移液器

遵照移液器说明拆取移液器的管嘴连件,于DNA-ExitusPlus™中浸泡1min,然后用清水冲洗干净晾干便可安装到移液器上。

解剖刀、镊子等实验器材

先用蘸有DNA-ExitusPlus™的布擦拭一遍,然后将镊子等器材于DNA-ExitusPlus™中浸泡10min以上,也可通过加热到50~60℃缩短处理时间。

小贴士

  1. 经DNA-ExitusPlus™处理过的台面无需再用灭菌水清洗,避免二次污染的发生。
  2. 溶液干燥后不再具有活性,不要通过延长时间来增强处理效果,对于严重污染区建议做多次处理。
  3. 溶液中添加了指示剂,干燥后呈紫色或蓝色,可擦拭不会在器物表面留下痕迹。

AppliChemDNA-ExitusPlus相关参考文献

(1) Esser, K.-H. et al. (2006) DNA decontamination: DNA-ExitusPlus in comparison with conventional reagents. Nature Methods 3, 151

(2) Arena, A. (2010) DNA exitus plus™ versus standard bleach solution for the removal of dna contaminants on work surfaces and tools. Investigative sciences journal 2, 20-29

上海金畔生物科技有限公司是AppliChem在中国一级代理商代理,如对产品感兴趣,请拨打上海金畔生物科技有限公司热线电话021-50837765咨询详情。同时,上海金畔生物科技有限公司会更好的协助科研工作者的实验工作,支持全国战“疫”,早日战胜病毒。武汉加油!中国加油

支原体预防,检测和清除

一说起支原体,估计细胞培养的人员就开始手心冒汗了。细胞培养中的急性污染很容易察觉,而支原体则像慢性毒药一般,杀细胞于无形中。除了非常有经验的老手,很多实验人员都察觉不到支原体的污染,据统计,超过25%的细胞系中感染了支原体,而研究者大多并不知晓。早期,血清可能是最主要的污染源;之后,通过实验室的仪器、培养基或其他试剂慢慢蔓延开来,细胞无不中招。怎样才能根除讨厌的支原体污染呢?让我们先来认识这个小东西。

狡猾的支原体

支原体是一种没有细胞壁的原核生物,大多呈不规则球状或丝状。由于它的直径小,而且形状灵活,所以能逃过实验室常用的滤膜。

检测、检测、再检测

对培养物进行常规的支原体检测非常重要。尽管各个实验室的检测频率不同,从几个星期到几个月不等,不过这主要取决于你们实验室有多少人接触细胞,以及你们引进新细胞的频率。比如美国国立细胞培养中心,它经常从其他实验室获得细胞培养物,就会对每个样品进行检测,并将它们隔离,直至最后证明没有支原体污染。一般来说,每两三个月进行一次定期检测是必要的。如果有新细胞进入实验室,或准备将细胞进行液氮保存,都应该进行检测。当然,如果细胞不大对劲,应立马检测。

支原体检测:

检测频率是一方面,选择合适的检测方法也很重要。到底是PCR、生化分析,ELISA还是免疫荧光呢?PCR应该是检测支原体的理想方法,他综合了几个优势,灵敏、特异、快速、廉价等。细胞培养上清可以直接用来检测,非常方便。Applichem公司提供的高灵敏度PCR Mycoplasma Test Kit(A3744),该试剂盒引物源于支原体基因的保守序列,而且即用型的PCRmix使您的使用更加方便,同时更是提供了阳性对照。当然为了避免假阳性和假阴性,试验中必须设立多种对照:除了阳性对照外,还有阴性对照和内对照。

用Hoechst33258染料检测支原体是很多教科书上推荐的方法。由于支原体含有DNA,能与Hoechest33258染料结合,在500倍数放大情况下,表现为细胞颗粒或纤毛染色。但操作过程较为繁琐,且需要一定的经验辨别支原体,新手可能大不容易掌握。

支原体污染和清除:

如果很不幸,你的细胞已经感染了支原体,怎么办?大部分人的想法可能都是把感染的细胞扔掉,重新开始。一旦感染了支原体,细胞复原的机会很小。所以在液氮中多储存一些备份还是比较明智的选择。

如果你的细胞非常稀有且珍贵,那只能去奋力抢救了。拿什么拯救你,我的细胞?由于支原体没有细胞壁,且代谢慢,故大部分传统的抗生素都不奏效。但是上海金畔公司提供了一些Applichem的支原体清除试剂。Myco-3(A5240),Myco-1(A5222)Myco-2(A5233)。这三类支原体清除试剂是有多种支原体敏感的抗生素研制而成,无细胞毒性。100倍浓缩液直接加入培养基,使用方便。具体的使用方法如下:

Myco-3加入培养基中,每2-3天换液一次,连续处理14天,可有效清除绝大多数支原体污染。

顽固支原体需Myco-1和Myco-2联合使用:Myco-1处理4天后换Myco-2处理3天,如此重复2-3次。

支原体预防:

虽然说支原体可以铲除,但这种劳心劳力的事情估计没有人愿意做,那么平时的预防更重要。上海金畔公司还提供了几样好东西,能预防支原体的污染。具体介绍如下Incubator-Clean(A5230)

用于CO2培养箱的消毒,喷一喷,彻底预防支原体、细菌和病毒等的污染。

Incuwarter-Clean(A5219)

用于CO2培养箱内保持空气湿度的水源消毒,100*即用型浓缩液。

Aquabator-Clean(A5225)

用于水浴的消毒,有效防止各类污染。

需要特别提及的是,液氮罐中也可能有支原体。支原体能耐受液氮的低温,虽然不会增殖,但会污染你的细胞。因此,细胞冻存管还是不要放在液氮内,以免液氮渗进入细胞,而是储藏在液氮的气相中。

不过,预防支原体污染的最佳方法还是良好的细胞培养技巧和正确的态度。虽然这些都是老生常谈,但一旦熟悉了细胞培养,就很容易麻痹大意,时常敲敲警钟还是相当必要的。下面我将上海金畔公司提供的有关支原体预防,检测和清除的产品做一个总结:

支原体预防:

品牌

货号

品名

规格

报价

Applichem

A5230

Incubator-Clean™

500ml/1L

1036/1884

Applichem

A5219

Incuwater-Clean™

100ml

436

Applichem

A5225

Aquabator-Clean™

50ml

436

支原体检测:

品牌

货号

品名

规格

报价

Applichem

A3744

PCR Mycoplasma Test Kit

10T/20T

3124/5192

支原体清除:

品牌

货号

品名

规格

报价

Applichem

A5222

Myco-1

10ml/20ml/100ml

884/1537/6140

Applichem

A5233

Myco-2

10ml/20ml/100ml

695/1052/4145

Applichem

A5240

Myco-3

10ml/20ml/100ml

489/884/3560

除了支原体预防,检测和清除方面的试剂外,上海金畔公司还提供了Applichem细胞培养相关方面的其他试剂,包括各种细胞培养基,氨基酸,抗生素以及糖和盐类。同时也包含了常用的其他生化试剂,如有需要可随时拨打我们的电话:021-50837765.

肿瘤追击—Immundiagnostik肿瘤标志物检测试剂盒

随着经济发展,医疗水平的提高,人们对健康的关注度也越来越高。肿瘤标志物(Tumor marker)是在肿瘤细胞或机体对肿瘤的刺激应答反应中产生的,可以在血清、血浆、组织液或者组织中检测到的自然生长,能反映肿瘤发生、发展,监测肿瘤对治疗反应的一类物质。
肿瘤检测试剂盒是对肿瘤标志物进行检测以达到对肿瘤患者进行辅助诊断、疗效判断、病情监控或者是预后评估的一种有效工具和手段。

肿瘤追击—Immundiagnostik肿瘤标志物检测试剂盒
Immundiagnostik(简称IDK)公司成立于1986年,是一个全球性的诊断试剂与服务供应商,业务遍及70多个国家。近30年来,该公司通过和制药企业、医院、学术界的协作,不断致力于研发生产新型诊断试剂和免疫化学(抗原抗体)产品,并创新研发免疫测定及其它分析方法(如HPLC),在医疗、诊断和科研行业中得到广泛应用和认同。
上海金畔生物科技有限公司作为德国品牌Immundiagnostik中国一级代理商,提供包括心血管与肾脏疾病、骨骼及骨架疾病、肠胃病、抗衰老与氧化应激疾病等研究领域的相关检测试剂盒产品及服务,同时还提供一系列抗体抗原产品。
上海金畔生物科技有限公司将为您提供优质产品和高质量技术服务。如您对以上产品感兴趣欢迎拨打上海金畔生物科技有限公司全国客服热线00-050-4006,或者登陆官方网址www.jinpanbio.com查询产品详细信息。

IDK产品特点/优势|Immundiagnostik正牌代理

IDK产品特点/优势|Immundiagnostik正牌代理

(1)产品覆盖领域广

产品丰富,主要覆盖了心血管和肾脏疾病、骨骼系统、肠胃病学、生育、抗衰老/氧化应激、肿瘤等临床诊断领域。

(2)灵敏度高、特异性强

试剂盒可进行小样本定量分析,可检测nmol/mg或者pg/ml级别的样品;无交叉反应,准确性高。

(3)样品种类丰富 、检测快速灵活

检测样品多样,如:血清、血浆、尿液、组织提取物,以及细胞培养上清液。检测过程简单快速,时间短,效率高。

(4)全球独家产品和技术

IDK通过申请众多的国家和国际专利和品牌对创新专利的发展进行保护。在欧美、日本、加拿大和澳大利亚等地区,分别在鉴别诊断、钙和骨代谢、心血管疾病、自身免疫和肠胃病学等领域拥有35个专利。  这些专利包括对以下成分的测定:

Vitamin D维生素D

Bioactive parathormone生物活性甲状旁腺素

Relaxin松弛素

Urotensin II尾加压素II

Bone Sialoprotein (BSP) 骨唾液蛋白

Transglutaminase antigen谷氨酰胺转移酶抗原

Helicobacter pylori antigen幽门螺杆菌抗原

Apo E载脂蛋白E

上海金畔生物科技有限公司是Immundiagnostik  在中国的的代理商,拥有成熟的服务体系和现货库存。除Immundiagnostik 外,上海金畔生物科技有限公司还是Arotec中国一级代理商、KPL中国一级代理商、AppliChem中国一级代理商、Kerry中国一级代理商、Pfanstiehl中国一级代理商、Cygnus中国区代理、Source Bioscience中国一级代理商、Delphi Genetics中国一级代理商、Phytotech中国一级代理商、Agirsera中国区代理、Mirus中国区代理。

如您对以上产品感兴趣欢迎拨打上海金畔生物科技有限公司全国客服热线021-50837765,或者登陆官方网址www.jinpanbio.com.cn查询产品详细信息。

细胞活性/细胞毒性检测—CytoSelect™ Cell Viability and Cytotoxicity Assay

在细胞研究中,对细胞活性及细胞毒理的检测是一项基本的细胞学技术。通过对细胞活性的检测可以为细胞培养条件的优化提供参考,也能直接应用于细胞因子、生长因子及激素的活力分析。除此之外,越来越多的基于细胞研究的方案都使用细胞活性及毒理检测方法,如细胞抑制物及抗肿瘤分子的毒性试验、临床化合物的药物筛选以及细胞介导的细胞毒性分析等。

细胞毒性是由细胞或者化学物质引起的单纯的细胞杀伤事件,不依赖于凋亡或坏死的细胞死亡机理。有时需要进行特定物质细胞毒性的检测,比如药物筛选。细胞毒性检测主要是根据细胞膜通透性发生改变来进行的检测,主要包括MTT法、LDH酶法以及一些荧光染料标记法等。

Cell Biolabs的CytoSelect™ 细胞活性及细胞毒性检测试剂盒提供了两种检测方案,一种是常规的MTT比色法,细胞活性/细胞毒性检测—CytoSelect™ Cell Viability and Cytotoxicity Assay还有一种是Calcein AM/EthD-1双染荧光法。能进行24次分析。

其中MTT法被广泛应用于细胞活力及细胞毒性的检测。MTT可以被线粒体内的一些脱氢酶还原生成结晶状的深紫色产物甲臜(Formazan)。在特定溶剂存在的情况下,可以被完全溶解。然后通过酶标仪可以测定570nm波长附近的吸光度。细胞增殖越多越快,则吸光度越高;细胞毒性越大,则吸光度越低。Calcein AM则是一种可穿透细胞的活细胞指示剂,活细胞内酯酶能将非荧光Calcein AM的转化成绿色荧光Calcein。双嵌入剂乙锭均二聚物(Ethidium homodimer,EthD)是一种红色荧光染料,只能进入死细胞,结合上DNA后荧光强度增加40倍。

产品名称 货号 产品说明(点击查看说明书)
CytoSelect™ Cell Viability and Cytotoxicity Assay Kit CBA-240 包括MTT试剂及荧光试剂,96孔板的96次分析或24孔板24次分析

CytoSelect™ Cell Viability and Cytotoxicity Assay Kit 细胞毒理试剂盒内同时提供了MTT可见光比色法染料及Calcein AM/EthD-1荧光染料两种检测方案,还有细胞死亡诱导物,皂角苷(Saponin)作为对照。通常细胞增殖伴随着细胞活力的增加,细胞活力的降低则暗示毒性物质的存在或细胞培养环境的恶化。该细胞活性/细胞毒性检测试剂盒适用于多种哺乳动物细胞,包括贴壁细胞、悬浮细胞甚至组织等。

Cell BioLabs为您提供全套的细胞分析检测方案,针对于细胞活力及细胞毒理试验,提供了MTT及Calcein AM/EthD-1荧光检测方案。另外,Cell Biolabs还开发出其他多方位的基于细胞功能特征,特别是肿瘤细胞的特性的克隆形成、细胞的粘附分析、细胞伤口愈合实验、包括了细胞趋化及趋触以及游出的细胞迁移分析、细胞吞噬试验、细胞衰老及收缩检测,以及血管生成分析等多种分析试剂盒。如果您对上述细胞分析方案感兴趣,请致电021-50837765到上海金畔生物科技有限公司垂询细胞研究的相关实验解决方案,或索取最新的Cell BioLabs产品资料。

提供KPL—-IHC检测系统产品介绍

免疫组织化学是利用抗原抗体的特异性结合反应来检测和定位组织和细胞中的某些化学物质的一门技术,它是免疫学和传统组织化学相结合而形成的。实验所用主要为组织标本和细胞标本两大类,前者包括石蜡切片(病理大片和组织芯片)和冰冻切片,后者包括组织印片、细胞爬片和细胞涂片。

根据标记物的不同分为免疫荧光法,免疫酶标法,亲和组织化学法,后者是以一种物质对某种组织成分具有高度亲合力为基础的检测方法。
由于链霉亲和素不带糖基、等电点低,在检测中不存在与组织样本的非特异性结合,因而具有比亲和素低的背景,信噪比高于传统的亲和素。KPL提供的HistoMark Biotin-Streptavidin kits正通过生物素标记二抗与一抗特异结合、经链霉亲和素的信号放大作用,从而对细胞表面抗原,包括冷冻或石蜡包埋组织切片、细胞涂片、组织触片抗原提供快速、精确、高灵敏度、低背景检测。

适用一抗类型

货号

规格

所含组分

HRP

Mouse primary antibody

71-00-18

500 slides

生物素标记抗小鼠二抗、HRP标记链霉亲和素、山羊血清

Rabbit primary antibody

71-00-19

500 slides

生物素标记抗兔二抗、HRP标记链霉亲和素、山羊血清

Rat primary antibody

71-00-20

500 slides

生物素标记抗大鼠二抗、HRP标记链霉亲和素、山羊血清

Goat primary antibody

71-00-26

500 slides

生物素标记抗山羊二抗、HRP标记链霉亲和素、兔血清

AP

Mouse primary antibody

71-00-39

500 slides

生物素标记抗小鼠二抗、AP标记链霉亲和素、山羊血清

Rabbit primary antibody

71-00-40

500 slides

生物素标记抗兔二抗、AP标记链霉亲和素、山羊血清

Rat primary antibody

71-00-41

500 slides

生物素标记抗大鼠二抗、AP标记链霉亲和素、山羊血清

KPL也为免疫组化研究提供了一系列优化的底物,可用于HRP、AP及X-Gal等酶的检测,产品具有灵敏度高、使用方便等特点。与HistoMark Biotin Streptavidin Kits配合使用效果更佳。HistoMark系列尤其产品适用于双染、多染实验。

热销等级

产品名称

颜色

货号

组分

主要特色

AAAAA

HRP

TrueBlue

深蓝色

50-78-02

1

DAB灵敏度高50-100倍,无致癌危险

AAA

DAB Reagent Set

棕色

54-10-00

3

即用型溶液、滴瓶包装,方便、安全

AAAAA

StableDAB

棕色

54-11-00

2

工作液可在2~8保存2

AA

HistoMark BLACK

黑色

54-75-00

3

高灵敏度

AAA

HistoMark ORANGE

橙红

54-74-00

3

高灵敏度

AAA

HistoMark TrueBlue

蓝色

54-78-00

1

灵敏度是DAB100倍;无致癌性

AAA

AP

HistoMark Red

红色

55-69-00

3

含左旋咪唑,可抑制内源性的AP

AAA

HistoMark Blue

蓝色

55-70-00

3

含左旋咪唑,可抑制内源性的AP

AAA

X-Gal

β-Gal

浅绿色

54-13-00

2

不需要封闭内源的HRPAP

复染试剂:

试剂名称

货号

颜色

染色部位

推荐配套显色底物/系统

Contrast Blue

71-00-06

蓝色

nuclear

HistoMark Red or other red substrates

Contrast Green

71-00-11

绿色

nuclear

DAB, HistoMark BLACK or ORANGE

Contrast Red

71-00-05

粉红色

nuclear

HistoMark BLUE or other blue substrates

DAPI

1971-3-1

蓝色荧光

nuclear

TRITC and Cy3

Eosin

1971-2-1

红色

cytoplasmic

HistoMark BLUE or other blue substrates

Orcein

1971-1-1

粉红色

nuclear

HistoMark BLUE or other blue substrates

Propidium Iodide

1971-4-1

粉红色

nuclear

FITC and Cy2

KPL公司是美国很早实现亲和素纯化二抗商业化的生物公司,同时也是世界上很大的二抗和底物显色系统的生产商。其可以提供高质量的用于分子生物学、免疫学、细胞生物学和体外诊断试剂,其产品有:亲和纯化的抗体和偶联物、ELISA和杂交底物、蛋白检测和纯化试剂盒、核酸标记和检测试剂以及其它辅助试剂等。
KPL为我们的客户提供他们所需的优品质的产品.上海金畔生物科技有限公司将一如既往的为您提供优质的植物学相关产品和高品质的产品技术服务。我们能为您提供一站式的产品及实验解决方案。如果您对我们的产品感兴趣,请致电021-50837765到上海金畔生物科技有限公司垂询植物学相关的实验解决方案,或者问询您所感兴趣的产品类型