脱氧核糖核酸酶Ⅰ

英文名称: DNase I / Deoxyribonuclease I

中文名称:脱氧核糖核酸酶Ⅰ/去氧细胞核酸酶/氧核糖核酸-5ˊ-寡核苷酸水解酶/无核糖核酸酶/脱氧核糖核酸去聚合酶/脱羟核糖核酸酶/除氧细胞核酸酶

来源:牛胰腺

性状:白色冻干粉末,不含盐,溶于水,微溶于30%乙醇

CAS NO.  9003-98-9

分子量:约31000 g/mol 

存储条件:-20℃保存

活性:大于3000 U/mg 

说明: 脱氧核糖核酸酶I是一种可以消化单链或双链DNA产生单脱氧核苷酸或单链或双链的寡脱氧核苷酸的核酸内切酶。DNase I水解单链或双链DNA后的产物,5′端为磷酸基团,3′端为羟基。

酶反应:脱氧核糖核酸→ 二核苷酸-5ˊ-磷酸+ 寡聚核苷酸-5ˊ-磷酸

用途:DNase I不含其它DNA内切酶和外切酶,不含RNA酶,可用于制备不含DNA的RNA样品;RT-PCR反应前RNA样品中去除基因组DNA等可能的DNA污染;体外T7, T3, SP6等RNA Polymerases催化的RNA转录后去除DNA模板; DNase I footprinting研究DNA-蛋白质相互作用;缺口平移(nick translatioin);产生DNA随机片断文库;细胞凋亡TUNEL检测中部分剪切基因组DNA作为阳性对照。

激活与抑制:激活剂为二价金属离子,较大激活可以从镁(Mg++)+钙(Ca++)得到,镁离子存在条件下,DNase I可随机剪切双链DNA的任意位点;二价锰离子存在条件下,DNase I可在同一位点剪切DNA双链,形成平末端,或1-2个核苷酸突出的粘末端。抑制剂有EDTA和十二烷基硫酸钠。可加5mmol/L钙(Ca++)或二异丙基氟磷酸(DFP)作为稳定剂的对抗蛋白水解酶的消化

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产品详情

品牌

货号

品名

规格

AppliChem

A3778

DNase I

10mg/50mg/100mg

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牛脱氧核糖核酸酶I(DNase-I)酶联免疫分析试剂盒BS-4000


牛脱氧核糖核酸酶I(DNase-I)酶联免疫分析试剂盒

  • 产品型号:BS-4000
  • 简要描述:牛脱氧核糖核酸酶I(DNase-I)酶联免疫分析试剂盒金畔生物公司供应:ELISA试剂盒,荧光定量PCR耗材,移液器吸嘴,微量离心管,进口冻存管,细胞培养皿,培养板,培养瓶,吸头,仪器及手套,色谱耗材,针头过滤器。
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  • 产品简介

  牛脱氧核糖核酸酶I(DNase-I)酶联免疫分析试剂盒使用说明书

  本试剂盒仅供研究使用。

  检测范围:96T25pg/ml-900pg/ml

  使用目的:本试剂盒用于测定牛血清、血浆及相关液体样本中脱氧核糖核酸酶I(DNase-I)含量。

  实验原理:本试剂盒应用双抗体夹心法测定标本中牛脱氧核糖核酸酶I(DNase-I)水平。用纯化的牛脱氧核糖核酸酶I(DNase-I)抗体包被微孔板,制成固相抗体,往包被单抗的微孔中依次加入脱氧核糖核酸酶I(DNase-I),再与HRP标记的脱氧核糖核酸酶I(DNase-I)抗体结合,形成抗体-抗原-酶标抗体复合物,经过彻底洗涤后加底物TMB显色。TMB在HRP酶的催化下转化成蓝色,并在酸的作用下转化成最终的黄色。颜色的深浅和样品中的脱氧核糖核酸酶I(DNase-I)呈正相关。用酶标仪在450nm波长下测定吸光度(OD值),通过标准曲线计算样品中牛脱氧核糖核酸酶I(DNase-I)浓度。

  牛脱氧核糖核酸酶I(DNase-I)酶联免疫分析试剂盒试剂盒组成

  130倍浓缩洗涤液20ml×1瓶7终止液6ml×1瓶2酶标试剂6ml×1瓶8标准品(1600pg/ml)0.5ml×1瓶3酶标包被板12孔×8条9标准品稀释液1.5ml×1瓶4样品稀释液6ml×1瓶10说明书1份5显色剂A液6ml×1瓶11封板膜2张6显色剂B液6ml×1/瓶12密封袋1个

  标本要求

  1.标本采集后尽早进行提取,提取按相关文献进行,提取后应尽快进行实验。若不能马上进行试验,可将标本放于-20℃保存,但应避免反复冻融2.不能检测含NaN3的样品,因NaN3抑制辣根过氧化物酶的(HRP)活性。

  操作步骤

  1.标准品的稀释:本试剂盒提供原倍标准品一支,用户可按照下列图表在小试管中进行稀释。800pg/ml5号标准品150μl的原倍标准品加入150μl标准品稀释液400pg/ml4号标准品150μl的5号标准品加入150μl标准品稀释液200pg/ml3号标准品150μl的4号标准品加入150μl标准品稀释液100pg/ml2号标准品150μl的3号标准品加入150μl标准品稀释液50pg/ml1号标准品150μl的2号标准品加入150μl标准品稀释液

  2.加样:分别设空白孔(空白对照孔不加样品及酶标试剂,其余各步操作相同)、标准孔、待测样品孔。在酶标包被板上标准品准确加样50μl,待测样品孔中先加样品稀释液40μl,然后再加待测样品10μl(样品最终稀释度为5倍)。加样将样品加于酶标板孔底部,尽量不触及孔壁,轻轻晃动混匀。

  3.温育:用封板膜封板后置37℃温育30分钟。

  4.配液:将30倍浓缩洗涤液用蒸馏水30倍稀释后备用

  5.洗涤:小心揭掉封板膜,弃去液体,甩干,每孔加满洗涤液,静置30秒后弃去,如此重复5次,拍干。

  6.加酶:每孔加入酶标试剂50μl,空白孔除外。

  7.温育:操作同3。

  8.洗涤:操作同5。

  9.显色:每孔先加入显色剂A50μl,再加入显色剂B50μl,轻轻震荡混匀,37℃避光显色10分钟.

  10.终止:每孔加终止液50μl,终止反应(此时蓝色立转黄色)。

  11.测定:以空白孔调零,450nm波长依序测量各孔的吸光度(OD值)。测定应在加终止液后15分钟以内进行。

  牛脱氧核糖核酸酶I(DNase-I)酶联试剂盒操作程序总结:

牛脱氧核糖核酸酶I(DNase-I)酶联免疫分析试剂盒BS-4000

  计算以标准物的浓度为横坐标,OD值为纵坐标,在坐标纸上绘出标准曲线,根据样品的OD值由标准曲线查出相应的浓度;再乘以稀释倍数;或用标准物的浓度与OD值计算出标准曲线的直线回归方程式,将样品的OD值代入方程式,计算出样品浓度,再乘以稀释倍数,即为样品的实际浓度。

  注意事项1.试剂盒从冷藏环境中取出应在室温平衡15-30分钟后方可使用,酶标包被板开封后如未用完,板条应装入密封袋中保存。2.浓洗涤液可能会有结晶析出,稀释时可在水浴中加温助溶,洗涤时不影响结果。3.各步加样均应使用加样器,并经常校对其准确性,以避免试验误差。一次加样时间最好控制在5分钟内,如标本数量多,推荐使用排枪加样。4.请每次测定的同时做标准曲线,最好做复孔。如标本中待测物质含量过高(样本OD值大于标准品孔第一孔的OD值),请先用样品稀释液稀释一定倍数(n倍)后再测定,计算时请最后乘以总稀释倍数(×n×5)。5.封板膜只限一次性使用,以避免交叉污染。6.底物请避光保存。7.严格按照说明书的操作进行,试验结果判定必须以酶标仪读数为准.8.所有样品,洗涤液和各种废弃物都应按传染物处理。9.本试剂不同批号组分不得混用。

  保存条件及有效期1.试剂盒保存:;2-8℃。2.有效期:6个月