核酸清除剂

DNA Cleaner

◆原理

      

 本品不需要使用有机溶剂或离心管，35分钟内即可高效清除 50bp 以下 DNA 片断。另外，本品还可用于 dsRNA 的纯化。适合用于 PCR 后的引物、引物对、dNTP、DNA 聚合酶的清除和限制性内切酶处理后的酶消除。同时，利用乙醇沉淀法将 ABI 公司 BigDye Cycle Sequencing kit 扩增序列的DNA 样品纯化时，使用本品能得到清晰的序列结果。

◆特点

●  不需要使用分离管柱，也可纯化 PCR 扩增产物
●  高效浓缩 500~2,500 ng 的 DNA
●  最快35分钟即可完成PCR后的核酸纯化

◆案例・应用

去除底物	去除底物二聚体	去除dNTP	DNA 纯化	测序用     标记反应后纯化	酶去除	操作时间	处理容量
◎	◎	○	○100～10,000 bp	○	○	最短35分钟	与最初样品相同容量

操作摘要

与柱色谱法相比

	DNA Cleaner	Q公司柱色谱法
Step 1	添加与 DNA 溶液等量的 DNA Cleaner。	向 PCR 样品中添加5倍容量的结合液。此时，若混合物的颜色不为黄色，请添加3M醋酸钠。
Step 2	在室温下静置10分钟。	向离心管中添加 Step 1 的样品。
Step 3	在室温下离心分离10分钟。	在室温下离心分离1分钟。
Step 4	除去上清液。添加70%乙醇。	除去滤液。添加洗涤液。
Step 5	在室温下离心分离1分钟。	在室温下离心分离1分钟。
Step 6	上清除去。干燥5分钟。	除去滤液。
Step 7	TE Buffer、灭菌水溶解	在室温下离心分离10分钟。
Step 8	FINISH	添加 50 μL 析出液。静置1分钟。
Step 9	–	直接向分离管膜中添加析出液。
Step 10	–	在室温下离心分离10分钟。
Step 11	–	FINISH
所需时间	约35分钟	约10分钟
离心分离次数	2次	4次

1) 低分子 DNA（50 bp 以下）的除去

条带1.：DNA Step Ladder（25-500 bp）

条带2.：DNA Step Ladder（25-500 bp）（DNA Cleaner 处理）

条带3.：DNA Step Ladder（25-500 bp）（T 公司Kit）

条带4.：DNA Step Ladder（25-500 bp）（Q 公司Kit）

图1　利用 DNA Cleaner 去除 50 bp 以下的 DNA 片断

使用本品可去除 50 bp 及 25 bp 的 DNA 片断，可回收 75 bp 以上的 DNA 片断。与 Q 公司 Kit 一样，可高效去除 50 bp 以下的 DNA 片断。

2) 高分子 DNA（200 bp 以上）的回收

条带1.：DNA Ladder

条带2.：DNA Ladder （DNA Cleaner 处理）

条带3.：DNA Ladder （T 公司Kit）

条带4.：DNA Ladder （Q 公司Kit）

图2　利用 DNA Cleaner 纯化高分子量 DNA 片断

使用本品可高效回收 200bp 以上的 DNA 片断。

3) 少量 DNA 的回收率比较

［使用DNA］3kb 质粒

［DNA 量检测法］检测 OD260/OD280 吸光度，估算已回收 DNA 的量。

图3　 利用 DNA Cleaner 进行质粒 DNA 添加回收实验

使用本品进行100~2,500 ng 的 DNA 回收实验，其结果比 Q 公司 Kit 更高效去除 DNA，对 500 ng 以上的 DNA 回収率达90% 以上。

※操作成本（5 mL）

处理前，核酸溶液的容量关系，请参考：

10 μL　→　500 tests

50 μL　→　100 tests

100 μL　→　50 tests