支原体检测——AppliChem支原体污染PCR检测试剂盒

针对支原体检测,有多种方案可供选择,包括直接培养法、DNA荧光染色法等。前者是直接培养支原体于培养基中,观察其生长及菌落生成。该方法是目前最直接与灵敏的步骤,但是缺点也很明显,首先培养时间长,须3-5星期才能判断。而且有些支原体不能在培养基中培养出来,并且需要同时培养阳性支原体株作为对照,可能会造成污染。DNA荧光染色法则是利用荧光染剂检测支原体污染。荧光染剂会结合到DNA富含AT区域,因为支原体DNA中A-T含量较大,所以可将其染色而侦测。被支原体污染之细胞经染色后,在细胞核外与细胞周围可看到许多大小均一之荧光小点,即为支原体DNA,证明有支原体之污染。该法较直接培养法快,但也需要约一星期才能获得结果,而且检测时仍会有荧光背景,影响判读。

支原体检测——AppliChem支原体污染PCR检测试剂盒当然还有一些采用免疫学特异抗体的支原体检测方案,但在经济性上不是最优选择。其实就支原体污染的检测,最简单有效的方案不外乎是使用PCR方法检测。即以支原体16S-23S之间极为保守的rRNA序列设计引物,经由PCR反应扩增其16S rRNA片段。该法非常灵敏(e.g. 0.1-1.6 CFU/5 ul 样品) 。由于引物的特殊性,不会导致培养细胞或其他细菌的序列的假性扩增。方法便捷,只需不到一天时间,并且无需支原体或细胞的培养过程,避免了可能的污染。

AppliChem推出的PCR Mycoplasma Kit(货号:A3744)是一个即用型支原体检测试剂盒,无需支原体培养,只需要从培养细胞液中取上清,离心后获得可能含有支原体的沉淀,用50ul Kit内提供的缓冲液重悬后,95℃热支原体检测——AppliChem支原体污染PCR检测试剂盒击3分钟后即可作为PCR模板,加入Kit内提供的PCR反应液,并配成50ul PCR反应体系后即可按照Protocal提供的PCR设置进行PCR反应(如左图所示)。同时该支原体检测Kit内提供阳性对照,可完成20次检测。

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