血清蛋白的ELISA检测介绍

血清蛋白的ELISA检测介绍

血清蛋白执行许多重要功能。然而,其正常浓度的变化或血清中意外蛋白质的存在可能表明存在疾病。 ELISA 因其灵敏度、灵活性和提供定量结果的能力以及与自动化的兼容性而被广泛用于测量血清蛋白。我们提供多种血清蛋白抗体、抗原和即用型 ELISA 试剂盒,所有这些试剂盒均由我们内部开发和制造,并使用内部金标准对照进行验证。

什么是血清?

血液有四种主要成分——红细胞、白细胞、血小板和血浆——其中血浆是所有其他成分所在的液体。血浆中大约 90% 是水,其余 10% 包括离子、营养物质、溶解气体、废物和许多不同类型的蛋白质。当血浆去除凝血因子蛋白后,它被称为血清。

常见的血清蛋白有哪些?

白蛋白是丰富的血清蛋白,约占血液总蛋白的55%。它的作用是维持血管和组织之间的渗透压,并作为激素、钙、胆红素、抗凝剂(例如抗凝血酶和肝素辅因子)和各种药物等物质的载体。球蛋白是另一类主要的血清蛋白,分为 α1、α2、β 和 γ 亚组。 α 和 β 球蛋白既充当酶又充当载体蛋白,而 γ 球蛋白主要是免疫球蛋白(抗体),在免疫系统中发挥重要作用。许多其他蛋白质可以在血清中找到,它们可以作为疾病的生物标志物进行测量。

哪些血清蛋白用作生物标志物?

随着研究人员对疾病机制的了解越来越多,用作生物标志物的血清蛋白的数量持续增长。以下是一些著名的例子:

  • 白蛋白

  • 由于白蛋白是在肝脏中产生的,因此血清白蛋白通常用作肝脏疾病(例如肝硬化、脂肪肝、肝癌或甲型、乙型或丙型肝炎)的生物标志物。低血清白蛋白水平也可能表明患有肾脏疾病、甲状腺疾病、心血管疾病和炎症等疾病。

  • Alpha-1-抗胰蛋白酶

  • Alpha-1-抗胰凝乳蛋白酶是一种 α1 球蛋白,通过抑制丝氨酸蛋白酶(如中性粒细胞组织蛋白酶 G 和肥大细胞食糜酶)来保护下呼吸道。 α-1-抗胰凝乳蛋白酶缺乏症的个体被认为更有可能患慢性阻塞性肺病 (COPD),并且患帕金森病和阿尔茨海默病的风险也可能增加。

  • C3

  • Alpha-1-抗胰凝乳蛋白酶是一种 α1 球蛋白,通过抑制丝氨酸蛋白酶(如中性粒细胞组织蛋白酶 G 和肥大细胞食糜酶)来保护下呼吸道。 α-1-抗胰凝乳蛋白酶缺乏症的个体被认为更有可能患慢性阻塞性肺病 (COPD),并且患帕金森病和阿尔茨海默病的风险也可能增加。

  • 血红蛋白

  • 血红蛋白存在于红细胞中,它与氧气结合以运输到组织和器官。如果血清中存在血红蛋白,则可能提示溶血性贫血,这可能是由于镰状细胞性贫血等内在病症所致,也可能是由于感染、自身免疫性疾病或癌症所致。血清血红蛋白也可以表明输血的不良反应。

血清蛋白检测的主要挑战是什么?

由于血清含有许多不同的蛋白质,因此高度特异性的抗体对于准确检测感兴趣的靶标至关重要。夹心 ELISA 通常是血清蛋白检测的好选择,因为通过使用两种各自针对不同表位的抗分析物抗体,它比直接测定形式提供了更高的特异性。为了检测低浓度(通常在皮摩尔范围内)的血清蛋白,抗体还必须具有高灵敏度。血清蛋白检测的另一个挑战源于一些目标分析物的半衰期较短,这使得仔细的样品处理至关重要。

支持血清蛋白检测

我们提供广泛的血清蛋白检测产品,包括用于人白蛋白、α1-抗胰凝乳蛋白酶、C3 和血红蛋白的夹心 ELISA 试剂盒,这些试剂盒经常位列我们的畅销产品之列。通过选择与 ICL 合作,您可以确保获得一致的批次性能、可靠的长期供应和专家技术支持 – 这些属性已导致产品在多种期刊中被引用。

血清蛋白的ELISA检测介绍

血清与血浆的区别及制备

血清与血浆的区别及制备

并非所有科学家都知道血清和血浆之间的区别。那么让我们解释一下。除了红细胞、白细胞和营养物质外,血液还含有纤维蛋白原和凝血因子,当血液暴露在空气中时会导致凝血。这种凝血对于防止受伤后过度出血很重要。使用抗凝剂可以停止这些凝血成分的作用,从而防止形成任何凝块。

血浆和血清是不同的血液制剂,根据采集时的血样中是否添加抗凝剂而产生。添加抗凝剂以防止凝块形成很重要,例如,如果血液用于输血,以及制备用于细胞培养的血清。


血清和血浆是如何制备的?

等离子体

从全血开始,如果在采集后立即添加抗凝剂,则可以防止凝固,并且所有成分都保持悬浮状态。如果您不混合该血液样本,那么所有成分都会沉淀下来。较重的细胞会沉到底部。这会导致顶部出现透明液体。这个透明的上层是血浆,基本上是血液的所有成分减去细胞。在离心作用下,血浆和红细胞之间形成一层称为血沉棕黄层的白细胞。血浆保留纤维蛋白原。

血清

如果我们不添加任何抗凝剂,则凝血因子会促进凝块形成。这些含有纤维蛋白原作为凝血剂的凝块可以有效地从血浆中以固体形式去除红细胞。血清在血液中所占的比例比血浆更大,并且在研究中应用广泛。这至少部分是因为它可以更有效地去除不需要的红细胞,从而产生更多的每单位血液体积。

从血清和血浆中纯化外泌体。

只需通过Exo-spin™ 柱即可从血清和血浆中纯化外泌体。或者,可以在应用柱之前使用沉淀缓冲液处理血清/血浆样品。将样品与该缓冲液混合,然后离心,去除血浆和血清的许多成分,并允许在单个 Exo-spin™ 柱上纯化更多数量的外泌体。更多详细信息可以在我们的 Exo-spin™ 指南(查看各个产品)和外泌体资源页面中找到。

人干扰素α ELISA 血浆基质研究

人干扰素α ELISA 血浆基质研究

通过酶联免疫吸附测定 (ELISA) 准确检测血清或血浆样品中的干扰素 (IFN) 会受到血清或血浆中成分(如异嗜性抗体和凝血因子)的干扰。来自这些不同成分的干扰被称为基质效应。在这种情况下,为了评估 ELISA 试剂盒的性能,将已知浓度的 IFN 添加到无 IFN 的血浆中,并确定 ELISA 检测到的浓度与实际量之间的百分比差异。这被称为尖峰恢复。在这项研究中,我们描述了使用在不同抗凝剂中纯混合血浆中制备的参考标准曲线的相容性研究。本技术说明中还报告了我们使用不同批次的人血浆对人 IFN α 加标回收的结果。

介绍

ELISA 测定基于靶分子(分析物/抗原)与特异性识别靶标的抗体的结合。使用二抗酶联抗体检测抗原-抗体复合物的存在。通过添加产生可量化信号的底物获得检测。通过使用不同的样品稀释剂对已知浓度的分析物进行系列稀释来制备标准曲线。然后使用曲线的非线性 4 参数拟合来计算相似稀释剂中未知样品的浓度。待测分析物可存在于不同的稀释剂中,例如含血清的组织培养基、纯血清、纯血浆和盐缓冲液。在待测分析物存在于血清或血浆中的情况下,由于血清蛋白、异嗜性抗体和/或凝血因子的存在,可能会干扰测定。这可能会导致检测到误报、漏报或高背景。在这项研究中,我们展示了通过使用 PBL 的 VeriKine Human Alpha 多亚型血清 ELISA 试剂盒 41110平均大于 70% 的低浓度人干扰素 (IFN) α 实际浓度,可在人血浆中检测到。我们还表明,未发现低浓度 IFN 的假阳性和假阴性,并且不存在空白的高信号。此外,我们证明标准曲线 (500-12.5 pg/ml) 在样品稀释剂中预稀释至 50% 的混合血浆中制备,或在样品制备后稀释的纯混合血浆中制备 2 X 标准曲线 (1000-25 pg/ml)稀释至 500-12.5 pg/ml 没有显着差异。

 

方法与分析

标准曲线是从 1000 pg/ml-25 pg/ml 的样品稀释液、3 批不同抗凝剂(柠檬酸钠、EDTA 钠和肝素钠)中的正常人血浆和三批混合液中制备的。此外,在两个不同批次的正常人血浆中制备了低 (30 pg/ml)、中 (300 pg/ml) 和高 (800 pg/ml) 加标物。这两个地段不是来自游泳池中使用的地段。在此之后,将 50 μl 标准品添加到产品41110-1中提供的板上的 50 μl 样品稀释液中  人干扰素α血清样品多亚型 ELISA 试剂盒。ELISA 的其余步骤按照试剂盒方案进行。在单独的测定中,比较了 1000-25 pg/ml 混合人血浆的标准曲线和 500-12.5 pg/ml 50% 混合人血浆稀释于样品稀释剂中的标准曲线。在此测定中,将混合人血浆中的 50 μl 标准品 (1000-25 pg/ml) 添加到板上的 50 μl 样品稀释剂中,如果是 50% 混合血浆中的标准品 (500-12.5 pg/ml)将 100 μl 直接加载到板上。每次测定完成后,在Vmax上以 450 nm 读取板 酶标仪(Molecular Devices Corporation,CA)。针对每条曲线绘制 Y 轴上的平均 OD @ 450nm 与 X 轴上以 pg/ml 为单位的实际浓度。使用非线性 4 参数拟合生成曲线(图 1-5)。

 

基于数据点的曲线拟合方程和平均 OD 值,确定每个数据点的外推浓度(反拟合浓度)。使用 SoftMax Pro 版本 5 (Molecular Devices Corporation, CA) 分析所有数据。

 

图 1-3: 样品稀释液中 1000-25 pg/ml 的标准曲线,3 个不同批次的纯血浆和使用 3 个不同批次和不同抗凝剂的纯混合血浆

 

人干扰素α ELISA 血浆基质研究

 

人干扰素α ELISA 血浆基质研究人干扰素α ELISA 血浆基质研究

 

图 4-5: 在样品稀释液中制备的 500-12.5 pg/ml 和 50% 混合血浆的标准曲线与在样品稀释剂中稀释至 500-12.5 pg/ml 的纯混合血浆中的 1000-25 pg/ml 的标准曲线相比较

 

人干扰素α ELISA 血浆基质研究

 

人干扰素α ELISA 血浆基质研究

 

 

表 1:不同抗凝剂中人血浆中人 IFN α A2a 的加标回收率百分比

% 加标回收率
> 矩阵 30皮克/毫升 300皮克/毫升 800皮克/毫升
含柠檬酸钠的 Lot D 61.2% 102.2% 91.5%
含柠檬酸钠的 Lot E 79.1% 122.5% 127.5%
含有 Na-EDTA 的批次 D 60.6% 84.7% 76.81%
含 Na-EDTA 的 Lot E 58.6% 86.96% 91.23%
Lot D 与肝素钠 91.88% 107.68% 94.88%
Lot E 与肝素钠 98.76% 105.32% 106.53%
平均的 75% 101.56% 98.1%

 

从图 1-3 可以看出,Na-EDTA 人血浆中的信号低于 Na-Citrate 和 Na-Heparin 人血浆中的信号。这种效应在混合血浆中也很明显。肝素钠血浆中的信号在三种抗凝剂中比较强与样品稀释液中的信号相比,由于血浆中的成分,人血浆中的信号也很明显受到抑制。从图 4-5 中可以看出,根据平板上相应最终浓度的 IFN Alpha 的 OD,在未稀释的混合血浆中制备了 1000-25 pg/ml 的标准曲线,其中添加了 50 μl 曲线无论使用何种抗凝血剂,50 μl 样品稀释液在平板上类似于在 50% 混合血浆中制备的 500-12.5 pg/ml 的标准曲线。然而,由于来自不同供体的血浆中成分的数量和差异不同,两条曲线之间的相似程度可能因血浆批次而异。从表 1 中可以看出,低浓度加标 IFN Alpha A 2a (30 pg/ml) 的加标回收率在含 EDTA 钠的血浆中较小,在含肝素钠的血浆中最高。总体而言,平均加标回收率在可接受的行业标准范围内。

 

结论

为了准确测定血浆中人干扰素α的浓度,未知血浆样品必须在样品稀释液中按 1:2 稀释。1:2 稀释之前的所有预稀释都应在含有相同抗凝剂的正常人血浆中进行。样品的未知浓度必须从标准曲线 (1000-25 pg/ml) 中推断出来,该标准曲线是在具有不可检测量的内源性 IFN α 的正常人血浆中制备的,或者是一组不含内源性 IFN α 的血浆批次,并且 50 μl 曲线必须添加到板上的 50 μl 样品稀释液中。使用产品 41110 从人血浆中回收的加标回收率确实因血浆批次而异。为获得最准确的结果,加标回收率应根据在含有相同抗凝剂的混合血浆中绘制的标准曲线推断得出。产品性能 41110 在以 Na-Heparin 作为抗凝剂的血浆样品中最好,在以 Na-EDTA 作为抗凝剂的血浆中最差。

Applichem 葡聚糖Dextran 系列产品现货供应

产品参数:

中文名称:葡聚糖;右旋糖酐

英文名称: Dextran

CAS号: 9004-54-0

分子式: [C6H10O5]n

产品描述:

葡聚糖(dextran)又称右旋糖酐,是由葡萄糖通过不同方式形成的聚糖的总称。为一种多糖,存在于某些微生物在生长过程中分泌的粘液中。葡聚糖具有较高的分子量,主要由D-葡萄吡喃糖以α,1→6键连接,支链点有1→2、1→3、1→4连接的。随着微生物种类和生长条件的不同,其结构也有差别。它具有高的比旋光度【α】厍+199°(水);部分水解主要得到异麦芽糖。葡聚糖在输血过程中可代替一部分全血,作为血浆体积的扩充剂(称为代血浆)。商品血浆代用品是部分水解后的葡聚糖,溶于生理盐水。葡聚糖是由数个葡萄糖分子聚合而成的同多糖。葡聚糖不是单糖而是低聚糖。

产品规格

品牌

货号

品名

规格

货期

产地

AppliChem

A1847

Dextran 70(葡聚糖70.000,分子量7万)

25g

现货

德国

AppliChem

A1847

Dextran 70(葡聚糖70.000,分子量7万)

100g

现货

德国

AppliChem

A1847

Dextran 70(葡聚糖70.000,分子量7万)

500g

现货

德国

系列产品

AppliChem

A2249

Dextran 40(葡聚糖40.000,分子量7万)

25g

现货

德国

AppliChem

A2249

Dextran 40(葡聚糖40.000,分子量7万)

100g

现货

德国

AppliChem

A2249

Dextran 40(葡聚糖40.000,分子量7万)

500g

现货

德国

产品应用

1,葡聚糖制成的凝胶常用来进行生化分离,如柱层析。

2,葡聚糖能够活化巨噬细胞、嗜中性白血球等,因此能提高白细胞素、细胞分裂素和特殊抗体的含量,全面刺激机体的免疫系统。那么,机体就有更多的准备去抵抗微生物引起的疾病。因此在肿瘤、感染病和治疗创伤方面深受瞩目。

3,葡聚糖能清除游离基、抗辐射、溶解胆固醇,预防高脂血症。抵抗滤过性病毒、真菌、细菌等引起的感染。广泛用于医药、食品、化妆品等行业。

上海金畔科技作为欧洲权威生化试剂生产商AppliChem的中国区一级代理商,可以为广大科研与企业客户提供优质的葡聚糖(Dextran)系列产品,全部产品均为进口原装,质优价廉且常备现货。AppliChem除提供葡聚糖(Dextran)系列产品之外,还可提供Dextran Sulfate 40 Sodium Salt BioChemica;Dextran Sulfate 500 Sodium Salt BioChemica等相关产品。AppliChem 是欧洲权威生化试剂生产商,质优价廉,产品有上万种之多,覆盖了免疫学、细胞学、分子生物学、蛋白组学、植物学、制药与诊断试剂研发生产等领域,已经成为多家世界著名品牌试剂的供应商。 官网链接: www.applichem.com。

如果对上述产品感兴趣请致电021-50837765,021-63599871/63599872到上海金畔生物科技有限公司垂询或索取更多产品资料。热线021-50837765。

动物血浆系列 (去红细胞、无菌过滤)H0101


动物血浆系列 (去红细胞、无菌过滤)

  • 产品型号:H0101
  • 简要描述:动物血浆系列 (去红细胞、无菌过滤)金畔生物公司供应:荧光定量PCR耗材,移液器吸嘴,微量离心管,进口冻存管,细胞培养皿,培养板,培养瓶,吸头,仪器及手套,色谱耗材,针头过滤器。
产品咨询在线客服
  • 产品简介

动物血浆系列 (去红细胞、无菌过滤)上海金畔生物科技有限公司供应:血清,光度计,检测仪,移液器吸嘴,离心管,冻存管,培养皿,全系荧光定量PCR耗材。

规格包装:100ml/500ml/500ml*20

动物血浆系列

H0101 胎牛血浆(去红细胞、无菌过滤) 100ml/500ml/500ml*20
H0201 兔血浆(去红细胞、无菌过滤) 100ml/500ml/500ml*20
H0301 新生牛血浆(去红细胞、无菌过滤) 100ml/500ml/500ml*20
H0401 小牛血浆(去红细胞、无菌过滤) 100ml/200ml/500ml/500ml*20
H0501 大牛血浆(去红细胞、无菌过滤) 100ml/200ml/500ml/500ml*20
H0601 马血浆(去红细胞、无菌过滤) 100ml/200ml/500ml/500ml*20
H0701 山羊血浆(去红细胞、无菌过滤) 100ml/200ml/500ml/500ml*20
H0801 绵羊血浆(去红细胞、无菌过滤) 100ml/200ml/500ml/500ml*20
H0901 鸡血浆(去红细胞、无菌过滤) 100ml/200ml/500ml/500ml*20
H1001 猪血浆(去红细胞、无菌过滤) 100ml/200ml/500ml/500ml*20
H1201 驴血浆(去红细胞、无菌过滤) 100ml/200ml/500ml/500ml*20
H1301 大鼠血浆(去红细胞、无菌过滤) 100ml/200ml/500ml
H1401 小鼠血浆(去红细胞、无菌过滤) 100ml/200ml/500ml
H1501 豚鼠血浆(去红细胞、无菌过滤) 100ml/200ml/500ml

血清的主要成分

血清是由血浆去除纤维蛋白而形成的一种很复杂的混合物,其组成成份虽大部分已知,但还有一部分尚不清楚,且血清组成及含量常随供血动物的性别、年龄、生理条件和营养条件不同而异。血清中含有各种血浆蛋白、多肽、脂肪、碳水化合物、生长因子、激素、无机物等,这些物质对促进细胞生长或抑制生长活性是达到生理平衡的。

动物血浆系列 (去红细胞、无菌过滤)适应客户:医院检验科PCR实验室,中心实验室,肝病中心;第三方检测机构,科研院所,大专院校,制药厂,试剂生产厂家,疾控中心,检验检疫。

 

温馨提示:不可用于临床治疗。