StabyCloning PCR克隆载体系统

Delphi Genetics提供的创新型产品和服务都使用了基于细菌制毒-解毒基因这一独特的Staby™技术,极大的提高了DNA克隆的稳定性和高效率,促进不含抗生素的重组蛋白的成功生产。其相应的产品是由一系列新颖独特的细菌菌株以及相应的克隆和表达载体体现出来,并以Kit的形式提供给客户使用。其产品领域可分为用于PCR克隆的StabyCloning™,用于原核表达的StabyExpress™、Staby™Codon、Cherry™ Express等表达系统,以及相应的感受态细胞核培养基等产品。

其中StabyCloning™ PCR克隆载体系统 (StabyCloning™ Kit)中包含的CYS21菌系染色体中自带有编码ccdB毒性蛋白的基因。而相应的克隆载体pSTC1.3则携带有缩短的编码ccdA失活的解毒基因,此载体在缩短的ccdA基因末端线性化后产生平端。当在所要克隆的目的DNA片段的的5’端加入14个碱基对的序列(编码解毒基因的后四个密码子以及终止密码子的碱基序列)时,这样将这段序列和缩短了的ccdA基因融合即重建了一个有活性的ccdA解毒基因,翻译成的蛋白CcdA可以“中和”菌株中自带的CcdB毒性。这个14-bp的序列可以通过一修饰的PCR引物加入要克隆的目的基因片断中。重组后的质粒包含有目的基因片段,但目的基因的走向不同也能导致不同的结果,只有正确走向的重组质粒才能够重建一个有活性的、完整的ccdA基因。

StabyCloning PCR克隆载体系统

使用StabyCloning™ PCR克隆载体系统,所有的克隆流程在1h内即可完成,所有的克隆是独立的,并且所有的生长着的菌体都包含了携带有正确插入目的片段的克隆载体。活性ccdA基因的重建允许重组子的选择,同时也保证了菌体中质粒的稳定。一旦一些菌体丢失了载体,即在毒性基因的作用下趋向死亡。当片段插入并克隆后,通过载体上面的限制性位点就很容易得到稳定的解毒基因和目的基因的组合。通过CYS21菌系与解毒基因相互之间的特性即可将目的片段有效地插入到克隆载体中。

该系统内包含的组分有:线性化的pSTC1.3质粒DNA;感受态CYS21细菌(电转染或钙转染);连接酶;重组培养基;测序引物;阳性对照以及操作说明书。额外的感受态细菌也可以单独购买:

产品名称 货号 产品说明(点击查看说明书)
StabyCloning kit (electrocompetent) GE-STC1-10 StabyCloning PCR克隆载体系统
StabyCloning kit (chemically-competent) GE-STC1-12
StabyCloning kit (electrocompetent 20 RXN) GE-STC1-20
StabyCloning kit (chemically-competent 20 RXN) GE-STC1-22
20 x 50ul CYS21 (electro-competent) GE-STCB-20
20 x 100ul CYS21 (chemically-competent) GE-STCB-22

StabyCloning PCR克隆载体系统的特色:

  1. 快速性:连接+转化+平板上生长仅需1h;
  2. 精确性:保证了外源基因以正确的方向插入载体内,使背景降低到1%;
  3. 灵活性:稳定的解毒基因和插入目的片段的产物也容易被插入到其他的载体中;
  4. 重组子即是一个个独立的克隆(直接平板培养);
  5. 即使在扩配的情况下也没有微卫星克隆;
  6. 以PCR产物为模板当使用AmpR质粒时无背景存在;
  7. 即使在不使用抗生素的情况下重组质粒也很稳定;
  8. 此系统适用于任何培养基

因此使用Delphi Genetics的StabyCloning™ Kit克隆系统,整个基因克隆的流程控制在1h以内,基本无背景(转化后的细菌中都是包含插入片段的,而不含插入片段的细菌会趋向死亡)。PCR产物保持定向插入,质粒保持稳定,并且插入到其它载体中的产物也容易被筛选,而且在后继试验中无需抗生素筛选。

上海金畔生物科技有限公司公司作为Delphi包括澳门、香港在内的中国地区独家一级代理商。将其优秀的表达系统推荐给国内的科研以及生物制药生产用户。如果您对Delphi Genetics的Staby® 技术以及其独特的StabyCloning™、StabyExpress™、Staby™Codon、Cherry™ Express等系统感兴趣,请致电021-50837765到上海金畔生物科技有限公司垂询这一新颖的Staby® 基因克隆及蛋白表达实验解决方案,或索取最新的Delphi Genetics产品资料。

抗Iba1,山羊多克隆抗体 小胶质细胞标记

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抗Iba1,山羊多克隆抗体抗Iba1,山羊多克隆抗体                              小胶质细胞标记

小胶质细胞标记

Iba1是一种约17 kDa的蛋白,在神经系统小胶质细胞中特异性表达,经常被用作小胶质细胞标记物。 本产品是识别Iba1的山羊多克隆抗体。



◆应用实例 1:免疫组织染色(荧光染色)

■ Iba1

■ 

■ Merge

抗Iba1,山羊多克隆抗体                              小胶质细胞标记

抗Iba1,山羊多克隆抗体                              小胶质细胞标记

抗Iba1,山羊多克隆抗体                              小胶质细胞标记

数据提供:国立长寿医疗研究中心榊原老师

样品:阿尔茨海默病模型小鼠(APPNL-G-F 小鼠)大脑新皮层冰冻切片

一抗:抗Iba1,山羊多克隆抗体(1:1,000)

二抗:Alexa Fluor488标记抗山羊IgG

Aβ染色:0.001 % FSB溶液(淀粉样蛋白染色荧光探针)

抗Iba1,山羊多克隆抗体                              小胶质细胞标记


数据提供:创价大学理工学部中嶋老师

样本:大鼠(左)以及小鼠(右)大脑皮质冰冻切片

一抗:抗Iba1,山羊多克隆抗体(1:250)

二抗:Alexa Fluor488标记抗山羊IgG

◆应用实例 2:免疫组织染色(DAB染色)

和光产品:011-27991

其他公司产品A

抗Iba1,山羊多克隆抗体                              小胶质细胞标记

抗Iba1,山羊多克隆抗体                              小胶质细胞标记

抗Iba1,山羊多克隆抗体                              小胶质细胞标记

抗Iba1,山羊多克隆抗体                              小胶质细胞标记


样品:小鼠脑额叶石蜡切片

一抗:抗Iba1,山羊(1:1,000)

二抗:抗山羊IgG,生物素标记

抗原激活:10 mM柠檬酸盐缓冲液(pH 6),90°C,处理10 min


◆应用实例3:蛋白印迹


抗Iba1,山羊多克隆抗体                              小胶质细胞标记


数据提供:创价大学理工学部中嶋老师

样品:大鼠原代培养小胶质细胞  10 μg

样品:大鼠原代培养神经元 10 μg

样品:大鼠原代培养星形胶质细胞  10 μg

样品:大鼠大脑皮层  100 μg

一抗:抗Iba1,山羊(1:1,000)

二抗:抗山羊IgG,HRP标记


◆免疫荧光(IF)实验效果

011-27991 Anti Iba1, Goat

(本产品)

A公司

山羊源Anti Iba1抗体

Rat brain

抗Iba1,山羊多克隆抗体                              小胶质细胞标记

抗Iba1,山羊多克隆抗体                              小胶质细胞标记

Mouse brain

抗Iba1,山羊多克隆抗体                              小胶质细胞标记 抗Iba1,山羊多克隆抗体                              小胶质细胞标记

◆抗体信息


抗原

合成肽(Iba1 C端序列相同)

储存缓冲液

TBS

亚型

山羊IgG

物种交叉性

大鼠、小鼠

抗体浓度

0.5-0.6 mg/mL

应用

免疫组化(冰冻切片)1:250-1,000
免疫组化(石蜡切片)1:250-1,000
免疫印迹 1:1,000

◆产品信息


产品编号

产品名称

规格

包装

011-27991

Anti Iba1, Goat

抗Iba1,山羊源多克隆抗体

免疫化学用

100 μL

◆相关产品


产品编号

产品名称

规格

包装

019-19741

Anti Iba1, Rabbit (for Immunocytochemistry)
小胶质细胞/巨噬细胞特异性蛋白抗体(免疫组化)

免疫化学用

50 μg

013-27691

Anti Iba1, Rabbit(for Paraffin Section)
小胶质细胞/巨噬细胞特异性蛋白兔源抗体(石蜡切片)

免疫化学用

50 μg

016-26461

Anti Iba1, Rabbit, Biotin-conjugated
小胶质细胞/巨噬细胞特异性蛋白抗体(结合生物素)

免疫化学用

100 μL

013-26471

Anti Iba1, Rabbit, Red Fluorochrome(635)-conjugated
小胶质细胞/巨噬细胞特异性蛋白抗体(结合红色荧光素635)

免疫化学用

100 μL

016-20001

Anti Iba1,Rabbit (for Western Blotting)
小胶质细胞/巨噬细胞特异性蛋白抗体(免疫印迹)

免疫化学用

50 μg

012-26723

Anti Iba1, Monoclonal Antibody(NCNP24)
抗Iba1,单克隆抗体(NCNP24)(鼠源)

免疫化学用

10 μL

017-27591

Anti Human Iba1, Monoclonal Antibody(NCNP27)
抗人 Iba1,单抗(NCNP27)

免疫化学用

10 μL

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产品编号 产品名称 产品规格 产品等级

线虫文库

英国Source Bioscience (Geneservice)与全球多个科研机构(如NIH、NKI、Sanger等)建立合作关系,拥有全球较大的cDNA、基因组、噬菌体展示、microRNA、siRNA、shRNA与MGC收藏库,涉及物种包括人、小鼠、大鼠、牛,以及各种模式动物如线虫、斑马鱼、果蝇、原鸡、爪蟾等,产品达1600多万种。

物种
类别

克隆集
编号

克隆集名称

克隆
数量

线

C.elegans RNAi resources
3300
C.elegans Chr.I RNAi
3072
C.elegans RNAi resources
3301
C.elegans Chr.II RNAi
3456
C.elegans RNAi resources
3302
C.elegans Chr.III RNAi
2688
C.elegans RNAi resources
3303
C.elegans Chr.IV RNAi
3072
C.elegans RNAi resources
3304
C.elegans Chr.V RNAi
4992
C.elegans RNAi resources
3305
C.elegans Chr.X RNAi
2668
C.elegans RNAi resources
3320
C.elegans ORF-RNAi
12768
C.elegans RNAi resources
3308
C.elegans RNAi Ssubset Phosphatase
192
C.elegans RNAi resources
3307
C.elegans RNAi Subset Chromatin
288
C.elegans RNAi resources
3306
C.elegans RNAi Subset Transcription Factors
480
Genomic Clone
80
C.elegans Fosmid
15744
Genomic Clone
742
C.elegans Promoterome
6816
ORF Shuttle Clone(non-vert)
5080
C.elegans Full ORF Entry Clones – ORFeome version1.1 (DFCI)
10944
ORF Expression Clone,ORFeome(non-vert,shuttled)
5181
C.jejuni Full ORF Expression Clones
1728

上海金畔生物科技有限公司成为美国Source Bioscience中国地区一级代理,双方携手为国内科研工作者提供物种齐全的克隆及文库,欢迎您来电咨询和申请。

代理-世界上最大的商业克隆文库

Source Bioscience (Geneservice)与全球多个科研机构(如NIH、NKI、Sanger等)建立合作关系,拥有全球较大的cDNA、基因组、噬菌体展示、microRNA、siRNA、shRNA与MGC收藏库,涉及物种包括人、小鼠、大鼠、牛,以及各种模式动物如线虫、斑马鱼、果蝇、原鸡、爪蟾等。

优势:

超过2000万克隆;

序列经过验证;

质粒制备服务;

快速到货时间。

克隆资料:

CDNA全长或者开放阅读框:(包括IMAGE, MGC, FANTOM库、小片段和者开放阅读框);

RNA干扰:

RNA干扰(人的微小RNA、短发卡RNA Human 、MISSION 小干扰RNA,线虫 RNAi干扰)。

噬菌体抗体文库:

Human Single Fold scFv Libraries I + J (Tomlinson I+J)

Tomlinson I + J文库有超1000万不同的重组单链抗体基因片段,克隆到噬菌体载体后转化TG1 E. coli cells,通过噬菌体展示技术可获得大量的特异性重组抗体,可用于各种传统的免疫学试验。

Human Domain Antibody Library

Human Domain Antibody Library源自MRC Daniel Christ实验室,基于VH框架(V3-23/D47)通过PCR突变抗原结合部位的高可变区CDR1、CDR2和CDR3区域,从而引入抗体的多样性。Human Domain Antibody Library明显优于Tomlinson I + J 文库,可以通过噬菌体展示技术产生针对任何目的抗原的抗体。该类抗体可用于ELISA, Western blotting, FACS, IHC等免疫学试验。

ATLAS scFV Constructs/full sets

是针对小鼠细胞表面受体280个基因的404个抗原的抗体,这些抗原在 E.coli 或者哺乳动物表达体系中产生,载体构建时引入tri-FLAG 标签、二聚细菌酶、碱性磷酸酶序列,二聚化增加了抗原结合的亲和力。

基因合成:需要及时沟通定制。

基因组:

人(CpG岛、TilePath 细菌人工染色体、最小的基因克隆集合库、人类常用的细菌人工染色体库(RPCI-11));

线虫(启动子文库、粘粒文库);
鸡(细菌人工染色体库、CpG岛);

果蝇粘粒文库;

河豚(细菌人工染色体库、粘粒);

小鼠 (bMQ 细菌人工染色体库, 细菌人工染色体库 (RPCI-23), 
酵母人工染色体, 粘粒 (strain 129/ola);

斑马鱼(细菌人工染色体库);

猪(CpG岛)

Source Bioscience基因组数据集克隆和抗体搜索引擎

优势:直观与快速;

较大的基因与文库的搜索网站,公开发布的的数据中有近2000多万的克隆和15万的抗体。

如果你对上述底物产品及相关技术信息感兴趣,请致电021-50837765到上海金畔生物科技有限公司垂询相关的最优产品和解决方案,或索取相关手册和资料。我们会为您做的更多!

Expresso®克隆及表达系统

    蛋白表达是指用模式生物如:细菌、酵母、动物细胞或者植物细胞表达外源基因蛋白的一种分子生物学技术,在基因工程中占据有核心地位。蛋白表达系统主要由宿主,外源基因,载体以及辅助成分构成。其中,宿主及载体的选择在成功表达目的蛋白上起着举足轻重的地位。 美国Lucigen公司成立于1998年,主要从事于生命科学领域相关产品的研发,该公司在分子生物学领域处于领导地位。该公司主要致力于基因克隆,蛋白表达等核心分子生物学试剂产品的研发与生产,并且获得了用户的一致好评。针对蛋白表达系统,Lucigen公司推出了一种新型的克隆表达系统。

该系统的优点主要有:Expresso®克隆及表达系统
1.节约时间。该系统为您提供处理好的载体及感受态细胞,无需连接步骤,可供客户直接使用,和传统的克隆相比,很大程度上缩短了实验所需时间。
2.无需连接酶。直接将目的片段和载体混合,通过重组可得到含有目的基因的载体。
3.蛋白表达的精确控制。根据客户自己需求,可以通过诱导系统精确控制N-his或C-his标签蛋白的表达。
4.两个启动子可供选择。该系统具有两种载体,两种启动子供选择,T7和Rhamnose,根据客户实验需要,选择适合的启动子。
5.增加蛋白溶解度。该系统还为您提供一种携带有SUMO标签的质粒,该标签可以增加目的蛋白的溶解度。为了不影响您实验,该SUMO标签是可切割的。

该系统具有的两种启动子载体有各自的感受态细胞。T7启动子所对应的表达载体能够高表达目的蛋白,T7表达系统是一个双宿主表达系统,即包含HI-Control 10G Competent cell和HI-Control BL21 Competent cell两种感受态细胞。该载体的表达主要用于通过IPTG诱导的蛋白高表达。

Rhamnose表达系统是一个单宿主表达系统。即质粒的扩增和蛋白的表达在同一种感受态细胞里可完成。该体统的蛋白表达是可调节的。通过控制rhamnose的浓度来实现目的蛋白的不同水平的表达。但是这个载体系统所对应的蛋白表达水平比T7载体更低,主要用于某些毒性蛋白或者不溶蛋白的过表达。

Product Cat.No
Expresso® Rhamnose , C-His 49012
Expresso® Rhamnose , N-His 49011
Expresso® Rhamnose , N/C-His Combo, 5 reaction of each of N-His and C-His 49010
Expresso® Rhamnose SUMO 49013
Expresso® T7 , N-His 49001
Expresso® T7 , C-His 49002
Expresso® T7 , N/C-His Combo, 5 reaction of each of N-His and C-His 490001
Expresso® T7, SUMO 49003

注:以上产品均包含预处理好的质粒及感受态细胞,以及其他试剂。如有不清楚,欢迎来电咨询。

另外,Lucigen公司的特色产品还包括CloneSmart®平端克隆试剂盒、BigEasy®线性克隆系统、pEZSeq™平端克隆试剂盒、ClonePlex™ AK文库构建试剂盒、DNA Terminator ®末端修复试剂盒、EconoTaq® DNA聚合酶及E.cloni感受态细胞等。上海金畔生物科技有限公司作为Lucigen在中国地区的一级代理商,可以为您提供更低的价格,更好的服务。如果你对上述相关产品或技术敢兴趣,可以直接拨打021-50837765 到上海金畔生物科技有限公司垂询相关的最优产品和解决方案,或索取相关手册和资料。我们会为您做的更多!