Collagen, Type I, from Rat Tail 鼠尾胶原蛋白I
货号： JP0910-10ML 品牌： Jinpan 标签： 细胞生物学研究
描述
搜索关键词：
Extracellular Matrix (ECM) 细胞外基质；Gelatin 明胶；Collagen Type I 胶原蛋白I型；Poly-L-lysine 多聚L-赖氨酸；Fibronectin 纤连蛋白；Matrigel 基质胶；CAS：9007-34-5；
产品信息：
| 产品名称 |
产品编号 |
规格 |
价格（元） |
| Collagen, Type I, from Rat Tail 鼠尾胶原蛋白I |
JP0910-2ML |
2ml (10mg) |
450 |
| Collagen, Type I, from Rat Tail 鼠尾胶原蛋白I |
JP0910-10ML |
10ml (50mg) |
2000 |
基本介绍：
胶原蛋白是结缔组织和内脏器官细胞外基质的主要构造成分，但在皮肤、肌腱、骨骼中分布最为广泛。从遗传和结构上胶原蛋白分为许多类型。胶原蛋白I（Collagen, Type I）是由2个α1链和1个α2链组成的异源多聚体，在37℃，中性pH下自发形成三螺旋骨架，是一种优秀的细胞培养用基质，广泛用于肝细胞、成纤维细胞、脊神经节、肌肉细胞、施万细胞、胚肺细胞、上皮细胞和其他大量细胞系。还能用于研究细胞生长、分化、迁移以及发育过程中的组织形态发生。
金畔生物提供的鼠尾胶原蛋白I是根据Birkedal-Hansen方法，通过醋酸抽提、氯化钠沉淀、磷酸氢二钠沉淀等步骤制备。可用于包被细胞培养器皿，培养细胞表面粘附性，特别适合那些在普通培养器皿表面不易贴壁的细胞，比如成纤维细胞、肝细胞等原代细胞。还可用于三维胶的制备，模拟真实的生长环境，使得细胞在三维环境中生长。
本品为溶于6mM HAc的无菌溶液，浓度5mg/ml，每个批次产品皆通过细胞培养测试（包括三维空间培养）以保证质量的可靠性。
保存与运输方法：
保存：2-8℃保存，不可冻存，一年有效。
运输：冰袋运输。
注意事项
1）整个操作请于冰上进行，因室温鼠尾胶原I可迅速成胶，操作过程尽量保持低温。
2）整个操作请在无菌环境下无菌操作，避免污染以影响细胞生长。
3）为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。
使用方法
1. 细胞培养器皿的表面包被
组织培养器皿的表面包被推荐浓度为1-5µg/cm2，起始浓度可首选5µg/cm2。建议根据具体细胞类型来优化。
1.1 6mM HAc稀释液的制备
本品以溶于6mM HAc（=0.36g/L HAc）的无菌溶液形式提供，本身不溶于中性pH，建议用6mM HAc溶液做进一步稀释。
配制方法：取34.5µl冰醋酸（17.4 M）加入100ml双蒸水，充分混匀后即得到6mM HAc溶液，0.22µm滤膜过滤除菌后待用。
1.2 包被步骤
a，根据自身实验体系以及优化后的包被浓度来计算所需的胶原蛋白量，并加入相应孔内，确保胶原蛋白溶液完全覆盖表面。
1）以包被浓度为5µg/cm2，先用6mM HAc稀释液将胶原蛋白（5mg/ml）稀释到合适的中间浓度，如50µg/ml，然后参考表1不同培养皿内胶原蛋白加量表来加量到各孔内；
2）以包被浓度为2µg/cm2，先用6mM HAc稀释液将胶原蛋白（5mg/ml）稀释到合适的中间浓度，如12µg/ml，然后参考表1不同培养皿内胶原蛋白加量表来加量到各孔内；
表1 不同培养皿内胶原蛋白加量表
| 培养皿类型 |
每孔/皿表面积（cm2） |
当包被浓度：2µg/cm2，中间稀释浓度：12µg/ml，加入该稀释液的体积（µl） |
当包被浓度：5µg/cm2，中间稀释浓度：50µg/ml，加入该稀释液的体积（µl） |
| 96 well |
0.3 |
50 |
30 |
| 24 well |
1.9 |
300 |
190 |
| 12 well |
3.8 |
600 |
380 |
| 6 well |
9.5 |
1580 |
950 |
| 35mm |
8 |
1330 |
800 |
| 60mm |
21 |
3500 |
2100 |
| 100mm |
55 |
9170 |
5500 |
b，室温孵育1h，小心吸掉多余液体，用无菌PBS清洗3~4次后直接使用。或者加完胶原蛋白溶液后，在超净台内开盖过夜晾干。无菌条件下，包被好的器皿在4-25℃至少可保存3个月。
2. 三维胶原的制备
当鼠尾胶原蛋白I使用浓度>1mg/ml，pH 7.0左右皆可形成具有一定强度的三维胶，建议成胶浓度为1-2 mg/ml。
由于本品是以溶于6mM HAc的无菌溶液形式提供，在成胶过程需先加入0.06倍体积的0.1M NaOH中和。
2.1 需要溶液准备（无菌、预冷）
10×PBS（可含酚红）或10×细胞培养液
0.1M NaOH
双蒸水
2.2 三维胶原制备（不含细胞）（以配制1ml，1mg/ml三维胶为例）：
a，取200µl胶原蛋白（5mg/ml）加到置于冰浴的离心管内，加入690µl无菌水。之后加到12µl 0.1M NaOH【注意：该步骤不能反，如果反过来把12µl 0.1M NaOH加到胶原溶液中，会由于NaOH不能迅速混匀而产生局部的胶原凝结】，立即混匀。再加入100µl 10×PBS或10×细胞培养液，混匀后立即加到培养器皿中【注意：混匀后pH为7.0左右，如果PBS或培养液中没有加酚红，初次使用时需要用pH试纸测试】。
b，将培养器皿在室温（25℃左右）放置20min待胶凝固后，转移到培养箱内。【注意】：如果配制中使用的是10×PBS，需要在做细胞培养前，先加入适当体积的细胞培养液预平衡。
2.3 三维胶原制备（含细胞）（以配制1ml，1mg/ml三维胶为例）：
a，准备好细胞悬液，并放置于冰浴中。
b，将200µl胶原蛋白（5mg/ml）加到12µl 0.1M NaOH【注意：该步骤不能反，如果反过来把12µl 0.1M NaOH加到胶原溶液中，会由于NaOH不能迅速混匀而产生局部的胶原凝结】，立即混匀。再加入23µl 10×PBS或者10×细胞培养液，立即混匀【注意：混匀后pH为7.0左右，如果PBS或培养液中没有加酚红，初次使用时需要用pH试纸测试】。再加入760µl的细胞悬浮液，混匀后立即加到培养器皿中。
c，将培养器皿在室温（25℃左右）放置20min待胶凝固后，加入适当体积细胞培养液，转移到培养箱中培养。
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Poly-L-lysine (Mw 150,000-300,000) 多聚L-赖氨酸 |
25mg |
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1mg |
规格信息
| 品牌： |
Jinpan
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| CAS: |
9007-34-5
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| 规格： |
10ml(50mg)
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| 货期： |
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