DNA & siRNA 转染试剂 ScreenFect™ A plus

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ScreenFect A+DNA & siRNA 转染试剂                              ScreenFect™ A plus

DNA & siRNA 转染试剂!

◆原理

  ScreenFect ™A+是通过点击化学(Click Chemistry)方法筛选出的阳离子脂质体转染试剂。适用于各种真核细胞,也可直接添加到含有抗生素或者血清的培养基中。使用 ScreenFect ™A+转染试剂可将 DNA 和 siRNA 转入常见实验室培养的细胞株(HeLa、HepG2、MDCK 等)、干细胞(小鼠ES细胞等),血液细胞(巨噬细胞、THP-1、RAW264 等),小胶质细胞和原代细胞。由于低细胞毒性,不含有任何有毒有害成分,转染后无需更换培养基。


※1 Biomaterials. 2012 Nov; 33(32):8160-6. 2012

◆优点、特色


 DNA 用量少。

 高效一步转染法。

 转染效率高&细胞毒性低。

● 使用成本低

◆案例、应用


ScreenFect ™ A+ 转染性能(流式细胞仪检测)

DNA & siRNA 转染试剂                              ScreenFect™ A plus

用于不同细胞的高效脂质体转染试剂!!

DNA & siRNA 转染试剂                              ScreenFect™ A plus

用于不同细胞的高效脂质体转染法!!


DNA & siRNA 转染试剂                              ScreenFect™ A plus

适用于难转染的悬浮细胞!!

一步法和两步法实验流程的比较


产品名称

ScreenFect ™ A plus

A厂家新产品 (+试剂)

A厂家产品

推荐的实验流程

一步法

两步法

实验用时

2天

3天

所需DNA量

细胞数目调整

灵活
(细胞准备仅在转染之前)

不灵活
(取决于细胞预培养条件)

胰酶消化

需要
(仅在转染之前)

需要
(在细胞预培养之前)

适于高通量筛选

+++++

+

培养基的更换

取决于细胞系

DNA & siRNA 转染试剂                              ScreenFect™ A plus

一步法比两步法节省24小时!

DNA & siRNA 转染试剂                              ScreenFect™ A plus

ScreenA+.pdf

高性价比的高性能基因导入试剂

ScreenFect  通信

基因导入人 iPS 细胞实验数据


  介绍使用 ScreenFect ™A plus 将基因导入人iPS细胞的实验结果和操作步骤。本文记载了作为 iPS 细胞支架使用的 Matrigel 孔板包被方法、配制含有 Y-27632 的细胞悬浮液的操作步骤以及最优的试剂比例,供您参考。

 


◆导入人iPS细胞(201B7株)的转染操作实例


  在这里,我们将介绍一些使用 StemSure® hPSC 培养基Δ(产品编号:197-17571)的操作实例。该操作步骤的完整版和使用 mTeSR1 培养基的操作步骤,请查看 FUJIFILM Wako 公司的官网。http://db.screenfect.jp/ja/documents/list/protocol

 


<转染试剂的配制>

将 2.0 μL 的 ScreenFect ™ A plus reagent、4.0 μg 的质粒 DNA 加入到 160 μL 的 Opti-MEM 中制成 DNA-lipid complex。

 


< Matrigel 包被孔板>

1.  4°C下溶解 Matrigel hESC-Qualified Matrix 。为防止发生凝固,请避免在室温下溶解。

2.  用 25 mL 冷却的 D-MEM/Ham's F-12 稀释 300μL 的 Matrigel。

3.  稀释后的 Matrigel 溶液按照 1 mL/well 加入到 12 孔板中。

4.  在室温下孵育1小时以上。

 


<细胞悬液的配制>

1.  将 StemSure® hPSC 培养基Δ在 2-8℃ 下放置数小时或过夜缓慢融解。不要在 37° C下解冻,并在一周内使用。

2.  将 bFGF(产品编号:064-05381,068-05384)按照终浓度 35-100ng/mL 添加到融解后的 StemSure® hPSC 培养基△中,配制成完全培养基(以下称为 sshPSC 培养基)。

3.  使用前将 sshPSC 培养基恢复至室温。不要使用温水浴。

4.  将 Y-27632 按照终浓度 10 μmol/L 添加到 sshPSC 培养基中(以下称为 ROCKi+培养基)。

5.  去除 hiPS 细胞培养孔板中的培养基,用 PBS(-)清洗细胞一次。

*请在细胞汇片达到80%且处于对数增殖期时进行细胞转染。

6.  除去 PBS(-),添加 Stempro Accutase。

7.  在 37°C,5%CO培养箱中静置5分钟。

8.  用 1 mL 微量移液枪添加 ROCKi+培养基,将细胞从培养板上分离并吹散成单细胞。

9.  转移至 15 mL离心管中。

10. 室温下 1000 rpm(约170×g)离心3分钟。

11. 去除上清,用ROCKi+培养基重悬细胞。

12. 计算活细胞的数量。

13. 用 ROCKi+培养基将细胞浓度调整至 5×10cells/mL。

 


<转染>

添加 1 mL 配制好的 DNA-lipid complex 到细胞悬液中,使用移液器充分混匀,并接种在 12 孔板中。

※要点

接种 24 小时后请更换培养基。此时的培养基不需要含有 Y-27632。

 


◆实验数据


  通过反向转染(1-STEP)将 GFP 融合基因导入 hiPS 细胞(201B7株),并通过荧光显微镜比较基因的导入效率。

 


<StemSure® hPSC 培养基Δ的使用>

DNA & siRNA 转染试剂                              ScreenFect™ A plus

细胞数:5×105 cells/well

质粒 DNA 量:4 μg/assay

转染试剂混合比例:DNA 量(μg):ScreenFect ™ A plus reagent (μL)=1 : 0.5

容器:12 孔板

备注:用 Opti-MEM 稀释 ScreenFect ™ A plus reagent 和 DNA。

 


<mTeSR1 培养基的使用>

DNA & siRNA 转染试剂                              ScreenFect™ A plus

细胞数:5 x 10cells/well

质粒 DNA 量:1 μg/assay

转染试剂混合比例:DNA数量(μg):ScreenFect ™ A plus reagent (μL)=1 : 2

容器:12 孔板

备注:用 Opti-MEM 稀释 ScreenFect ™ A plus reagent 和 DNA。

 


◆使用上的注意


● 建议在单细胞状态下进行人iPS细胞的基因导入。

● 建议基因导入时的细胞数约为 5×10cells/well。

● 当质粒 DNA 量多时,导入基因的表达量高会引起细胞死亡。



◆产品列表


产品编号

产品名称

规格

包装

293-77101

ScreenFect ™ A plus

基因研究用

0.2 mL

299-77103

1 mL

297-77104

1 mL×5

[1]

Diefenbacher, Markus E., et al. "The LIM Domain Protein nTRIP6 Recruits the Mediator Complex to AP-1-Regulated Promoters." PLoS ONE 9.5 (2014): e97549.


[2]

Freise, Christian, and Uwe Querfeld. "Inhibition of vascular calcification by block of intermediate conductance calcium-activated potassium channels with TRAM-34." Pharmacological Research (2014).


[3]

Hagiwara, Akane, et al. "Luteinizing Hormone-Induced Expression of Ptger4b, a Prostaglandin E2 Receptor Indispensable for Ovulation of the Medaka Oryzias latipes, Is Regulated by a Genomic Mechanism Involving Nuclear Progestin Receptor."


[4]

Peng, Yanyan, Ruidan Xu, and Xiaofeng Zheng. "HSCARG Negatively Regulates the Cellular Antiviral RIG-I Like Receptor Signaling Pathway by Inhibiting TRAF3 Ubiquitination via Recruiting OTUB1." PLoS pathogens 10.4 (2014): e1004041. (3)


[5]

Wakimoto, Hiroaki, et al. "Targetable signaling pathway mutations are associated with malignant phenotype in IDH-mutant gliomas." Clinical Cancer Research (2014). (2)


[6]

Fischer, Simon, et al. "Breaking limitations of complex culture media: Functional non-viral miRNA delivery into pharmaceutical production cell lines." Journal of biotechnology 168.4 (2013): 589-600.


[7]

Bai, Dongmei, et al. "Regulation of the HDM2-p53 pathway by ribosomal protein L6 in response to ribosomal stress." Nucleic acids research 42.3 (2014): 1799-1811.


[8]

Liu, Xing, et al. "Isocitrate dehydrogenase 2 mutation is a frequent event in osteosarcoma detected by a multi‐specific monoclonal antibody MsMab‐1." Cancer medicine 2.6 (2013): 803-814.

产品编号 产品名称 产品规格 产品等级
293-77101 ScreenFect™ A plus 0.2 mL
299-77103 ScreenFect™ A plus 1 mL
297-77104 ScreenFect™ A plus 5 x 1 mL

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