Human Single Fold scFv Libraries I + J (Tomlinson I + J)

Greg Winter’的实验室在MRC分子生物学实验室和MRC蛋白质工程中心(英国剑桥)构建了多种人造抗体文库,这些抗体文库可通过噬菌体展示和筛选技术诱导结合几乎所有的靶分子。目前这些噬菌体文库已经在很多分子生物学实验室成功使用,可在大量不同的蛋白,多肽,小分子复合物中诱导出特异性抗体反应物。

单链抗体(single—chain antibody fragment,scFv)由抗体重链可变区和轻链可变区通过15~20个氨基酸的短肽(linker)连接而成。 Fv分子,因抗体分子量较大,在体内的穿透力差,不易进入组织中发挥作用,而用基因工程手段构建更小的具有结合抗原能力的抗体片段(Fv分子或单链蛋白),可避免这一限制。

Human Single Fold scFv Libraries I + J (Tomlinson I + J)

此外,肽链连接物还可将药物、毒素或放射性核素与单链抗体蛋白相融合,可用于临床诊断(成像检查)和治疗。

Tomlinson I + J文库,该文库包含有一亿个不同的重组单链抗体基因片段(SCFV片段包含一个单个多肽区域包含有VH和VL区域,由可变的甘氨酸丝氨酸区域链接),克隆到噬菌粒载体并转化到TG1 E. coli 细胞。通过噬菌体展示技术获得大量的特异性重组抗体,可用于各种传统免疫学实验。 噬菌体展示技术将表型和基因型联系一起,将识别相应抗原和进行再扩增的能力结合起来,不经过人体免疫,通过几轮“吸附-洗脱-扩增”的体外筛选富集过程,即可得到人源的基因工程抗体。

Tomlinson I + J文库,源于单一的具有侧链多异性的VH (V3-23/DP-47 and JH4b)和Vκ(O12/O2/DPK9 and Jκ1)框架 ,侧链多样性具有和已知结构的抗原位点结合,在成熟的体系中具有很高的多样性。由这个框架(VH: 1-3, Vκ: 2-1-1)来编码的标准结构是目前人抗体技术体系中最普通的。它在能够形成抗原结合表面的前提下,重链的CDR3设计的尽可能短。该文库以噬菌粒/SCFV的形式,经过与蛋白A和蛋白L的结合进行筛选,在未知筛选的克隆序列的情况下进行筛选和并具有成熟的免疫亲和力。由于多样性好,库容量大,所以可筛选到较高的高亲和力抗体。

Tomlinson I

构建在plT2载体((HIS myc 标签),多样化的侧链主要是来自于原始体系中多样性的位点(一共18个残基,H50, H52, H52a, H53, H55, H56, H58, H95, H96, H97, H98, L50, L53, L91, L92, L93,

L94 and L96)此文库经过筛选后与突变的多样性体细胞共同作用使其成熟。

Library size (with insert): 1.47 x 108

Percentage insert: 96%

Tomlinson J

和上述Tomlinson I描述相似,增添了NNK 侧链。

Library size (with insert): 1.37 x 108

Percentage insert: 88%

英国Source Bioscience (Geneservice)与全球多个科研机构(如NIH、NKI、Sanger等)建立合作关系,拥有全球较大的cDNA、基因组、噬菌体展示、microRNA、siRNA、shRNA与MGC收藏库,涉及物种包括人、小鼠、大鼠、牛,以及各种模式动物如线虫、斑马鱼、果蝇、原鸡、爪蟾等,产品达1600多万种。(Tomlinson I + J)是Source Bioscience提供的较为成熟的一个文库,除此之外,还有优于此文库的DAb library,以及ATLAS scFV library。

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