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ISOGEN II RNA抽提试剂
ISOGEN II
从动物组织和培养细胞中高效分离纯化含有小 RNA 的总 RNA
◆原理
ISOGEN II 是从动物组织和培养细胞中总 RNA 和小 RNA 的抽提试剂。本品是含有苯酚和胍的均相液体,根据与细胞成分的相互作用,能单一地分离 RNA 。
使用旧产品(ISOGEN 和 ISOGEN-LS)需要添加氯仿,要进行液相分离,而本产品则无需此步骤。在样品中加入 ISOGEN II 溶解或是均质化之后,再添加水,因为 DNA、蛋白质、多糖类等会形成不溶性沉淀,进行离心分离后可以去除。用乙醇沉淀并洗涤、溶解得到上清之后,能分离出高纯度的 RNA 。
◆优点・特色
● 不需使用氯仿分离 RNA
● 比起旧产品( ISOGEN 等),小RNA 的抽提效率更高
● 可以把大 RNA(>200 bases)和小 RNA(<200 bases)分离(同时提供不分离的方案)
● DNA 污染少,抽提的 RNA 可以直接用于 RT-PCR 和 RT-qPCR 上
● 约 1 h 可完成 RNA 的抽提
内容和保存条件
产品名称 |
构成 |
|
ISOGEN II |
ISOGEN II |
100 mL |
使用手册 |
1本 |
冷藏保存
请在购买日起6个月内使用
本品可在室温下运输。产品到达后,在2~10℃条件下保存即可正常使用
产品安全数据图表(MSDS)
ISOGEN II MSDS
使用手册
ISOGEN II 手册
◆案例・应用
操作流程
◆使用例子
Data 1 抽提得到的 RNA 电泳
根据 ISOGEN 和 ISOGEN II 的方案抽提 RNA,进行电泳
M:RNA Ladder (Code No.311-06261) Lane1:ISOGEN 抽提总 RNA(2 μg) Lane2:ISOGEN II 抽提总 RNA(2 μg) Lane3:ISOGEN II 抽提高分子 RNA(2 μg) Lane4:ISOGEN II 抽提 小RNA(0.2 μg) 1.2% Agarose S(甲醛变性)EtBr 染色 |
Lane1:ISOGEN 抽提总 RNA(5 μg) Lane2:ISOGEN II 抽提总 RNA(5 μg) Lane3:ISOGEN II 抽提高分子 RNA(5 μg) Lane4:ISOGEN II 抽提小 RNA(0.5 μg) 12% 聚丙烯酰胺(Urea 变性)EtBr 染色 |
ISOGEN II 能抽提和 ISOGEN 同等的总 RNA
ISOGEN II 能对 200 base 以上的高分子 RNA 和 10~200 base 的小 RNA 进行分离
Data 2 ISOGEN 和 ISOGEN II 抽提的总 RNA 用“3D-Gene”Human miRNA Oligo chip(东来株式会社)分析。
ISOGEN II 比 ISOGEN 能更完整地抽提 miRNA
Data 3 RT-PCR
用 ISOGEN 和 ISOGEN II 从 HeLa 细胞中提取出 RNA 并定性,再用 PT-PCR 检测出 β-Actin 基因。同时进行没有经过 RT 反应的对照实验。
1:模板RNA量 500 ng
2:模板RNA量 100 ng
3:模板RNA量 20 mg
M:Gene Ladder 100
实验证明以ISOGEN II抽提的RNA与以ISOGEN抽提的RNA相比,DNA残留更少。
Data 4 RNA 提取量的参考值
分别用 “大 RNA 的提取”和“总 RNA 的提取”方案得到的 RNA 的提取量的参考值如下:
试剂 |
大 RNA 的提取 |
总 RNA 的提取 |
|
组织 |
肝脏 |
5~7 g RNA/mg tissue |
6~8 μg RNA/mg tissue |
肾脏、脾脏 |
3~4 g RNA/mg tissue |
3~4 μg RNA/mg tissue |
|
骨骼肌、脑、肺 |
0.5~1.5 g RNA/mg tissue |
0.5~1.5 μg RNA/mg tissue |
|
胎盘 |
1~3 g RNA/mg tissue |
1~3 μg RNA/mg tissue |
|
培养细胞 |
上皮细胞 |
5~8 g RNA/108 cells |
5~10 μg RNA/106 cells |
成纤维细胞 |
3~5 g RNA/108 cells |
4~6 μg RNA/106 cells |
◆注意事项
● 本品是实验研究用的试剂,不能作为医药品或其他目的使用。另外,如果您对试剂的基本的知识不了解。请不要使用。
● 因为 ISOGEN II 是医药用外有害物质(苯酚制剂),所以请小心操作。
● 使用时请穿着适当的防护设备(手套、眼镜等)。
● 请不要吸入蒸汽,进行充分的通风。
● 如果接触皮肤或眼睛,请用大量的水冲洗至少15分钟,并前往医院就诊。
● 本品的操作请按照手册记载的内容进行
● 对于和手册记载内容不同的操作带来的事故,日本基因不负任何责任。
◆相关产品
产品编号 |
产品名称 |
包装 |
备注 |
315-02504 |
ISOGEN |
10 mL |
RNA抽提用试剂 医药用外有害物质 |
317-02503 |
50 mL |
||
311-02501 |
100 mL |
||
– |
200 mL |
||
317-02623 |
ISOGEN-LS |
10 mL |
|
311-02621 |
100 mL |
产品编号 |
产品名称 |
包装 |
备注 |
298-68001 |
Target mRNA Cloning Kit Wako |
10次用 |
miRNA的目标mRNA克隆试剂盒 |
291-70201 |
microRNA Isolation Kit, Human/Mouse Ago1 |
10次用 |
Argonaute(Ago)根据免疫沉淀的microRNA特异纯化试剂盒 |
292-66701 |
microRNA Isolation Kit, Human Ago2 |
10次用 |
|
292-67301 |
microRNA Isolation Kit, Mouse Ago2 |
10次用 |
|
297-70301 |
microRNA Isolation Kit, Human Ago3 |
10次用 |
|
015-22411 |
Anti Ago1, Monoclonal Antibody (2A7) |
50 μL |
抗Argonaute(Ago)抗体 |
014-22023 |
Anti Mouse Ago2, Monoclonal Antibody |
50 μL |
|
018-22021 |
100 μL |
||
011-22033 |
Anti Human Ago2, Monoclonal Antibody |
50 μL |
|
015-22031 |
100 μL |
||
290-66501 |
microRNA Cloning Kit Wako |
8次用 |
含热稳定ligase高效小RNA克隆试剂盒 |
ISOGENII 使用说明书.pdf
参考文献
1. |
Chomczynski, P. Reagents and methods for isolation of purified RNA, US and International Patents Pending. |
2. |
Chomczynski, P. and Sacchi, N:Single step method of RNA isolation by acid guanidinium thiocyanate-phenol- chloroformextraction”, Anal. Biochem., 162, 156-159(1987) |
3. |
Chomczynski, P.:A reagent for the single-step simultaneous isolation of RNA, DNA and proteins from cell and tissue samples”, Biotechniques, 15, 532-537(1993) |
4. |
Wilfinger, W., Mackey, K. and Chomczynski, P.:Effect of pH and ionic strength on thespectrophotometric assessment of nucleic acid purity”, Biotechniques, 22, 474-481(1997) |
产品编号 | 产品名称 | 产品规格 | 产品等级 |
311-07361 | ISOGEN Ⅱ 总RNA及小RNA提取试剂 |
100 mL | 医药用外有害物质 |