支原体预防,检测和清除

一说起支原体,估计细胞培养的人员就开始手心冒汗了。细胞培养中的急性污染很容易察觉,而支原体则像慢性毒药一般,杀细胞于无形中。除了非常有经验的老手,很多实验人员都察觉不到支原体的污染,据统计,超过25%的细胞系中感染了支原体,而研究者大多并不知晓。早期,血清可能是最主要的污染源;之后,通过实验室的仪器、培养基或其他试剂慢慢蔓延开来,细胞无不中招。怎样才能根除讨厌的支原体污染呢?让我们先来认识这个小东西。

狡猾的支原体

支原体是一种没有细胞壁的原核生物,大多呈不规则球状或丝状。由于它的直径小,而且形状灵活,所以能逃过实验室常用的滤膜。

检测、检测、再检测

对培养物进行常规的支原体检测非常重要。尽管各个实验室的检测频率不同,从几个星期到几个月不等,不过这主要取决于你们实验室有多少人接触细胞,以及你们引进新细胞的频率。比如美国国立细胞培养中心,它经常从其他实验室获得细胞培养物,就会对每个样品进行检测,并将它们隔离,直至最后证明没有支原体污染。一般来说,每两三个月进行一次定期检测是必要的。如果有新细胞进入实验室,或准备将细胞进行液氮保存,都应该进行检测。当然,如果细胞不大对劲,应立马检测。

支原体检测:

检测频率是一方面,选择合适的检测方法也很重要。到底是PCR、生化分析,ELISA还是免疫荧光呢?PCR应该是检测支原体的理想方法,他综合了几个优势,灵敏、特异、快速、廉价等。细胞培养上清可以直接用来检测,非常方便。Applichem公司提供的高灵敏度PCR Mycoplasma Test Kit(A3744),该试剂盒引物源于支原体基因的保守序列,而且即用型的PCRmix使您的使用更加方便,同时更是提供了阳性对照。当然为了避免假阳性和假阴性,试验中必须设立多种对照:除了阳性对照外,还有阴性对照和内对照。

用Hoechst33258染料检测支原体是很多教科书上推荐的方法。由于支原体含有DNA,能与Hoechest33258染料结合,在500倍数放大情况下,表现为细胞颗粒或纤毛染色。但操作过程较为繁琐,且需要一定的经验辨别支原体,新手可能大不容易掌握。

支原体污染和清除:

如果很不幸,你的细胞已经感染了支原体,怎么办?大部分人的想法可能都是把感染的细胞扔掉,重新开始。一旦感染了支原体,细胞复原的机会很小。所以在液氮中多储存一些备份还是比较明智的选择。

如果你的细胞非常稀有且珍贵,那只能去奋力抢救了。拿什么拯救你,我的细胞?由于支原体没有细胞壁,且代谢慢,故大部分传统的抗生素都不奏效。但是上海金畔公司提供了一些Applichem的支原体清除试剂。Myco-3(A5240),Myco-1(A5222)Myco-2(A5233)。这三类支原体清除试剂是有多种支原体敏感的抗生素研制而成,无细胞毒性。100倍浓缩液直接加入培养基,使用方便。具体的使用方法如下:

Myco-3加入培养基中,每2-3天换液一次,连续处理14天,可有效清除绝大多数支原体污染。

顽固支原体需Myco-1和Myco-2联合使用:Myco-1处理4天后换Myco-2处理3天,如此重复2-3次。

支原体预防:

虽然说支原体可以铲除,但这种劳心劳力的事情估计没有人愿意做,那么平时的预防更重要。上海金畔公司还提供了几样好东西,能预防支原体的污染。具体介绍如下Incubator-Clean(A5230)

用于CO2培养箱的消毒,喷一喷,彻底预防支原体、细菌和病毒等的污染。

Incuwarter-Clean(A5219)

用于CO2培养箱内保持空气湿度的水源消毒,100*即用型浓缩液。

Aquabator-Clean(A5225)

用于水浴的消毒,有效防止各类污染。

需要特别提及的是,液氮罐中也可能有支原体。支原体能耐受液氮的低温,虽然不会增殖,但会污染你的细胞。因此,细胞冻存管还是不要放在液氮内,以免液氮渗进入细胞,而是储藏在液氮的气相中。

不过,预防支原体污染的最佳方法还是良好的细胞培养技巧和正确的态度。虽然这些都是老生常谈,但一旦熟悉了细胞培养,就很容易麻痹大意,时常敲敲警钟还是相当必要的。下面我将上海金畔公司提供的有关支原体预防,检测和清除的产品做一个总结:

支原体预防:

品牌

货号

品名

规格

报价

Applichem

A5230

Incubator-Clean™

500ml/1L

1036/1884

Applichem

A5219

Incuwater-Clean™

100ml

436

Applichem

A5225

Aquabator-Clean™

50ml

436

支原体检测:

品牌

货号

品名

规格

报价

Applichem

A3744

PCR Mycoplasma Test Kit

10T/20T

3124/5192

支原体清除:

品牌

货号

品名

规格

报价

Applichem

A5222

Myco-1

10ml/20ml/100ml

884/1537/6140

Applichem

A5233

Myco-2

10ml/20ml/100ml

695/1052/4145

Applichem

A5240

Myco-3

10ml/20ml/100ml

489/884/3560

除了支原体预防,检测和清除方面的试剂外,上海金畔公司还提供了Applichem细胞培养相关方面的其他试剂,包括各种细胞培养基,氨基酸,抗生素以及糖和盐类。同时也包含了常用的其他生化试剂,如有需要可随时拨打我们的电话:021-50837765.