高通量IgG定量平台——用于药物发现和开发过程中克隆筛选

高通量IgG定量平台——用于药物发现和开发过程中克隆筛选

在单克隆抗体开发和生产的许多阶段,测定 IgG 的产生是关键步骤。常用的 IgG 定量测定方法要么需要特殊仪器和娴熟人员,例如高效液相色谱法 (HPLC) 和表面干扰量度法,要么需要耗时的测定法,例如酶联免疫吸附检测 (ELISA),尽管 ELISA 是一种被广泛认可的蛋白定量方法,但它操作过程时间长,步骤多。而Valitacell公司 的 Valita®TITER通过荧光偏振(FP)检测实验,可在细胞系开发工作流程中精确快速定量IgG。

高通量IgG定量平台——用于药物发现和开发过程中克隆筛选

基于荧光偏振(FP)技术Valita®TITER 实验可以用来检测 IgG Fc 与蛋白G的相互作用。96 孔微量滴定板的每个孔都涂有荧光标记的 IgG 结合肽蛋白G。向孔中添加样本时,蛋白G分子重悬并与之发生结合。蛋白G结合抗体时,其分子运动的速度下降,从而导致荧光偏振值升高。

Valita® TITER实验原理

高通量IgG定量平台——用于药物发现和开发过程中克隆筛选

Valita® TITER实验流程

高通量IgG定量平台——用于药物发现和开发过程中克隆筛选

如上图所示,Valita®TITER整个实验流程无需对样本做任何处理,无需额外添加任何试剂,更没有洗板等复杂操作步骤,仅需不到15分钟就能完成96个样的IgG定量,非常的简单高效!

ValitaCell提供了一个全面优化的快速、稳健和准确的IgG检测平台,本文我们以Valita®TITER IgG定量试剂盒与Molecular Devices酶标仪结合使用为例。

实验材料

•  Valitacell Valita®TITER Kit (cat. #VAL003) 或

•  Valitacell Valita®TITER Plus Kit (cat. #VAL004)

•  Sigma IgG standard (Sigma cat. #I2511)

•   XP Media™ CHO Growth A (Molecular Devices cat.

#K8860), supplemented with 4 mM L-glutamine

•  SpectraMax iD5 Multi-Mode Microplate Reader或

•  SpectraMax i3x Multi-Mode Microplate Reader或

•  SpectraMax Paradigm Multi-Mode Microplate Reader或

•  SpectraMax M5 Multi-Mode Microplate Reader

实验方法

  1. 使用XP Media™ CHO Growth A作为稀释液,对IgG标准品进行一系列稀释,稀释浓度从2.5-100mg/L (Valita®TITER Kit)或100-2000mg/L (Valita®TITER Plus Kit)。
  2. 向微孔板中加入60μL培养基。
  3. 加入60μL标准品或样品到相应的孔中,吸打3次混匀(实验过程可参考下图)。
  4. 微孔板常温避光孵育5分钟(Valita®TITER Kit)或15分钟(Valita®TITER Plus Kit),用Molecular Devices酶标仪读取数据,酶标仪参数设置参考下表。

高通量IgG定量平台——用于药物发现和开发过程中克隆筛选

高通量IgG定量平台——用于药物发现和开发过程中克隆筛选

适用于 Valita®TITER Kit 酶标仪参数设置表

高通量IgG定量平台——用于药物发现和开发过程中克隆筛选

适用于 Valita®TITER Plus Kit 酶标仪参数设置表

实验结果

研究人员开展的这项工作,主要是为了确定Valita®TITER在Molecular Devices多种型号酶标仪上使用时的最佳参数,以便为高通量药物发现和开发提供一个高性价比高通量IgG测定平台。只需通过简单的加入-读板方法制备IgG标准曲线,没有样品前处理、微孔板预处理、洗板等步骤,实验流程简单易操作。

如SpectraMax iD5酶标仪使用485 nm激发光和535 nm发射光可获得优异的实验结果。IgG标准品浓度从2.5mg/L到100mg/L(Valita®TITER)或从100mg/L到2000mg/L (Valita®TITER Plus)在整个范围内具有很好的线性(R2 = 0.99)(如下图)。Valita®TITER Kit 和 Valita®TITER Plus Kit在SpectraMax i3x、Paradigm和 M5平台的实验数据见下表。SoftMax®Pro软件中的预设置功能可自动进行mP计算和曲线绘制。

高通量IgG定量平台——用于药物发现和开发过程中克隆筛选

Valita®TITER Kit(R2=0.993)标准曲线

高通量IgG定量平台——用于药物发现和开发过程中克隆筛选

Valita®TITER Plus Kit(R2=0.998)标准曲线

高通量IgG定量平台——用于药物发现和开发过程中克隆筛选

Valita®TITER Kit在Molecular Devices各平台实验数据

高通量IgG定量平台——用于药物发现和开发过程中克隆筛选

Valita®TITER Plus Kit在Molecular Devices各平台实验数据

结论

准确、可靠地测量IgG浓度以确保生物制剂生产时最佳细胞培养性能,对药物开发和后续生产至关重要。一种能够以最少的时间和资源投入获得准确结果的分析方法是成功的关键。在这里,我们成功地证明了结合Molecular Devices酶标仪和Valita®TITER的测定方法能够全面的准确定量IgG浓度。

Valita®TITER分析是一种均相的、高通量的方法,能精确和快速定量IgG浓度,不需要样品制备或纯化步骤。该96孔检测方法已在SpectraMax iD5酶标仪和其他具有FP检测的Molecular Devices酶标仪上充分验证,以确保结果可靠。SoftMax Pro软件能自动进行标准曲线拟合和样本定量,减少检测的设置时间。

Valita®TITER适用仪器平台

Valita®TITER兼容市面上常见的多种荧光偏振酶标仪,并且由于Valita®TITER的实验流程非常简单,该方法不光局限于人工手动操作,还能整合入各种半自动、全自动生产线中,从而实现真正的高通量检测。

高通量IgG定量平台——用于药物发现和开发过程中克隆筛选

Valita®TITER兼容多种市面常见品牌的读板仪

高通量IgG定量平台——用于药物发现和开发过程中克隆筛选

Valita®TITER能整合入各种自动化生产线

上海金畔生物科技有限公司是ValitaCell品牌的中国区一级代理商,如果您对上述产品感兴趣,欢迎拨打上海金畔生物科技有限公司客服热线021-50837765或登录www.jinpanbio.cn获取更多产品资料和申请测试样品。

逆转录病毒定量—QuickTiter™逆转录病毒快速定量试剂盒

逆转录病毒载体是常用的病毒载体之一。转入宿主的细胞后,反转录病毒载体随即整合到宿主细胞基因组内,这种整合的位点是随机的。逆转录病毒载体就可利用这些外壳蛋白包装成病毒颗粒在辅助细胞系内大量扩增。当通过纯化提取获得重组逆转录病毒颗粒后,需要对病毒液的浓度或感染活性进行定量检测。

一般来说,对于病毒颗粒进行定量主要是通过检测纯化的病毒液中DNA的OD260来检测其病毒含量(Quantitation);而对于病毒颗粒的滴度检测(Titer),则需要通过传统的克隆成斑试验或者对病毒特异蛋白的免疫反应试验等检测。Cell Biolabs为逆转录病毒的定量提供了QuickTiter™快速检测方案。

QuickTiter™逆转录病毒快速定量试剂盒采用了专利的捕获胶技术,能专门结合逆转录病毒颗粒,从而大大缩减试验时间,并提高定量的准确度。其定量试剂盒都能对已经纯化的和未纯化的病毒液进行检测。基本的试验大概程序如下:收集病毒上清,使用核酸酶裂解其中的DNA和RNA杂质,剩下的为病毒颗粒、蛋白及蛋白复合物,然后使用捕获胶吸附上病毒颗粒从而分离出来,洗脱下来后,对逆转录病毒颗粒变性分别获得病毒蛋白及病毒核酸,使用荧光染料标记核酸后进行定量分析。

产品名称 货号 产品说明(点击查看说明书)
QuickTiter™ Retrovirus Quantitation Kit VPK-120 荧光法定量,20次分析

Cell Biolabs独有的QuickTiter™ 逆转录病毒快速定量试剂盒通过检测逆转录病毒DNA含量来测定其滴度,可以快速定量已纯化或未纯化的逆转录病毒,通过480/520 nm滤镜荧光仪下读取数据,对照腺标准曲线得出滴度。可以在45-60min内获得数据,检测灵敏,能有效检测1.5 X 109 Viral Particles (VP)/mL浓度内的逆转录病毒,可做20次。

美国著名细胞产品公司Cell BioLabs为逆转录病毒研究人员提供完备的重组逆转录病毒表达系统及其相关产品和服务,产品包括逆转录病毒的最新一代表达系统,针对逆转录病毒滴度低的软肋而专门设计的逆转录病毒浓缩纯化试剂盒,逆转录病毒的快速定量,以及逆转录病毒高效转染试剂和用于包装重组逆转录病毒的包装细胞系等,几乎覆盖反转录病毒研究中的所有技术环节。如果您对上述逆转录病毒包装细胞系感兴趣,请致电021-50837765到上海金畔生物科技有限公司垂询相关的实验解决方案,或索取最新的Cell BioLabs产品资料。

试剂怎么用——蛋白定量


试剂怎么用——蛋白定量

试剂怎么用——蛋白定量




试剂怎么用——蛋白定量

即使是为同一目的所用的试剂种类繁多,同一物质也会有不同的浓度、纯度、规格。

因此,经常有研究人员向我们问到“不知道哪一种适合自己的实验”等。

为了解决这样的问题,小光老师将介绍一些正确区分使用FUJIFILM Wako品牌试剂的方法。

◆蛋白定量试剂


在Western blotting或ELISA中,比较样品之间的蛋白表达水平时,需要评估总蛋白量。蛋白的定量方法有许多种,但需要从检测灵敏度、检测时间以及在表面活性剂和还原剂等条件下是否可检测等角度来选择合适的定量试剂和方法。


● Bradford法(Bradford assay)

CBB G-250能与蛋白质的碱性氨基酸残基、N末端氨基酸以及芳香族氨基酸形成非共价键,最大吸收波长由465 nm变为595 nm。可通过测定595 nm处的吸光度变化来定量蛋白。


● Lowry法(Lowry protein assay)

在碱性条件下,向蛋白溶液中加入双缩脲(Biuret )试剂后,双缩脲试剂中存在的Cu(II)与蛋白形成络合物。随后添加Folin-Ciocalteu试剂,通过色氨酸、酪氨酸和半胱氨酸,使磷钨酸和磷钼酸被还原,蛋白溶液呈现蓝色。可通过测定750 nm处的吸光度来定量蛋白。


● BCA法(Bicinchoninic acid assay)

Lowry法的改良方法。在碱性条件下,Cu(II)与蛋白形成络合物,色氨酸、酪氨酸、半胱氨酸将Cu(II)还原为Cu(I)。向Cu(I)中添加二辛可宁酸(Bicinchoninic Acid),形成在562 nm处呈现出强波长吸收性的深紫色络合物。通过测定此时的吸光度来定量蛋白。


● 邻苯三酚红·钼络合物法(Pyrogallol red-molybdenum assay)

邻苯三酚红和钼(VI)结合,形成最大吸收波长为470 nm的络合物。在酸性条件下,络合物与蛋白的结合使其最大吸收波长变成约600 nm1)。可通过测定600 nm处的吸光度来定量蛋白。

方法

优点

缺点

Bradford法

操作简单。
不易受还原剂和螯合剂的抑制。

受表面活性剂的抑制。

Lowry法

检测灵敏度高。

检测花费的时间长。
受还原剂(硫醇等)的抑制。

BCA法

相对灵敏度高,线性范围广。
不易受表面活性剂和变性剂的抑制。

受螯合剂和还原剂的抑制。

邻苯三酚红·钼络合物法

有效定量尿液和脑脊液中的蛋白

对小分子蛋白的反应性低。

【参考文献】


1)渡辺信⼦,⻲井幸⼦,⼤久保昭⾏,⼭中學: 臨床検査, 30(7), 778(1986).

2)鈴⽊祥夫: ぶんせき,1,1(2018).

◆产品列表

产品编号

产品名称

 包装

Bradford法

168-25911

Protein Assay Bradford Reagent

1 L

BCA法

297-73101

Protein Assay BCA Kit

250 tests

邻苯三酚红·钼络合物法

295-78401

Protein Assay Rapid Kit wako II

100次

东洋ADVANTEC 5C定量滤纸70mm

东洋ADVANTEC 5C定量滤纸

简要描述:

东洋ADVANTEC 5C定量滤纸尺寸(公分/直径):5.5,7.0,9.0,11.0,12.5,15.0,18.5,24.0,30.0,40.0,50.0,60.0,100张/盒
日本TOYO ADVANTEC原装No.5C定量滤纸技术参数:
● 保留中等大少微粒(5-10μm)如CaCO3,PbSO4,CaCO4,MnCO3,ZnCO3,ZnS,AgCl.
● 收集细微微粒(<5μm)如

 

日本TOYO ADVANTEC 5C定量滤纸,主要用途有土壤试验、肥料试验、矿物试验、电解分析、比色分析、药学、动植物学、细菌试验、火yao实验、医学实验、微量金属分析、饮料水分析、沉淀物过滤等。定量滤纸灰分0.01%(其中硬质滤纸No.4A为0.025%),能耐120℃高温,pH范围0~12(其中硬质滤纸No.4A为0~14)。包装100片/盒。有各种尺寸可供选择:φ55mm、φ70mm、φ90mm、φ110mm、φ125mm、φ150mm、φ185mm、φ240mm、φ285mm、φ300mm、φ330mm、φ360mm、φ400mm、φ500mm、485x560mm。
日本TOYO ADVANTEC产品。 

编号 重量g/cm 厚度mm 过滤时间sec 吸水高度cm 湿润破裂强度kPa 保留粒径 
No.3 113 0.23 130 7.5 1.9 5μm 
No.4A 96 0.12 915 4.0 8.8 1μm 
No.5A 97 0.22 60 9.5 1.4 7μm 
No.5B 108 0.21 195 7.0 1.9 4μm 
No.5C 118 0.22 570 6.0 2.4 1μm 
No.6 103 0.20 300 6.0 1.4 3μm 
No.7 87 0.18 200 7.0 1.1 4μm 

1.过滤速度:于20℃时,以10cm水银柱压力,过滤100ml之蒸馏水所需的时间。 
2.吸水速度:于20℃时,一垂直条状过滤纸,10分钟内水由下往上吸附移动距离。 
3.破裂强度:10cm润湿的滤纸所能承受之水柱压力值。 
ADVANTEC 5C定量滤纸用途: 
No.3:过滤速度较快:工业QA/QC定量分析,肥料分析、土壤沉淀物、矿物分析、水泥分析。 
No.4A:硬质滤纸,耐压力及酸碱:过滤细微之结晶沉淀物。 
No.5A:过滤速度快,粗粒子过滤:沉淀物过滤、电解液用比色样品前过滤、环境污染监测取样 
No.5B:过滤速度中等:一般定量分析之沉淀过滤。 
No.5C:细粒子过滤:沉淀物过滤及沉淀物有collodical dispersion倾向的溶液。 
No.6:不溶解的沉淀物过滤:过量稀有金属分析、饮料及火yao分析。 
No.7:精密定量分析:有机物及动植物样品中银,水银分析,微量稀有金属分析。 

尺寸(公分/直径):5.5,7.0,9.0,11.0,12.5,15.0,18.5,24.0,30.0,40.0,50.0,60.0,100张/盒
日本TOYO ADVANTEC原装No.5C定量滤纸技术参数:
● 保留中等大少微粒(5-10μm)如CaCO3,PbSO4,CaCO4,MnCO3,ZnCO3,ZnS,AgCl.
● 收集细微微粒(<5μm)如SrSO4,BaSO4,HgCrO4,和胶体分散液;重量分析
● 重量(g/m2):118
● 厚度(mm):0.22
● 过滤时间(sec):570
● 吸水速度(cm):6.0
● 湿润破裂强度(kPa):12
● 理论大少(μm):1
● 收集效能(%,0.3μmDOP):93
 
ADVANTEC东洋5C定量滤纸日本TOYO ADVANTEC进口No.5C定量滤纸特点:
● zui高质量:初次使用棉纤维
● 灰分:0.01% (No.4A除外- 0.025%)
● 酸洗处理:No.3,5A,5B,5C,6 经盐酸和氢氟suan清洗,再用超纯水清洗至中性. No.4A在用纯水清洗前,再经硝酸清洗.
 
日本TOYO ADVANTEC*No.5C定量滤纸用途:
● 重量分析
● 环境监控

东洋ADVANTEC 5C定量滤纸

东洋ADVANTEC 5C定量滤纸70mm

ADVANTEC东洋厂价直销定量滤纸3号 4A 5A 5B 5C 6号 7号

ADVANTEC东洋厂价直销定量滤纸

简要描述:

ADVANTEC东洋厂价直销定量滤纸定量滤纸灰分0.01%(其中硬质滤纸No.4A为0.025%),能耐120℃高温,pH范围0~12(其中硬质滤纸No.4A为0~14)。包装100片/盒。有各种尺寸可供选择:φ55mm、φ70mm、φ90mm、φ110mm、φ125mm、φ150mm、φ185mm、φ240mm、φ285mm、φ300mm、φ330mm、φ360mm、φ400mm、φ500mm

 

日本TOYO ADVANTEC 5C定量滤纸,主要用途有土壤试验、肥料试验、矿物试验、电解分析、比色分析、药学、动植物学、细菌试验、火yao实验、医学实验、微量金属分析、饮料水分析、沉淀物过滤等。定量滤纸灰分0.01%(其中硬质滤纸No.4A为0.025%),能耐120℃高温,pH范围0~12(其中硬质滤纸No.4A为0~14)。包装100片/盒。有各种尺寸可供选择:φ55mm、φ70mm、φ90mm、φ110mm、φ125mm、φ150mm、φ185mm、φ240mm、φ285mm、φ300mm、φ330mm、φ360mm、φ400mm、φ500mm、485x560mm。
日本TOYO ADVANTEC产品。 

编号 重量g/cm 厚度mm 过滤时间sec 吸水高度cm 湿润破裂强度kPa 保留粒径 
No.3 113 0.23 130 7.5 1.9 5μm 
No.4A 96 0.12 915 4.0 8.8 1μm 
No.5A 97 0.22 60 9.5 1.4 7μm 
No.5B 108 0.21 195 7.0 1.9 4μm 
No.5C 118 0.22 570 6.0 2.4 1μm 
No.6 103 0.20 300 6.0 1.4 3μm 
No.7 87 0.18 200 7.0 1.1 4μm 

1.过滤速度:于20℃时,以10cm水银柱压力,过滤100ml之蒸馏水所需的时间。 
2.吸水速度:于20℃时,一垂直条状过滤纸,10分钟内水由下往上吸附移动距离。 
3.破裂强度:10cm润湿的滤纸所能承受之水柱压力值。 
ADVANTEC 5C定量滤纸用途: 
No.3:过滤速度较快:工业QA/QC定量分析,肥料分析、土壤沉淀物、矿物分析、水泥分析。 
No.4A:硬质滤纸,耐压力及酸碱:过滤细微之结晶沉淀物。 
No.5A:过滤速度快,粗粒子过滤:沉淀物过滤、电解液用比色样品前过滤、环境污染监测取样 
No.5B:过滤速度中等:一般定量分析之沉淀过滤。 
No.5C:细粒子过滤:沉淀物过滤及沉淀物有collodical dispersion倾向的溶液。 
No.6:不溶解的沉淀物过滤:过量稀有金属分析、饮料及火yao分析。 
No.7:精密定量分析:有机物及动植物样品中银,水银分析,微量稀有金属分析。 

尺寸(公分/直径):5.5,7.0,9.0,11.0,12.5,15.0,18.5,24.0,30.0,40.0,50.0,60.0,100张/盒

ADVANTEC东洋厂价直销定量滤纸

ADVANTEC东洋厂价直销定量滤纸3号 4A 5A  5B 5C 6号 7号

GEwhatman54号无灰硬化滤纸定量滤纸1454-917

GEwhatman54号无灰硬化滤纸定量滤纸

简要描述:

GEwhatman54号无灰硬化滤纸定量滤纸Grade 54 : 22 μm
快流速和高湿强使得这个级别非常适用于快速真空过滤去
除难滤的粗颗粒和过滤胶状沉淀,如饲料中乙基羟基喹宁。

定量滤纸―硬化低灰级定量滤纸这些滤纸的zui高灰分含量介于无灰级和定性级之间。特别
适用于布氏漏斗过滤。其坚韧光滑的表面易于回收沉淀物。
其他特性包括高湿强以及化学相容性都类似于硬化无灰级别
Grade 50 : 2.7 μm
可以保留非常细小的结晶物沉淀物,是whatman滤纸中
薄的一种,流速慢,颗粒保留性好。No.50滤纸目前是世界
范围内钻井液测定用标准滤纸,广泛在石油天然气开
采作业流体实验室应用。食品分析中,与Whatman 1PS相
分离纸配合测定肉食品中的脂肪含量。硬化的表面有效地防
止纤维脱落。非常合适用于布氏漏斗、三件套漏斗真空定
性或者定量过滤。很好的湿强,可以在湿润状态下处理沉
淀刮除。在电子工业领域,是几乎没有纤维脱落的载体,适
用于集成电路。
这个级别也提供用于擦拭试验的涂抹用式样(例如,用于放
射核素污染的表面测试)。
Grade 52 : 7 μm
常规过滤用硬化滤纸,保留能力和流速中等,表面坚韧。
Grade 54 : 22 μm
快流速和高湿强使得这个级别非常适用于快速真空过滤去
除难滤的粗颗粒和过滤胶状沉淀,如饲料中乙基羟基喹宁。

GEwhatman54号无灰硬化滤纸定量滤纸

 GEwhatman54号无灰硬化滤纸定量滤纸1454-917GEwhatman54号无灰硬化滤纸定量滤纸1454-917

SPC水分定量受器 8mL – 柴田科学株式会社

上海金畔生物科技有限公司代理日本Sibata柴田科学环境仪器全线产品,欢迎访问日本Sibata 柴田科学环境仪器官网了解更多信息。

SPC水分定量受器 8mL - 柴田科学株式会社

品目コード情報(仕様)

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ガラス器具/体積計

SPC水分定量受器 8mL

SPC水分定量受器 8mL - 柴田科学株式会社
SPC水分定量受器 8mL - 柴田科学株式会社

SPC水分定量受器 8mL - 柴田科学株式会社

SPC水分定量受器 8mL - 柴田科学株式会社

・日本食品化学工学会 新・食品分析法に準じた蒸留式水分測定装置の水分定量受器です。 ・水より比重の軽い溶媒を用いる場合には、5mLの水分定量受器を使います。 ・水より比重の重い四塩化炭素などを用いる場合は、底面接続の8mL水分定量受器を使います。

仕様

品目コード 032030-08
容量 8mL
一目盛 0.1
全高 179
上部 SPC-19
下部 SPC-24
価格(税別) 30,000円
備考 注1)081150-20 蒸留式水分測定装置用注2)底部直結タイプです。

 

関連情報

カタログ
  • 総合カタログ1