Bst DNA Polymerase 链置换酶

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Bst DNA PolymeraseBst  DNA Polymerase                              链置换酶

链置换酶


◆产品说明


  本产品具有5’→ 3’DNA聚合酶活性与链置换活性,是一款自动从模板双链DNA的氢键解离,然后后合成新DNA链的酶。由于其特性,耐热性链置换DNA聚合酶无需DNA的双链解离,即可在恒定温度下合成DNA,且合成不受DNA二级结构的抑制。



特点


●  具有5’→ 3’DNA聚合酶活性与链置换活性

●  可在恒定温度下合成DNA

●  适用于合成GC含量高的DNA链

●  合成不受DNA二级结构抑制


应用


●  利用链置换活性的应用(等温基因扩增法等)



 Bst DNA Polymerase


 理想反应温度

 60°C~65°C

 失活时间*1

 80°C、5 min

*1 将酶原液直接热变性时的失活温度



 来源

 Geobacillus stearothermophilus

 活性

 8 units/μL

 单位定义

 1 unit指以小牛胸腺DNA为引物/模板,在65°C,30 min的条件下将10 nmol的dNTP掺入酸不溶性沉淀物的酶量。

 储存液成分

 10 mmol/L Tris-HCl(pH 7.5), 1 mmol/L DTT, 0.1% Tween 20, 0.1 mmol/L EDTA, 50% Glycerol

 酶反应条件

 随酶附带10×的酶反应专用缓冲液(0.5 mL×1)。如反应总体积为50 μL,添加5 μL的酶反应专用缓冲液



◆产品组成


Bst DNA Polymerase(1,600 units)


产品组分

容量

保存

Bst DNA Polymerase(8 units/μL)

200 μL × 1

-20°C

10 × Bst Reaction Buffer(80 mmol/L Mg2+)

500 μL × 1

-20°C



◆应用实例


实验案例1  LAMP法中的运用


LAMP法 反应条件


Bst  DNA Polymerase                              链置换酶

  3.0% Agarose 21

  TAE凝胶电泳

  EtBr染色

 

  M:Gene Ladder Wide 1

  1:A 公司Bst DNA Polymerase

  2:本公司Bst DNA Polymerase

 Candidatus Liberibacter asiaticus DNA

1 × 10copies

 FIP*

40 pmol

 BIP*

40 pmol

 F3 Primer*

5 pmol

 B3 Primer*

5 pmol

 Loop Primer F*

20 pmol

 Loop Primer B*

20 pmol

 dNTPs Mixture

1.4 mM each

 10 × Bst Reaction Buffer

2.5 μL

 Bst DNA Polymerase

8 units

 Total

25 μL

Bst  DNA Polymerase                              链置换酶

反应


 65°C

 60 min


*引物序列


FIP: 5'-GCATGCCGAGGATCAATGCCTTGCTTAAAGAGCGTGCTACG-3'

BIP: 5'-TATGCCTAATGGCACGGGGGTAAGCTTCATCCGCCTTCGA-3'

F3 Primer: 5'-TGGGTTAAGTGATGCTGTGG-3'

B3 Primer: 5'-CAACAATATCAGCCCCTGCT-3'

Loop Primer F: 5'-TCTCAACTGTTTCATCAAACCTAGC-3'

Loop Primer B: 5'- CGTGGCGGTTTTTGCTACA-3'



实验案例2  RCA法评估Bst DNA Polymerase的耐热性与理想反应温度


Bst  DNA Polymerase                              链置换酶


RCA法 反应溶液组成


 M13mp18 single strand DNA

40 ng

 Universal primer

50 mM

 dNTPs Mixture

1.4 mM each

 Tris-HCl (pH 8.8 at 25°C)

20 mM

 KCl

10 mM

 (NH4)2SO4

10 mM

 MgSO4

8 mM

 Tween 20

0.10%

 Betaine

0.8 M

 Bst DNA Polymerase

4 units

 Total

20 μL

Bst  DNA Polymerase                              链置换酶

反应条件


 各个温度下

 30 min


结果


Bst  DNA Polymerase                              链置换酶


条带


M: Gene Ladder Wide 1 (产品编号313-06961)

D: 模板 DNA (M13mp8 single strand, 产品编号319-00841)

 

引物序列(Universal Primer)


5'-GTTTTCCCAGTCACGACGTTGTA-3'

 

电泳条件


0.7% Agarose S / TAE凝胶电泳

EtBr染色

使用不含SDS的Loading Buffer

 

备注


  本实验为比较两种Bst DNA Polymerase,使用相同的反应液组成进行反应。在RCA法中使用各种酶配套的专用缓冲液时,须进行预实验探究反应体系。


 

◆相关信息


备注


●  本产品为实验研究用试剂。不可作为医药品使用。

●  检测Candidatus Liberibacter asiaticus的LAMP引物组合是国立研究开发法人 农业、食品产业技术综合研究机构 九州冲绳农业研究中心灵活运用先进技术,在农林水产研究高度化事业“抑制顽固性疾病柑橘绿化病传播的技术开发”中开发的产品。

 

License


●  LAMP(Loop-mediated Isothermal Amplification)法由荣研化学株式会社持有专利权。

 


◆产品列表


产品编号

产品名称

包装

311-07481

Bst DNA Polymerase

1600 units



◆相关产品


产品编号

产品名称

包装

319-07281

Csa DNA Polymerase

1600 units

319-07301

96-7 DNA Polymerase

1600 units

312-07271

dNTPs Mixture(25 mM each)

400 μL

产品编号 产品名称 产品规格 产品等级

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