PCR污染有好的解决方法吗?

生物实验,大多数实验检测都是微观的,基于细胞,分子,蛋白水平,而这些微观样本对外界环境的影响敏感,比如温度、ph值、酶解、损伤等,在我们尽力呵护样本的生存环境的同时,污染也是需要注意的头等大事,要坚决避免环境中的“杂质”的乱入,包括样本污染,试剂仪器交叉污染、产物气溶胶污染等对实验结果的影响。“易查不易察”,污染来的悄无声息,防不胜防,假阳性结果让无数生物学子抓狂和崩溃。

小编今天就来扒一扒生物实验室污染之PCR实验污染你不知道的事。

在众多的生物实验室,分子生物学检测方法如PCR因其高灵敏度、快速、操作方便等优势已经被广泛应用,不过正是由于它灵敏度极高,极微量的污染源都有可能导致检测结果的假阳性,所以对环境污染的控制也极为严格。面对众多的污染源,比如样本交叉污染、试剂仪器交叉污染、克隆质粒污染、PCR扩增产物污染、还有极容易忽视的气溶胶污染,气溶胶是由固体或液体小质点分散并悬浮在气体介质中形成的胶体分散体系,在空气与液体面摩擦时,比如在操作时比较剧烈地摇动反应管,开盖时、吸样时及污染进样枪的反复吸样都可形成气溶胶而污染。据计算一个气溶胶颗粒可含48000拷贝,因而由其造成的污染是一个非常重要而被忽视的污染源。

虽然这些污染对PCR实验结果的影响已经受到了广泛重视,多数实验室对污染控制都采取了各种办法,比如定期大扫除清理、划分操作区域、试剂分装、操作谨慎、重复实验、多角度验证结果。但是微量的核酸片段就能被扩增,所以对污染物的控制不仅仅是做到这些就能够杜绝和避免的,关键是需要从源头控制。目前多数生物试验室,分子实验每天都在大规模进行,污染源已经无处不在,特异性的,非特异性的,同源的,非同源的,广泛分布在样本容器、实验室台面,试剂溶液中、仪器表面内管附着等等,你以为普通的清理就能解决这些污染源吗?必须是不行的,实验室大拿们都为了清除这些污染源研究出好多种方法,整理跟大家共享。

传统方式

原理

优势

不足

酒精擦拭

将核酸沉淀,擦拭后保证污染表面污染得到一定程度缓解

简单、方便、成本低

不彻底(核酸片段本身没有变化,仍然存在导致气溶胶污染的可能性)、细小孔径器材无法清除

修饰

标记遗传物质,阻止聚合酶与核酸的结合,从而抑制DNA扩增

效果相对好

反应可逆、成本高、试剂可能具有不安全影响

酶解

酶可将长链的核酸分子降解成小片段

速度快,效果相对较好

降解的核酸中仍有大片段存在,具有完整的遗传信息,可通过PCR扩增出完整的片段、成本高

高压变性

高压可将核酸降解成20~30bp的小片段

彻底,成本低

仅适用于耐高压材料,更无法应用实验操作台和大型的实验设备

紫外照射

PCR产物中嘧啶碱基会形成二聚体,延伸终止

方便,范围广,成本低

仅对500bp以上长片段有效,对短片段效果不大,且并不是DNA链中所有嘧啶均能形成二聚体,且UV照射还可使二聚体断裂

纵然有这么多解决核酸污染源的办法,但是大多数实验室却由于使用不方便、操作复杂、成本高、危害大而没有持续采用,实验室累积的污染也就越来越多,有些实验者甚至在ddH2O中扩增出了条带,结果可重复性差、投稿文章被质疑,不得不重新实验,当然在实验之前,必须要彻底清除这些污染源,这么严重的污染如何高效的清除,是一个迫在眉睫的问题。目前国外学者经过不断研发拓展,有一款清除剂DNA-ExitusPlus已经问世,并得到了Nature Methods的推荐,此款清除剂纯绿色配方,能够将污染源的核酸片段彻底降解成核苷酸为单位的极小片段,此过程不可逆,避免了污染重复的可能性,使用方便,使用与所有台面,仪器擦拭,小部件浸泡等,无污染,无腐蚀性,对人体无危害。简直是广大核酸污染受害者的福音啊。

小编当初在实验室就遇到了PCR污染,可苦于当时不知道世上竟有如此神器,实验反反复复折腾了好多次才得到圆满结果,好东西就要分享,在此推荐给大家,希望对各位看官有所帮助。

PCR污染有好的解决方法吗?

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思拓凡沃特曼Cytiva蛋白保存卡

简要描述:

思拓凡沃特曼Cytiva蛋白保存卡,903纸完全符合美国FDA质量体系的相关规定。CLSI关于新生儿检测样本选择有三个关键指标;903纸对一定量的血液样本的血液吸收,滤器提取及血液在试纸上斑点的大小。在这方面Whatman也满足其要求。

Whatman提供不同的普通收集卡,满足很多样品处理需要。

新生儿检测用纸Neonatal Screening Whatman样本收集纸903号滤纸

Whatman提 供一系列用于新生儿检测的产品。这些产品还可应用于医学检验、家用血标本采集试剂盒及标本档案建立等用途。利用样本收集试纸,研究者可以从多种来源获得用 于分析的样本,不仅可从待定实验室环境中获得,还可在更复杂的条件下获得。对样本收集来说,样本的均一、稳定及特性的保持是非常重要的。Whatman为您提供的产品可满足您这方面的需求。

903样本收集纸903 Specimen Collection paper

人体液体标本的收集和转移For Body Fluid Sample Collection and Transport

自Dr. Robert*了新生儿苯酮酸尿症的检测方法后,903纸便成为人体液体标本的收集、转移、分析和建立档案用试纸的标准。903纸作为一款通过美国FDA验证通过的体外二级诊断用产品,在美国国内有着广泛的应用,在世界范围内也应用于相当多的新生儿检测项目中。对于苯酮酸尿症来说,越早检测出来,治愈的可能性越大。除此之外,903纸还可应用于半乳糖症,支链酮尿症,链状细胞贫血症等其他疾病。

稳定性保证Guaranteed Consistency

在生产试纸的过程中Whatman拥有标准的操作程序。控制精良的设备确保产品质量的均一性及各项参数的可控性。考虑到试纸的组分对产品稳定性的影响,Whatman严格地控制生产过程来保证产品组分、厚度、吸收速率及均一性的稳定。

生产过程保证Manufacture Quality Assurance

903纸由99%纯棉绒制成,无任何湿强添加剂。Whatman保证每个批号的产品在正常的使用条件下可维持12个月。903纸完全符合美国FDA质量体系的相关规定。CLSI关于新生儿检测样本选择有三个关键指标;903纸对一定量的血液样本的血液吸收,滤器提取及血液在试纸上斑点的大小。在这方面Whatman也满足其要求。Whatman QA在生产过程监测903纸的一定量血液样本的血液吸收,斑点大小这两个指标。另外,每一批的样品检测包括滤器提取指标都由独立的实验室和新生儿疾病控制中心检测。当且仅当所有指标都符合CLSI的规范,产品方可投入市场。

后印刷保证Post-Printing Quality Assurance

在很多应用中,会把903纸印成表格形式,便于记录被检测病人的一些信息。新生儿筛选用的样本收集卡片的印刷过程是根据NCSL标准严格控制。不正确的印刷会砑光火压碎纸,影响吸附性能。因此Whatman就血液吸收时间、斑点大小等指标对印刷的产品做随机抽查。Whatman可提供这部分的分析报告。

903的其他用途Beyond Neonatal Testing

除了用于新生儿DBS检测,903纸还被广泛地应用于各种样本的收集,包括HIV,HCV,血红蛋白等血样本的收集。另外,903纸还将样本中的其他信息一并携带志医学实验室用于其他测试,例如,血铅水平测试。在流行病学研究中903纸是一种理想的收集样本的介质。

干燥支架Dry Rak for Collection Drying

干燥支架设计出来时便于同时干燥多个样品。将附有样本的903纸放置于支架插槽中,悬空竖立安全地进行空气干燥血液样本。支架的设计形状也使得其易于安放。

多功能新生儿卡片903 Multiple-part Neonatal Card

试纸下方可记录新生儿,父母、医生、护士的信息。每张试纸上都有一个*的序列号和条形码。收集样品区域是试纸的上方5个直径半英寸的环,每个环可吸收75-80ul的血液样本。

903蛋白保存卡Protein Saver Car

903蛋白保存卡上的样品收集区域是5个半英寸直径的圆圈。每个圆圈可吸收75-80μl的血液样本。封面上可以标注名字和收集样本的日期,并印有通用的生物危害标志,符合USPS规定,仅供研究使用。

903可折叠蛋白保护卡

903纸被附在2张封面纸之间,卡上有4个半英寸直径的圆圈用以收集样本,每个可吸收75-80μl的血液样本。采集样品后封面可折叠以保护样本,封面上印有通用的生物危害标志,符合USPS规定,仅供研究使用。

思拓凡沃特曼Cytiva蛋白保存卡

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