安全高效方便的RNase清除试剂RNase-ExitusPlus™

新冠肆虐两年,一波还未平息,一波又来侵袭,唯有预防和治疗齐头并进,才能适当抑制疫情的发展。相较于传统疫苗,mRNA疫苗有诸多优势。mRNA疫苗是一种新型的、预防传染病和慢性病的疫苗, mRNA疫苗可以让我们的细胞制造一种蛋白质,甚至只是蛋白质的一小部分,来触发免疫反应,它潜力无限。

如下图所示,mRNA疫苗是将外源靶抗原的基因序列通过转录、合成等工艺制备的mRNA通过特定的递送系统导入机体细胞,通过在体内表达目的蛋白,刺激机体产生特异性免疫学反应,从而使机体获得免疫保护的一种核酸制剂。然而所有与RNA相关的生物试验都会涉及到RNase的污染及RNA降解的预防问题,并且少量的RNase污染就会严重影响后面的实验结果。

安全高效方便的RNase清除试剂RNase-ExitusPlus™

mRNA疫苗质量控制

在mRNA疫苗的生产过程中以及任何生物制剂产品中,质量控制都是非常严格的!以mRNA制备为例,在转录模板中的杂质就有很多,如质粒DNA抽提过程中残留的RNaseA、宿主菌DNA、宿主菌RNA和宿主蛋白等,它们都会显著影响体外转录反应和转录mRNA的质量,需对模板的纯度进行严格的把关。在体外转录的过程中杂质的污染也会极大地影响mRNA疫苗的安全性和效力,例如被引入人体细胞的双链RNA和DNA-RNA杂交分子等能被细胞模式识别受体识别触发先天免疫反应,诱导I型干扰素的表达,降低蛋白质的翻译。研究证明,去除mRNA制备物中的污染物会降低先天免疫反应,并导致体外报告蛋白表达水平显著提高。

RNase-ExitusPlus

在mRNA疫苗的生产以及其他与mRNA相关的生物制品中,RNase污染的清除尤为重要,德国Applichem研发的RNase-ExitusPlus™是一种非碱性、无腐蚀性且无致癌性的新型RNase清除液,它对RNase污染物具有很好的清除性能,是适用于任何表面的即用型RNase污染清除液,可用于实验室表面的清洁,如实验操作台、电泳设备、移液器和反应管等。

清除剂的独特优势

  1. 简便性:使用后便开始去污,在清除剂完全干燥之前(10~15分钟后)将其擦掉即可,之后无需再用无菌水清洗;
  2. 高效性:试剂中的有效成分,通过催化和协同作用,使蛋白质和RNase分子迅速失活,实现RNase的高效非酶降解;
  3. 安全性:不含腐蚀性无机酸或碱性物质,不会损坏或腐蚀设备和材料,仅含有低浓度的酒精,不会对仪器、设备、器材、人体造成影响和伤害;
  4. 无污染:所有组分可生物降解、不会造成环境污染和破坏。

使用方法

  1. 喷(适用于实验操作台表面/手套等)

直接将RNase-ExitusPlus™喷到操作台表面作用10~15分钟,无菌湿布擦拭后即可,无需用水冲洗;

  1. 擦(适用于仪器表面,剪刀,镊子等工具)用布或纸巾蘸取适量 RNase-ExitusPlus™擦拭表面,充分作用后再用干净湿布擦一遍即可;
  2. 泡(适用于移液器等其他拆卸的细小部件)置于RNase-ExitusPlus™中浸泡1min,然后用清水冲洗干净晾干后安装即可;

小贴士

  1. 升温至50度可提高反应速度;
  2. RNase-ExitusPlus™为德国Applichem注册商标

处理效果

安全高效方便的RNase清除试剂RNase-ExitusPlus™

将干燥的RNase A放入反应管的样品1、3和4。然后,RNase A 样品用1ml的 H2O(3,4) 或RNase-ExitusPlus™ (1)处理,室温下放置5分钟。紧接着用1ml的无菌水清洗两次。然后在每个管子里放入从大肠杆菌得到的RNA 5ug。将10ug的新鲜分装RNase A添加到管4中,所有管在37° c孵育30分钟。5ug未处理的从大肠杆菌得到的RNA作为对照(C)。最后,加入缓冲液和将样本加入 1%琼脂糖凝胶电泳检测。

产品信息

产品名称

货号

规格

RNase-ExitusPlus™

A7153.0500

500ml

A7153.1000RF

1L

A7153.2500RF

2.5L

安全高效方便的RNase清除试剂RNase-ExitusPlus™

安全高效方便的RNase清除试剂RNase-ExitusPlus™

PanReac Applichem是欧洲生物化学试剂与制药原辅料生产商,ITW成员公司,已成为全球科研、知名CRO企业、大型制药、诊断、食品、化妆品等工业的重要供应商。全面提供细胞培养级、符合各国药典等生物制药上下游系列生物化学试剂,cGMP生产的原辅料。Applichem公司产品种类众多,覆盖领域广泛,产品级别丰富,性价比超高,包括实验室污染防治系列、实验室常用生化试剂、生物制药行业药典级与细胞培养级试剂,以及诊断研发工业中天然蛋白、酶、辅酶和底物等。

上海金畔生物科技有限公司致力于为广大客户提供专业高品质实验室公用产品,欢迎拨打上海金畔生物科技有限公司客户服务热线021-50837765或登录网站www.jinpanbio.cn了解更多信息。

mRNA体外合成试剂盒

mRNA(Messenger RNA或信使RNA)在人类生物学中起着基本作用,它转移存储在DNA中的指令来制造细胞所需的蛋白质。mRNA疫苗是将RNA在体外进行相关的修饰后传递至机体细胞内表达并产生蛋白抗原,从而导机体产生针对该抗原的免疫应答,进而扩大机体的免疫能力。

新冠疫情的突然爆发,加速了 mRNA 疫苗的研发和产业化,mRNA疫苗作为新一代技术,因其颠覆传统免疫激活路径,提供稳定高保护率和不错的安全性,深受市场关注。另外,体外 mRNA 的合成、加工、递送等技术不断的成熟,成本不断的降低,看得见的效用等使得mRNA 疫苗药物商业化生产的步伐不断加快。其在治疗肿瘤、免疫疾病等领域有着令人期待的发展空间。mRNA必将引领人类疫苗及药物的改革浪潮。

mRNA疫苗开发流程包括病原体识别、测序、mRNA体外合成和修饰、纯化等操作。

mRNA体外合成试剂盒

mRNA疫苗生产流程示意图

上海金畔生物科技有限公司代理的Jena Bioscience经过匠心研发开发出的HighYield T7 ARCA mRNA Synthesis Kit mRNA体外合成试剂盒包含一整套的RNA合成所需试剂,并配有详细的教程。HighYield T7 ARCA mRNA Synthesis Kit通过T7 RNA聚合酶体外转录产生大量ARCA mRNA。与传统的m7GpppG-capped mRNA相比,Anti-reverse cap analog (ARCA, m7,3′-OGpppG) capped (m)RNA具有更高的翻译效率。由此产生的5 ‘ -capped (m)RNA随后可用于微注射、转染或体外翻译等实验。

产品特点

  • 使用方便,包含整套mRNA合成所需试剂
  • 产量高,在20 μl反应条件下,可得到30~50 μg RNA
  • 快速便捷,孵育时间仅需30min
  • ARCA mRNA翻译效率更高

竞品比较

mRNA体外合成试剂盒

相关产品信息

品牌

产品名称

货号

规格

应用

Jena Bioscienc

HighYield T7 ARCA mRNA Synthesis Kit

RNT-102-S

15 reactions x 20 μl

合成ARCA-capped mRNA

Jena Bioscienc

HighYield T7 ARCA mRNA Synthesis Kit

RNT-102-L

50 reactions x 20 μl

合成ARCA-capped mRNA

Jena Bioscienc

HighYield T7 RNA Synthesis Kit S

RNT-101

50 reactions x 20 μl

合成未修饰RNA

Jena Bioscienc

HighYield T7 ARCA mRNA Synthesis Kit (m5CTP/Ψ-UTP)

RNT-103

15 reactions x 20 μl

合成5-mC & Ψ-U修饰ARCA-capped mRNA

Jena Bioscienc

HighYield T7 mRNA Synthesis Kit (m5CTP/Ψ-UTP)

RNT-104

15 reactions x 20 μl

合成5-mC & Ψ-U修饰mRNA

除上述mRNA体外合成试剂盒外,Jena Bioscienc还提供一系列相关高质量原料。包括:修饰核苷酸、T7 RNA聚合酶、加帽酶、加尾酶等。

低血清细胞培养方式

随着国家药品监督管理部门对药品生产监管力度越来越大,生物制药和疫苗生产企业对产品安全性管理要求越来越高,在疫苗生产过程中采用无动物源成份的原辅料是日益增长的要求趋势,但目前,绝大部分疫苗生产还离不开细胞培养过程中血清成份的添加,但使用血清,必须面对血清带来的系列问题和缺点:

1.     批间差较大:每批血清可能适合某些细胞系,换血清批号要做广泛实验,大量储存提高成本,且很难实现大规模生产过程的标准化,也在一定程度上影响疫苗的批次稳定性;

2.     污染风险:血清常受病毒污染,虽对多数细胞培养无害,但增加了不能控制的因素,一旦出问题,需要耗费相当大的时间、物资和人力成本去解决;

3.     不确定性:血清中含有广泛的未知微量成分,对其存在的作用还远未搞清楚,也增加了纯化和疫苗质量控制的难度;

4.     高成本:高质量血清供应不足,全球血清趋紧,且价格仍不断上升,成本往往是细胞培养基成本的数倍,给疫苗生产企业带来相当大的成本压力;

因此,如何降低血清在疫苗生产中的用量,从而减少使用血清带来的风险和高成本,是疫苗生产企业广泛关注且努力寻找解决方案的重要问题。

与传统的高血清含量细胞培养相比,采用低血清细胞培养方式,不仅能够降低疫苗安全性风险,还能提高企业生产效率,使用低血清培养基进行疫苗生产,细胞经驯化适应后,与传统培养方式相比,细胞数量有显著提高,细胞长满单层时间大大缩短,分种比例、病毒滴度也有所提高,同时减少劳动强度,从而大大提高企业的生产效率,最重要的是,降低了疫苗生产企业的综合成本。

上海金畔生物科技有限公司(以下简称上海金畔生物科技有限公司)为疫苗客户引进全球知名培养基营养添加物供应商——KERRY,其高品质的植物源蛋白水解物、复合非动物源性添加物系统、超滤酵母粉、重组低内毒素白蛋白服务于全球疫苗生产企业、培养基生产企业近70年,为广大疫苗客户很大程度上解决了血清带来的困扰。目前在国内,KERRY系列产品已经广泛应用于疫苗生产的BHK、VERO、SF-9、MDCK、MRC5等细胞株中,上市疫苗品种有:口蹄疫疫苗、戊肝疫苗、流感疫苗等,血清使用量已经从从10%降低到3%,少数客户已经实现了完全无血清培养。

使用KERRY Sheff-VAX系统用于VERO细胞降血清驯化案例

低血清细胞培养方式

图1. Vero细胞生长形态对比。(A)对照组:10%胎牛血清;(B):实验组:0%胎牛血清+2g/L Sheff-VAX ACF。根据观察,A对照组中的Vero细胞和B实验组的细胞没有不同。所有图片都是用100X莱卡显微镜拍摄。

低血清细胞培养方式

图2. 以Vero细胞在含有10%的胎牛血清的培养基中生长曲线为对照组,对比细胞在逐渐减少血清的情况下加入Sheff-Vax添加物进行细胞穿戴。DMEM作为基础培养基。(i)10%胎牛血清;(ii)7.5%胎牛血清;(iii)5%胎牛血清;(iv)2.5%胎牛血清;(v)1.5%胎牛血清;(vi)1%胎牛血清;(vii)0.5%胎牛血清;(viii)0.25%胎牛血清;(ix)0.1%胎牛血清;(x)0 %胎牛血清。用逐渐减少血清的方法,可以实现Vero细胞的无血清培养。在同样的培养基时间内,有添加物培养基中的细胞可达对照组细胞密度峰值的一半。但通过延长培养时间,可获得更高的细胞密度峰值。

推荐疫苗生产细胞培养添加物系列产品介绍:

1. 全球独家非动物复合添加物Sheff-VAX系列

低血清细胞培养方式

PF为无蛋白,plus为含微量元素

2. 非动物源Hypep系列

低血清细胞培养方式

3. 其他相关产品

低血清细胞培养方式

由于低血清培养基在成分配比上与基础培养基有所不同,其培养液的pH、渗透压及碳酸氢钠添加量等有所改变,以及细胞生长速度、分种比例、收毒时间及次数等都与用户以往的经验和习惯不同,在使用低血清培养基时,容易给用户造成一定的困难。因此,要使用好低血清培养基,用户必须打破以往形成的使用习惯,以一种全新的姿态来认识低血清培养基。我们可以提供以上产品的试用装,用于您工艺优化小试,如果您对以上产品感兴趣,欢迎联系KERRY细胞营养产品中国独家一级代理商——上海金畔生物科技有限公司。

除以上产品以外,上海金畔生物科技有限公司还是其他全球十大生物炸弹药原辅料与服务商的中国一级代理商或一级代理,目前我们提供的原辅料已经被国内近百家生物制药企业,包括国内知名的人用、兽用疫苗企业广泛使用。除降血清方案的细胞营养添加物以外,还涉及上游细胞培养原料,宿主残留检测产品与验证服务,过程污染物检测产品、高纯低内毒素海藻糖、蔗糖等顶级糖类辅料等一站式系列产品和服务。如您对以上任何产品感兴趣,欢迎致电021-50837765联系我们,在北京,上海,成都,重庆,武汉,广州,深圳等各地都有我们公司当地市场销售人员为您服务。