小鼠生殖工程学技术——3小鼠附睾尾部的低温运输


小鼠生殖工程学技术——3小鼠附睾尾部的低温运输



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材料


1、成年的雄性小鼠
2、解剖用的剪刀(夏目制造所  小直剪刀Cat.No.B-12)
3、解剖用的钳子(夏目制造所 尖钳子Cat.No.A-5)
4、自动施夹钳(日本Becton, Dickinson and Company Cat.No.427630)
5、自动缝合器(日本Becton, Dickinson and CompanyCat.No.427631)
6、麻醉剂
7、加热盘
8、纽扣式温度记录仪(KM  Laboratories 温度记录仪 Thermochron  G type)
9、0.2ml  Ep管(注入冻存液)
10、CARD冷藏运输试剂盒
(1)棉花
(2)纸盒
(3)保温瓶
(4)制冷剂(小)
(5)制冷剂(大)
(6)泡沫箱
※ 纽扣式温度记录仪,0.2mL  EP管(装入冻存液)和CARD 冷藏运输试剂盒,预先放进4~8℃的冰柜里,使用时直接从冰柜里取出,并迅速进行实验。

方法

单侧附睾尾采集


术前,用酒精消毒全部解剖工具。
1、麻醉一只12周龄以上的雄性小鼠,使其仰卧。
2、用酒精棉消毒阴囊附近的位置(消毒后,如阴囊没有胀大,可能是因为睾丸缩入腹腔,只要用手指轻按下腹部,睾丸就会移回阴囊内)。
3、切开阴囊单侧,露出附睾尾。
 

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4、切断输精管与附睾体,取出附睾尾(即使不能完全去除尾部的血液与脂肪也不会影响运输)
 

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【采集的附睾尾和脂肪块】


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※附睾尾内部的细管(附睾管)构造盘旋曲折,注意仔细观察,不要与其他内脏混淆。

要点:取出附睾尾时,为了不伤尾部,可按压着脂肪一起取出。
                  睾丸移回体内时,为不伤睾丸,请按压着切开的肌层一起移回。


5、用自动缝合器,缝合切开的皮层(也可用缝合线)

※如要采集两个附睾尾时,也按照3~5步骤进行。
6、让小鼠仰卧在加热盘上,从麻醉到苏醒期间,保持小鼠的温度。

※取出单侧附睾尾的小鼠,在术后1周内可以与其他小鼠进行交配。



冷藏运输附睾尾


1、从冰柜里取出0.2mL EP管(装有冻存液),让附睾尾沉入冻存液里,用封口膜缠绕0.2mL EP管的盖子。

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2、在纸盒内放入0.2mL EP管和纽扣式温度记录仪,用棉花覆盖后盖上盖子。

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3、纸盒放进保温瓶内。


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4、在保温瓶内放进两个制冷剂(小)。
 

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5、盖上保温瓶盖。
 

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6、确认盖子盖紧后,在泡沫箱里铺上制冷剂(大),把保温瓶放进里面(这时,注意不要颠倒保温瓶内的0.2mL EP管)。接着,在保温瓶的两侧及上方,都放上制冷剂(大),盖上泡沫箱盖子后,用包装胶带牢牢捆扎。
 
7、用快递运输前,把整个泡沫箱放进冰柜内保存。


8、快递(冷藏)运输(最长可保存72个小时)