Cell Biolabs预装基因的重组腺病毒

常用的基因转染技术是将外源基因导入靶细胞需要一定的载体和导入方法,就哺乳动物细胞的基因转染技术,从初期的磷酸钙转染和电转染,发展到脂质体转染技术,但脂质体对于不再分裂,或处于细胞周期后阶段的细胞,或许多原代培养细胞等不能达到有效的转染效率。

而病毒介导基因转移则很好的解决了细胞转染的问题。作为基因转染的载体之一,腺病毒转染效率及感染滴度都比较高,并且外源基因的表达水平也比传统的转染方法高。并且腺病毒具有病毒颗粒比较稳定,可以纯化和浓缩、可感染非分裂细胞、无随机插入的危险性,宿主范围广的特点。考虑到重组腺病毒的制备程序,Cell BioLabs专门为您制备了预装有多种基因的重组腺病毒,有近200多种外源基因重组腺病毒供您选择。

根据基因的种类,Cell Biolabs预装基因的重组腺病毒主要包括以下类型的基因:对照及报告基因(Controler Cell Biolabs预装基因的重组腺病毒and Reporter Genes)、NFΚB信号通路相关基因(NFΚB Signaling)、细胞骨架调控相关基因(Cytoskeleton Regulation)、MAP激酶信号通路基因(MAP Kinase Signaling)、细胞周期相关基因(Cell Cycle)、血管生成相关(Angiogenesis)、肿瘤抗原基因(Tumor Antigens)、酪氨酸激酶及PKC通路(Tyrosin Kinase and PKCs)等。

每个Cell Biolabs预装基因的重组腺病毒试剂包含有50ul病毒液,共有5×109个腺病毒颗粒溶于10%甘油的TBS溶液里,浓度大约为1×1011病毒颗粒/ml,可以直接用于您的实验。如果您对预装基因的重组腺病毒产品感兴趣,请致电垂询更详细的预转基因产品信息。

美国著名细胞学试剂专家Cell BioLabs为您提供全套的腺病毒技术解决方案,RAPAD®腺病毒表达系统有多种样式供您选择,还有预装有多种重组基因的腺病毒供您直接使用,ViraBind™腺病毒小提及中提大提试剂盒采用了专利技术能让你获得更高滴度和纯度的腺病毒,Cell BioLabs还有转为腺病毒载体用的293AD细胞及高效转染试剂供您选择,如果您对腺病毒产品感兴趣,请请致电021-50837765到上海金畔生物科技有限公司垂询腺病毒相关的实验解决方案,或索取最新的Cell BioLabs产品资料。

CAR非依赖性腺病毒转染——腺病毒高效转染试剂

常用的基因转染技术是将外源基因导入靶细胞需要一定的载体和导入方法,基因转技术则是将纯化的含有靶基因的质粒DNA送入细胞内,并在细胞内表达。转染方法有多种,主要有化学方法如磷酸钙转染、电转染和脂质体转染及生物方法病毒介导基因转移。物理和化学方法转染效率低,而脂质体对于不再分裂,或处于细胞周期后阶段的细胞,或许多原代培养细胞等,如神经细胞,内皮细胞,心肌细胞等等,不能达到有效的转染效率。相反,腺病毒转染效率高。作为基因转染的载体之一,腺病毒具有病毒颗粒比较稳定,可以纯化和浓缩、可感染非分裂细胞、无随机插入的危险性,宿主范围广的特点。

但腺病毒并非对所有细胞的感染效率均令人满意。腺病毒要进入细胞,需先细胞表面的柯萨奇病毒和腺病毒受体(CAR)结合,继后在α-整合素介导下被细胞内吞。腺病毒对一些特定细胞的感染受到限制,可能就是由于这些细胞表面缺乏受体和整合素。

上海金畔生物科技有限公司针对上述腺病毒转染中遇到的问题向您推荐Cell BioLabs的ViraDuctin™腺病毒转染试剂(目录号:AD-200/AD-201),由于使用了专利技术,该转染试剂不依赖于CAR的水平,并且比依赖于CAR的常规转染效率要高最多达12倍,甚至能转染一些腺病毒无法转染的细胞,如造血细胞和干细胞。该转染试剂不但能提高转染的效率,而且还同时提高基因转导进细胞后的表达效率!

产品名称 货号 产品说明(点击查看说明书)
ViraDuctin™ Adenovirus Transduction Reagent (CAR-Independent) AD-200 1次35mm培养皿,10次转染
AD-201 1次35mm培养皿,50次转染
 CAR非依赖性腺病毒转染——腺病毒高效转染试剂 CAR非依赖性腺病毒转染——腺病毒高效转染试剂
ViraDuctin™的增强高效腺病毒转染。 100,000个NIH3T3细胞种植到6孔板上过夜培养,加入50 MOI重组β-Gal慢病毒 (目录号:ADV-002),使用ViraDuctin™腺病毒转染试剂转染NIH3T3细胞,转染48小时后,使用X-gal染色显微镜下观察,左边为不使用ViraDuctin™腺病毒转染试剂对照。
 

美国著名细胞学试剂专家Cell BioLabs为您提供全套的腺病毒技术解决方案,RAPAD®腺病毒表达系统有多种样式供您选择,还有预装有多种重组基因的腺病毒供您直接使用,ViraBind™腺病毒小提及中提大提试剂盒采用了专利技术能让你获得更高滴度和纯度的腺病毒,Cell BioLabs还有转为腺病毒载体用的293AD细胞及高效转染试剂供您选择,如果您对腺病毒产品感兴趣,请致电021-50837765到上海金畔生物科技有限公司垂询腺病毒相关的实验解决方案,或索取最新的Cell BioLabs产品资料。

RAPAd®腺病毒表达系统——Cell BioLabs重组腺病毒载体

基因免疫和治疗是将外源目的基因转移到机体内,表达具有生物学功能的蛋白,达到免疫预防或治疗的目的。病毒载体是常用的基因导入方式之一。腺病毒载体(Adenovirus vector,Adv)、反转录病毒载体、腺病毒伴随病毒载体、单纯疱疹病毒载体、痘苗病毒载体和牛乳头瘤病毒载体等是基因免疫和治疗研究中应用较多的载体。目RAPAd®腺病毒表达系统——Cell BioLabs重组腺病毒载体前,基因治疗临床试验的40%都采用腺病毒载体。

重组腺病毒在科学研究和治疗应用领域都具有很大的潜力。同时作为作为基因转移工具相对于其他病毒载体有多方面的优势。腺病毒可感染分裂细胞和非分裂细胞,转导细胞种类多,如肺细胞、肝细胞、骨细胞、血管、肌肉、脑、中枢神经系统等。其感染细胞滴度和外源基因的表达水平较高,因此重组腺病毒被广泛应用于使用脂质体转染效率较低细胞的基因转导和蛋白表达。当腺病毒进入细胞后,病毒不与染色体发生重组重排,因此不会导致宿主细胞基因的激活和失活。最近,重组腺病毒也被应用于递送RNAi到细胞内。

目前比较成熟的制备重组腺病毒的方法主要有两种,第一种是在腺病毒包装细胞系里,通过包含有目的基因的穿梭载体和含有腺病毒骨架质粒载体(E1/E3功能限制型)之间的同源重组重组,然后使用多蚀斑分离方法分离出目的重组腺病毒,这种方法耗时耗力,一般需要12-18周的时间。第二种是使用pAdEasy系统,通过在大肠杆菌E.coli中的双同源重组功能,同源重组目的基因的穿梭载体和把含有腺病毒骨架质粒载体从而得到重组腺病毒,该方案具有很高的保真性,但是由于需要筛选大量的细胞克隆,虽然比第一种方法省略了一些操作步骤,但是也是较为费时的,整个程序约需要8-9周。

针对以上腺病毒表达系统的不足,Cell Biolabs的RAPAd®腺病毒表达系统提供了一个更快更安全的产生无RCA,且高滴度的重组腺病毒方案。该系统使用了全新的腺病毒骨架基因(缺失左侧ITR、包装信号和E1序列),无需进行pAdEasy的细菌体内的同源重组步骤,无需使用多蚀斑分离方法分离目的重组腺病毒的步骤,因此不管是操作上还是时间上都进行了很大的提升。该腺病毒表达系统较其他系统生长更快,只需要2周时间;并且大大降低了重组形成野生型可复制腺病毒的危险,无E1a,不产生复制型腺病毒。

RAPAd®腺病毒表达系统——Cell BioLabs重组腺病毒载体
通过RAPAd®腺病毒表达系统产生的重组腺病毒。PacI线性化的pacAd5 RSV-GFP载体和pacAd5 9.2-100载体共转染293细胞后,用倒置荧光显微镜观察到转染后病毒颗粒的位置。 

Cell Biolabs的RAPAd®腺病毒表达系统更易实验室人员的使用,操作方法简捷,很容易上手,并且由于对腺病毒骨架载体和穿梭载体都进行了优化,在共转染直到从病毒颗粒中分离过程中都大大简化,同时保证了高效的感染滴度。另外,在Cell Biolabs的RAPAd®腺病毒表达系统中,具有三种启动子模式供您选择。有不含有启动子的,您可以用来表达特异性启动子引导的基因,还有真核基因表达启动子RSV和强力启动子CMV供您选择。

产品名称 货号 产品说明(点击查看说明书)
RAPAd® Universal Adenoviral Expression System VPK-250 通用型腺病毒表达系统
RAPAd® RSV Adenoviral Expression System VPK-251 RSV启动子型腺病毒表达系统
RAPAd® CMV Adenoviral Expression System VPK-252 CMV启动子型腺病毒表达系统

美国著名细胞学试剂专家Cell BioLabs为您提供全套的腺病毒技术解决方案,RAPAD®腺病毒表达系统有多种样式供您选择,还有预装有多种重组基因的腺病毒供您直接使用,ViraBind™腺病毒小提及中提大提试剂盒采用了专利技术能让你获得更高滴度和纯度的腺病毒,Cell BioLabs还有转为腺病毒载体用的293AD细胞及高效转染试剂供您选择,如果您对腺病毒产品感兴趣,请致电021-50837765到上海金畔生物科技有限公司垂询腺病毒相关的实验解决方案,或索取最新的Cell BioLabs产品资料。

cDNA完整性试剂盒-cDNA完整性分析

在cDNA的应用中,很多因素影响着最终cDNA的质量。这就出现了一个问题,当在一个cDNA库中寻找某个未知基因时,可能由于cDNA质量上不是很好而导致不具有代表性。KPL的cDNA完整性分析试剂盒提供了一个在基因表达研究和建库前对cDNA质量进行评估的方案。

结合cDNA完整性试剂盒,您可以使用目前市场上多种类型的热稳定DNA Taq酶。试剂盒内包括适量的PCR缓冲cDNA完整性试剂盒-cDNA完整性分析液,其组分已经被优化,可以同时在一个PCR仪中进行8对引物的扩增。这来源于4个基因的8对引物在细胞内的表达均具有代表性,其扩增的基因长度以及序列在多个来源的细胞组织内均较为保守。包括看家基因GAPDH和Beta-Actin的5′端和3′端部分,低表达的ADP核糖基化因子1(ARF F1)基因的5′端和3′部分端,以及总长为6kb的网格蛋白Clathrin基因的5′端和3′端部分。

使用该cDNA完整性试剂盒对反转录RNA后的产物或者cDNA文库进行扩增时,经上述8对引物扩增的产物长度均在239bp-1000bp内。在扩增结果中,3′端扩增产物说明基因在该系统内表达了,5′端扩增产物则暗示扩增出了全长的完整cDNA。这些引物被设计成通用的引物,即在人类、小鼠、大鼠种属内均能扩增出目的条带,这样在具体的应用时,无需单独的优化PCR程序设计,并且能在同一PCR仪内进行。

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cDNA Integrity Kit 60-06-00 15 reactions 产品说明书

作为美国最早实现亲和素纯化二抗商业化的生物公司,同时也是世界上较大的二抗和底物显色系统的生产商。 KPL一直提供高质量的用于分子生物学、免疫学、细胞生物学和体外诊断试剂及用于蛋白和核酸检测的试剂盒。针对核酸DNA探针标记,KPL有三种生物素标记试剂盒供您选择,分别为随机引物DNA探针标记、PCR DNA探针标记以及反转录RNA探针标记。另外还有多种杂交显色底物及相关产品。如果您对KPL的产品感兴趣,请致电021-50837765 到上海金畔生物科技有限公司免费索取相关产品资料,或者问询您所感兴趣的产品类型。