StabyTM Codon T7 蛋白表达系统——稀有密码子蛋白的无抗生素表达系统

StabyTM Codon T7 蛋白表达系统——稀有密码子蛋白的无抗生素表达系统目前生物医药研究和生物技术生产的主要方法是利用外源表达系统来表达目的蛋白,常用的外源表达系统有大肠杆菌表达系统,酵母表达系统,哺乳动物表达系统等。要实现目的基因在外源表达系统中的成功表达和尽可能地提高其表达量,可以通过增加目的基因剂量,目的基因密码子优化,改善培养条件等方法实现,其中目的基因密码子优化起到关键的作用。如果目的基因的密码子与表达宿主不匹配,则会降低mRNA的翻译效率和稳定性,甚至会造成mRNA翻译的提前终止。目前可以通过两个途径来解决这个问题:①提高宿主表达系统中低丰度的tRNA;②对目的基因进行密码子改造,使它的密码子是宿主表达系统的高频密码子,也就是通常所说的密码子优化。

StabyTM Codon T7 kit特别设计的pSCodon1载体可表达6个大肠杆菌稀有密码子tRNA,包括AUA,AGG,AGA,CUA,CCC和GGA。结合T7高效启动子以及Staby特有的无抗生素的ccdAB筛选系统,可以直接用于高效表达含稀有密码子的各类蛋白,不再需要进行密码子改造工作。

试剂盒组份

(1) pSCodon vector DNA,

(2) CYS21 competent bacteria for cloning,

(3) SE1 competent bacteria for expression,

(4) regeneration medium,

(5) sequencing primers,

(6) expression control,

(7) instruction manual.

感受态细胞可以单独购买,均有电转化和化学转化2种类型的产品可以选择,电转效率要明显高于化学转化。

产品优势

(1)具有StabyExpress的所有优点。

(2)对包含有稀有密码子的异源蛋白可以保证高表达量,而不再需要对核酸序列进行定点突变。

(3)不需要额外的质粒。

操作步骤

1. 将目的基因克隆入pSCodon载体

2. 转化CYS21获得正确的构建(不建议直接转化表达菌株,因为表达菌株中T7及目的蛋白的本底表达将显著降低质粒提取效率)

3. 重组质粒转化SE1菌株

4. 诱导表达(IPTG诱导表达,由于StabyExpressTM系统可显著降低菌体蛋白的表达,对T7 RNA聚合酶或目的蛋白的表达没有任何改变,因此可直接使用原有的T7诱导条件进行表达,或直接使用Delphi提供的StabyTM Switch medium进行小量表达)

相关产品信息

货号

品名

规格

GE-SCT7-0505

StabyCodons T7 expression kit, electro-competent

5 RXN

GE-SCT7-0707

StabyCodons T7 expression kit, chimio-competent

5 RXN

GE-SCT7-1010

StabyCodons T7 expression kit, electro-competent

10 RXN

GE-SCT7-1212

StabyCodons T7 expression kit, chimio-competent

10 RXN

上海金畔生物科技有限公司作为Delphi中国大陆以及香港和澳门地区的独家代理,全面供应其所有产品,包括StabyCloning™ PCR克隆系统(StabyCloning™ kit)、StabyExpress™ T7蛋白表达系统(StabyExpress™ T7 kit)、Cherry™ 蛋白表达系统(Cherry™ Express/Codon kit)、StabyCodon™ T7蛋白表达系统(StabyCodon™ T7 kit)、GetStaby™ kit以及相关感受态细胞(Competent Cells)。欢迎致电021-50837765或021-63599871了解更多产品信息以及专利相关事宜。

New!代理转染试剂专家Mirus新品发布——昆虫细胞系专用转染试剂

常见体外重组表达系统分为原核表达系统和真核表达系统,原核表达系统主要为大肠杆菌表达,操作简便、周期短收益大及表达产物稳定,但是表达基因的相对分子质量有限,不宜过大,且缺乏翻译后加工、修饰等元件。真核细胞系统包括 CHO等哺乳动物细胞、酵母细胞和昆虫细胞等。昆虫细胞表达系统(即杆状病毒表达系统)具有高效表达,完善的转译后加工修饰,较易从无血清培养上清中纯化的蛋白,无内毒素污染等特点,日益受到人们的重视,逐渐应用到更多的领域中。

虽然昆虫表达系统具有高效表达的特性,但是在转染过程中转染效率也是一个重要影响因素,目前市场上大部分的转染试剂对于昆虫细胞系而言,转染效率均不太理想,转染效率低下,细胞毒性大是普遍存在的问题。美国转染试剂专家Mirus的研发团队经过精心研制,推出昆虫细胞系专用转染试剂TransIT®-Insect,该转染试剂适用于绝大多数昆虫细胞系的高效转染。

产品特点:

1. 适用广泛:Sf9, High Five™ and S2等多种表达系;
2. 高效:有利于提高杆状病毒在昆虫细胞内的产量;
3. 血清兼容型:TransIT®-Insect是一款非脂质体,无动物源性,无需更换培养基的转染试剂;
4. 性价比高:用量相对更少,一般推荐使用比例为1:2 (DNA质粒ug/转染试剂ul)

产品订购信息:

品名

货号

规格

TransIT®-Insect Transfection Reagent

MIR 6104

0.4 ml

TransIT®-Insect Transfection Reagent

MIR 6100

1 ml

TransIT®-Insect Transfection Reagent

MIR 6105

5 X 1 ml

TransIT®-Insect Transfection Reagent

MIR 6106

10 X 1 ml

更多信息可以点击:https://www.mirusbio.com/products/transfection/transit-insect-transfection-reagent

美国专业转染试剂研发公司Mirus成立于1995年,是世界上最早开发高效、低细胞毒性转染试剂的公司之一,同时也是目前该类试剂最主要的供应商之一。Mirus的生物学家利用他们在核酸化学、细胞及分子生物学领域的专长,建立了创新的技术和产品开发,这些技术和产品被广泛应用于生命科学研究。Mirus被公认为是核酸研究试剂开发的领跑者,其杰出成就受到世界公认。其中王牌转染试剂TransIT-LT1以其高效、低度及高性价比的优点深受广大科研工作者的青睐,目前TransIT®系列转染试剂以用于检测了492种细胞系及原代细胞,超过1600篇SCI文章使用。

上海金畔生物科技有限公司作为美国Mirus中国一级代理商,双方携手为国内科研工作者提供专业的转染试剂,同时,上海金畔生物科技有限公司也为广大客户提供免费试用装,欢迎您来电咨询和申请。

更有Mirus王牌高效低毒广谱转染试剂LT-1,2020,X2,TKO,siQUEST,特定细胞系专用转染试剂优惠热销,详情请咨询Mirus中国一级代理商——上海金畔生物科技有限公司全国客服热线021-50837765,欢迎广大客户来电咨询或者订购。

来自全球使用者的反馈信息:

“Our lab successfully tested TransIT®-Insect Transfection Reagent for generating recombinant baculovirus in insect cells. Using TransIT®-Insect with multiple BEVS we were able to generate high-titer baculovirus that resulted in consistently higher protein expression in High Five™ and Sf9 cells compared to Cellfectin® II (Life Technologies).”

-Dr. Linda Lua (Director), The University of Queenland – Protein Expression Facility

“Our lab tested TransIT®-Insect for virus production in Sf9 cells. It performed better than Cellfectin® II that we currently use for transfecting these cells. Cytopathic effects (CPE) of the baculovirus were observed after 5 days with as little as 0.5 µg DNA per well of a 6-well plate. When using Cellfectin® and other reagents, we haven’t seen any results using the same amount of input DNA.”

-Eric Carlin, Florida Gulf Coast University